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第七章中药制剂的含量测定（ContentDetermination）概述一、含量测定的定义中药制剂的含量测定是指用适当的化学方法或仪器分析方法对制剂中某种（些）有效成分或有效部位进行的定量分析，并以其测定结果是否符合药品标准的规定来判断药品的优劣。二、含量测定方法仪器分析法化学分析法滴定法重量法氮测定法挥发油测定法浸出物测定法HPLCTLCSGC分光光度法第一节可见-紫外分光光度法（UltravioletandVisibleSpectrophotometry）一、定义根据被测物质在可见-紫外光的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度对该物质进行定性定量分析的方法称可见-紫外分光光度法。紫外分光光度计工作原理紫外吸收光谱图二、特点本法操作简便，灵敏度高，常用于中成药含测。但本法不具分离功能，常用于总成分的测定。三、定量分析的理论基础朗伯比尔定律A=KCLA为吸收度K为吸收系数C为溶液浓度L为溶液厚度四、药典收载了三种测定方法1.吸收系数法2.对照品比较法3.标准曲线法消咳喘糖浆中总黄酮的测定消咳喘糖浆中总黄酮的测定消咳喘糖浆中总黄酮的测定P230问题：1.对照品溶液与供试品溶液的空白溶液是什么？有什么用？2.对照品是什么？待测物？关系是什么？3.如何测定含量？作业•维生素B1注射液的含量测定序号A空白A1A2样品10.0000.5200.529样品20.5330.513AAA数据记录第二节薄层扫描法（ThinLayerChromatographyScanTLCS）一、定义薄层扫描法（TLCS）系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量分析的方法。二、特点1.具有分离分析双重功能2.可同时平行分离分析多个样品3.流动相用量少且选择范围宽、更换方便4.对样品的预处理要求不高三、仪器及其工作原理1.薄层扫描仪中国药典采用双波长薄层扫描仪。常用的有岛津CS-930型和CAMAG-Ⅱ型等。2.扫描仪工作原理3.测定方式（1）吸收法适用于有紫外（可见）吸收的成分。分为反射法或透射法。常用反射法。（2）荧光法适用于有荧光性质的成分，例如小檗碱等。该法仅采用反射法测定，其灵敏度比吸收法高。4.测定波长（1）单波长一般用于荧光测定法。对玻板和斑点的质量要求较高。（2）双波长主要用于吸收测定法。测定时，样品波长（λs）和参比波长（λR）依次扫描斑点，所测吸收度为ΔA=Aλs－AλR样品波长（λs）：即被测成分的λmax参比波长（λR）：即被测成分的λmin或此波长处无吸收。双波长测定5.光束扫描方式（1）直线扫描适用于规则的斑点，仅用于荧光测定法。（2）锯齿扫描适用于不规则的斑点，测量误差小，被测成分积分值重现性好。6.光源（1）钨灯（W）供可见光（350～800nm）测定，扫描有色成分的斑点。（2）氘灯（D2）供紫外光（200～400nm）测定，扫描有紫外吸收的成分斑点。（3）氙灯（Xe）供荧光测定，发射不连续光谱，常用波长为365nm。四、含量测定方法（外标法）外标法和内标法，中国药典仅采用外标法。1.原理外标法：供试品溶液和对照品溶液分别点加在同一块薄层板上2.类型若标准曲线通过原点，采用外标一点法。若标准曲线不通过原点，采用外标两点法。外标一点法的直线方程：C=FAF为斜率外标两点法的直线方程：21FAFC、吸收系数法为什么仅用于紫外3.操作步骤（1）对照品溶液的制备（2）供试品溶液的制备（3）点样一般要求使用市售薄层板。①外标一点法：至少6个原点对照品（R）2个（同一质量）：2R供试品（S）4个（同一质量）分2组：2S12S2②外标两点法：至少8个原点对照品（R）4个分2组大质量的2个：2R1小质量的2个：2R2供试品（S）4个（同一质量）分2组：2S12S2外标两点法外标一点法（4）展开（5）显色定位供试品色谱中待测斑点的比移值（Rf值）和光谱扫描得到的吸收光谱最大吸收与最小吸收应与对照品相符，以保证测定结果的准确性。（6）扫描应沿展开方向扫描，不得横向扫描。（7）含量计算①外标一点法▲求出供试品被测成分（斑点）的质量Ms=MRXAsAR▲求出供试品中被测成分的含量含量（W/W）=MsX稀释倍数取样量含量（W/片）=MsX稀释倍数X平均片重取样量五、应用实例1.九分散中士的宁的含量测定中国药典规定按干燥品计每包含马钱子以士的宁计应为4.5～5.5mg。供试品溶液的制备取本品10包，混合研匀。精密称取2g置具塞锥形瓶中，精密加氯仿20ml与浓氨试液1ml，轻轻摇匀，称重，于室温下放置24小时，再称重，补足氯仿减失的重量，充分振摇，滤过。精密量取滤液10ml，用硫酸溶液（3→300）分次提取，至生物碱提尽，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加浓氨试液使呈碱性，用氯仿分次提取，合并氯仿液，蒸干，放冷，残渣中精密加氯仿5ml使溶解，作为供试品溶液。薄层扫描法视频•对照品溶液的制备取士的宁对照品，加氯仿制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液。测定法吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液。（16∶12∶1∶4）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。照薄层色谱法进行扫描，波长：λs=254nm，λR=325nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。已知：AR＝19663.07，As＝20617.25，取样量2.098g。解答问题①采用外标一点法还是外标两点法？②采用什么方法显色定位？③计算每包药品中马钱子的含量。（保留两位有效数字）①求出供试品斑点中士的宁的质量②求出供试品中士的宁的含量Ms=MRX=5μlx0.4μg/μlx=2.1μgAsAR19663.0720617.25含量（mg/包）=MsX稀释倍数X标示重量取样量=0.0021mgX5mlX20mlX2.5g/包0.005mlX10mlX2.098g=5.0（mg/包）2.枳实导滞丸中橙皮苷的含量测定中国药典规定按干燥品计算，每1g含枳实以橙皮苷（C28H34O15）计，不得少于20.0mg。供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定（0.5124g），置索氏提取器中，加甲醇90ml，加热回流4小时，趁热滤过至100ml量瓶中，用少量甲醇洗涤容器，洗液与滤液合并，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液。测定法精密吸取供试品溶液5㎕、对照品溶液2㎕与5㎕，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇为展开剂，展开，展距约3cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝的甲醇溶液，放置3小时，在紫外光灯(365nm)下定位。上机进行荧光扫描，激发波长：330nm,线性扫描，测量供试品与对照品荧光强度的积分值（AR(2㎕)=885.7AR(5㎕)=979.4AS=835.6），计算，即得。回答问题：①本法采用的是吸收测定法还是荧光测定法？外标一点法还是外标两点法？透射法还是反射法？直线扫描还是锯齿扫描？光源是什么？②求算枳实（橙皮苷）的含量（保留三位有效数字），并判断是否符合药典规定。(V2-V1)(A-A1)(A2-A1)①求算出斑点中橙皮苷的质量Ms=•C+V1C=•0.05mg/ml+2ul•0.05mg/ml(979.4－885.7)(5ul－2ul)(835.6－885.7)=0.0198ug(1.98X10mg)②求算出枳实（橙皮苷）在药品中的含量含量（mg/g）=MsX稀释倍数取样量=-51.98X10mgX2.5X10ulX1.0X10ul-5555ulX5X10ulX0.5124g3=38.6