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甲型肝炎病毒IgM抗体检测试(北京现代)一、检验目的规范实验室人员操作，保证检验结果的准确性二、预期用途本试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆样本中甲型肝炎病毒的特异性IgM抗体。人群未注射甲肝疫苗者对HAV普遍易感，在我国,15岁以下的儿童及青少年最容易患甲型肝炎，而患过甲型肝炎或感染过甲型肝炎病毒的人可以获得持久的免疫力。甲型肝炎的潜伏期为15-45天，主要表现为急性肝炎，仅少数表现为急性甲型肝炎而出现发热、畏寒、食欲下降、乏力、肝肿大及肝功能异常等症状。特异性血清学检测抗HAV-IgM抗体是早期确诊甲型肝炎的重要指标。三、检验原理本试剂盒利用免疫层析作用原理，在硝酸纤维素膜的检测线处包被鼠抗人IgM单克隆抗体，在质控线处包被兔抗HAV抗体，在金标垫上固定胶体金标记细胞培养的纯化甲肝病毒抗原(HAV-Ag).检测时，如为阳性样本，样本中的抗HAV-igM抗体可与金标垫上的胶体金标记的HAV-Ag发生结合，形成免疫复合物,并在层析作用下沿膜移动，经过检测线时与预包被的鼠抗人IgM单克隆抗体发生结合而凝聚显色，游离的胶体金标记HAV-Ag在质控线处与兔抗HAV抗体发生结合而凝聚显色。如为阴性样本，则只在质控线处发生结合而凝聚显色。四、主要组成成分1、检测卡/条主要组分a、硝酸纤维素膜(NC膜)b、金标垫c、鼠抗人IgM单克隆抗体d、细胞培养的纯化甲肝病毒抗原(HAV-Ag)e、兔抗HAV抗体2,样本稀释液：1瓶，主要组分为0.05MPBS缓冲液(pH7.4).五、储存条件及有效期4~30℃避光密封干燥保存，有效期为12个月。生产日期及失效日期详见标签。检测卡/条开封后，相对湿度低于40%时，需在60分钟内检测；相对湿度高于40%时，开封即用。六、样本要求样本应为血清或者血浆。血清样本按常规方法由静脉采集制作。适用于本试剂盒检测的血浆样本需采用肝素、枸橼酸钠或EDTA进行处理。5天内检测的样本可放置4℃保存，5天后检测的样本需放置在-20℃以下冷冻保存。应避免样本溶血或反复冻融。混浊或有沉淀的样本应离心或过滤澄清后再检测。七、检验方法1、检测前将试剂盒及待检样本平衡至室温，冷冻样本在复融后应经过充分的混匀再行检测。将胶体金检测卡条取出，放在水平工作台面上并做好标记。2、如果待检样本未被稀释，则将其用样本稀释液按1:100的比例稀释(建议将10uL样本加入到1mL样本稀释液中并混匀，即为1:100稀释).取100uL稀释好的待检样本直接加入到卡型产品加样孔(S)或条型加样端(S).15-20分钟观察结果，20分钟后结果无效。3、如果待检样本已被稀释且稀释比例不足1:100,则稀释到1:100.取100uL稀释好的待检样本直接加入到卡型产品加样孔(S)或条型加样端(S).15-20分钟观察结果，20分钟后结果无效。4、如果待检样本已被稀释且比例达到或者超过1:100，则直接取100uL稀释好的待检样本直接加入到卡型产品加样孔(S)或条型加样端(S).15-20分钟观察结果，20分钟后结果无效。八、检验结果的解释1、阴性：仅在质控区(C)出现一条紫红色条带。2、阳性：在检测区(T)和质控区(C)均出现一条紫红色条带。3、无效：在质控区(C)未出现紫红色条带，表明实验无效。此结果可能是由于不正确的操作、试剂盒变质损坏或样本中抗体含量过高引起的。应再次仔细阅读说明书后重复检测或将样本按更高比例稀释后检测，如果问题仍然存在应立即停止使用此批号产品并与当地供货商联系。九、检验方法的局限性1、本试剂盒仅适用于定性检测。2、本试剂盒仅适用于人血清或血浆样本的检测。3、感染初期，lgM抗体未产生或滴度很低会导致阴性结果，应提示患者在7一14天内复查，复查时同时平行检测上次采集的标本以确认是否出现血清学阳转或滴度明显升高。4、免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，其血清学抗体检测的参考价值有限。5、lgM抗体阳性不仅发生在原发感染，在继发感染亦可见gM阳性反应。6、本试剂盒检测结果仅供参考，不作为确诊依据。检测结果为阴性并不排除临床感染，可能系样本中抗体浓度低于本产品的灵敏度所致，对于有怀疑的阴性结果建议采用灵敏度更高的其他类方法进行复核。对检测结果为阳性的样品应复检或使用不同方法学进行确认；确认甲型肝炎病毒感染应结合患者的临床病史、症状及其他诊断结果综合判定。7、在近几个月内接受过输血或其他血液制品治疗的人群，对其阳性检测结果分析应当慎重。8、高滴度病原体特异性gG抗体会与特异性ig小杭体竞争抗原结合部位，会使检测的敏感性降低，lgM可能会出现假性低值或阴性结果。尤其是怀疑先天性病原体感染的新生儿样本，他们的血清中可能含有母亲来源的高水平病原体特异的IgG抗体和胎儿产生的相对较低水平的病原体特异性IgM抗体，因此，对于该类样本的阴性结果应慎重分析。9、脐带血中可能含有源于母体的病原体特异性IgM抗体(胎盘渗漏),因此最好在出生5天内再对婴儿的后续样本进行检测，以证实脐带血样本病原体特异性IgM抗体的阳性结果。建议将新生儿与母亲的血清样本平行进行测试，如果是胎儿的先天性感染，其igM抗体水平会持续存在或呈上升趋势，反之，如果抗体来源于母体，则在平行实验中婴儿的抗体水平会逐渐下降或消失。10、由于孕妇的实验室检查不能可靠地鉴定胎儿患病的风险，故不建议采用本试剂对无症状的母体感染进行筛查，不得将本试剂的检测结果单独作为终止妊娠的依据。11、人血清中的异嗜性抗体可能与试剂中的免疫球蛋白结合干扰实验结果，对于经常接触动物或动物血清制品的人群，应警惕可能出现的异常干扰结果。12接受过小鼠单克隆抗体治疗的患者样本中，可能含有人抗小鼠抗体(humananti-mouseantibodies,HAMA),会影响检测结果的准确性。十、产品性能指标1、阳性符合率：检测10份甲型肝炎病毒IgM抗休阳性企业参考品，符合率=10/10;或者检测甲型肝炎病毒igM抗体阳性国家参考品，结果符合要求。2、阴性符合率：检测10份甲型肝炎病毒lgM抗体阴性企业参考品，符合率=10110;或者检测甲型肝炎病毒igM抗体阴性国家参考品，结果符合要求。3、灵敏度：检溯系列稀释的灵敏度企业参考品，阳性终点不低于1:8稀释：或者检测1:8稀释的甲型肝炎病毒IgM抗体敏度国家参考品，检测结果为阳性。4、精密度：测定精密度企业参考品(n=10),结果全部为阳性，显色均一：或者检测甲型肝炎病毒igM抗体精密性国家参考品，结果符合要求。5、未发现类风湿因子、黄疸(高胆红素)、高血脂等因素对检测结果有影响。6、溶血样本可影响本试剂盒的检测，故检测时应尽量避免使用溶血样本。7、执HAV-1gG抗体、抗HBC-lgM抗体、抗HCV抗体、抗HEV-lgM抗体阳性样本对本试剂盒的检测无显著影响。8、艾滋病毒抗体阳性样本、梅毒螺旋体抗体阳性样本对抗HAV-IgM弱阳性样本及阴性样本均无交叉反应。十一、注意事项1、本试剂盒仅供初步检测HAV-IgM抗体用，对测得的阳性结果需要进一步确证。2、本试剂盒应避光密封干燥保存，谨防受潮。3、本试剂盒组成中不含与人体接触的材料，并且无传染性、致病性等潜在生物安全风险，也无放射性等污染风险，不会对人体造成伤害。十二、参考文献1、贺，熊晓东，梁敬博，等免疫检测用纳米胶体金的制备及粒径控制，稀有金属，2005,29(4)2、GHess.E.Faatz.W.Melchioretal.AnalysisofimmunoassaystocdetectantibodiestohepatsA3、Zhong-JunShao,De-ZhongXu,Yong-PingYan,etal.Detectionofanti-HAVantibodywithdotimmunogoldfitrationassay.WoridJGastroenterol,2003,9(7).