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实验室生物安全2第四章实验室生物安全的主要设备与仪器34常用可防护生物危害的仪器装备移液器生物安全柜高压灭菌锅灭菌器一次性接种环护目镜防护服目的：隔离操作者和感染性样本，防止操作人员被感染安全设备---生物安全柜个体防护装备---防护服；安全眼睛；手套鞋套；呼吸防护装置；紧急冲洗装置等。华盛顿大学中学生游戏－防护5第一节生物安全柜6一、生物安全柜概述（一）概念：生物安全柜（biologicalsafetycabinet,BSC）是操作有感染性的材料时，用来保护操作者本人、实验室环境及实验材料，使其避免暴露于操作过程中产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的负压排气柜。7生物安全柜的基本设计已经历了多次改进。主要的变化是在排风系统增加了HEPA（HighEffieiencyParticulateAirFilter）过滤器。对于直径0.3μm的颗粒，HEPA过滤器可以截留99.97%，而对于更大或更小的颗粒则可以截留99.99%。HEPA过滤器能够有效地截留所有已知传染因子，并确保从安全柜中排出的是完全不含微生物的空气。生物安全柜设计中的第二个改进是将经HEPA过滤的空气输送到工作台面上，从而保护工作台面上的物品不受污染。8生物安全柜的选择生物安全柜保护类型保护对象I级第二、三和四类病原微生物；挥发放射性核素/化学品操作者，环境Ⅱ级A1型第二、三和四类病原微生物操作者，环境和样品外排风型Ⅱ级A2型第二、三和四类病原微生物；痕量挥发放射性核素/化学品操作者，环境和样品Ⅱ级B1型第二、三和四类病原微生物；少量挥发放射性核素/化学品操作者，环境和样品Ⅱ级B2型第二、三和四类病原微生物；挥发放射性核素/化学品操作者，环境和样品III级第一、二、三和四类病原微生物；挥发放射性核素/化学品操作者，环境和样品91.I级生物安全柜I级生物安全柜能够为人员和环境提供保护，但不提供产品保护。用途：I级生物安全柜被用作特殊的密封设备（例如离心、收获设备或小的发酵设备）或可能产生气溶胶的操作过程（例如倒笼子的垃圾，通气培养或组织搅拌）。也可用来操作放射性核素和挥发性有毒化学物品。10B型2.II级生物安全柜II级生物安全柜能够为人员、环境和产品提供保护。用途：进行生物安全水平1、2、3级相关的操作。A型11II级生物安全柜的种类A1型可向室内排风70单向流≥0.38A2型可向室内排风70单向流≥0.50B1型不可向室内排风30单向流≥0.50B2型不可向室内排风0单向流≥0.50吸入口风速（m/s）防护对象Ⅱ级使用者和产品级别类型排风柜内气流循环排风比例(%)12II级A2型生物安全柜室内空气污染的空气HEPA滤过的空气正压污染空气133.III级生物安全柜III级生物安全柜是一个没有开放式观察窗的气密性的结构。对环境、产品和操作者提供最大的保护。用途：操作4级生物安全水平的微生物病原体。14生物安全柜的选择生物安全柜保护类型保护对象I级第二、三和四类病原微生物；挥发放射性核素/化学品操作者，环境Ⅱ级A1型第二、三和四类病原微生物操作者，环境和样品外排风型Ⅱ级A2型第二、三和四类病原微生物；痕量挥发放射性核素/化学品操作者，环境和样品Ⅱ级B1型第二、三和四类病原微生物；少量挥发放射性核素/化学品操作者，环境和样品Ⅱ级B2型第二、三和四类病原微生物；挥发放射性核素/化学品操作者，环境和样品III级第一、二、三和四类病原微生物；挥发放射性核素/化学品操作者，环境和样品15二、生物安全柜的使用（一）个人防护要求：①使用生物安全柜时必须穿个人防护服，戴手套（手套应套在隔离衣的外面）②最好带口罩和帽子，根据需要带防护眼罩或者面罩。③工作之前，操作者应调节凳子高度确保自己的脸在开口之上。16（二）生物安全柜内物品摆放原则：①按照从洁净区到污染区的方向摆放。②所有物品尽可能放在远离前格栅，靠近操作台后缘的位置。③将废弃物袋、盛放废弃吸管的托盘以及吸滤瓶等体积较大的物品放在柜内某一侧。④前格栅不能被实验记录本、仪器设备或者其他物品阻挡。17（三）生物安全柜的操作流程:开启生物安全柜外排风机电源开关缓慢打开操作窗口，窗口开启距离200mm或设定值，一般生物安全柜有窗口极限报警10分钟后即可以开始实验操作操作完毕后注意对生物安全柜进行消毒清洗工作18（四）生物安全柜的使用注意事项①安全柜只有在工作正常时才能使用。②双臂垂直缓慢进入前面的开口，在生物安全柜中等待大约一分钟，以使安全柜调整完毕后才可对物品进行处理。③废弃物应丢弃在生物安全柜内的处理容器中，避免胳膊在前开口处快速移动和频繁进出,以免干扰气流。④尽量避免污染的物品进入洁净区。⑤在生物安全柜内进行操作时，不能进行文字工作。⑥柜内所有的工作要在工作面的中部或后部进行，并能从观察面板中看到。⑦前送风格栅不得被便签、滴管、或其他材料堵住，否则会干扰气流从而可能使材料受到污染，使人员处在暴露状态。⑧清洁和消毒:应在每次工作完成后及一天结束时，使用合适的消毒剂清洁安全柜的表面。⑨柜子的风扇在工作开始前和工作完成后要再各运行5分钟。192021三、超净工作台超净工作台是为保护试验样品而设计，通过吹过工作区域的层流空气防止试验样品受粉尘或细菌的污染。22水平层流的洁净台原理图垂直层流洁净台原理图超净工作台中不能操作感染性的材料，因其气体是正压直接排放。一旦感染性样品放置于工作区域，层流空气将把带有微生物介质的空气吹向前台正在操作的工作人员而产生危险。23生物安全柜与超净工作台的区别名称结构气体压力气体排放保护对象生物安全柜复杂负压净化后排放操作者、样品、环境超净工作台简单正压直接排放样品24除了了解安全柜各项性能指标，最好最快最方便鉴别安全柜安全性能的方法是了解您购买的安全柜是否获得过以下几项主要的国际安全柜认证：EN12469(欧洲生物安全柜统一标准)NSF49(美国生物安全柜标准-二级生物安全柜)AS2252.2(澳洲生物安全柜标准-二级生物安全柜)JISK3800(日本生物安全柜标准)25第二节灭菌器26一、概念：泛指能达到灭菌要求的一切设备，即能在一定时间内杀灭一切活的微生物（包括细菌芽胞）的设备，灭菌的保证水平为10－6（即一件物品经灭菌处理后仍然有微生物存活的概率为10－6）。二、灭菌器的种类：1.高压蒸汽灭菌器―最常用2.干热灭菌器3.环氧乙烷灭菌器和过氧化氢等离子体灭菌器。27三、使用高压蒸汽灭菌器的注意事项1.需要灭菌的各种包裹不应过大过紧。2.放入灭菌器内的包裹‘不能排得太紧。3.定期做好灭菌效果检测。4.易燃易爆物品禁用高压蒸汽灭菌法。5.瓶装液体灭菌时，所盛液体不超过瓶体积的3/4。6.每次灭菌前，应检查安全阀的性能是否良好，使用中也应密切观察运行是否正常，及时发现问题，以免发生意外。7.在使用高压蒸汽灭菌过程中，应注意排尽灭菌器内冷空气。8.达到灭菌时间后，关闭电源，使压力自然下降，压力指针到“0”后，方可打开锅盖。28第五章病原微生物实验室生物安全管理29原核生物型微生物：包括两个菌（细菌、放线菌），四个体（衣原体、支原体、立克次体、螺旋体）.第五章病原微生物实验室生物安全管理----病原微生物的种类及特点30第五章病原微生物实验室生物安全管理----病原微生物的种类及特点原核生物型微生物的特点：1.大部分细菌可在人工培养基上生长繁殖。2.构成细菌毒力的物质基础主要包括细菌的侵袭力(invasiveness)毒素（toxin）.细菌致病性的强弱与细菌的毒力、侵入机体的数量、入侵途径及机体的免疫状态密切相关。3.细菌感染可采用抗生素来治疗。31第五章病原微生物实验室生物安全管理----病原微生物的种类及特点真核生物型微生物：真菌（单细胞真菌和多细胞真菌）特点：1.真菌的致病：浅表真菌感染--如:皮肤癣菌。真菌机会性感染---如：白色念珠菌，新型隐球菌。真菌毒素的致病作用---真菌中毒和引起肿瘤（黄曲霉毒素）。真菌性超敏反应。2.治疗：对细菌抗生素不敏感，必须采用抗真菌药物治疗。32第五章病原微生物实验室生物安全管理----病原微生物的种类及特点非细胞型微生物：病毒病毒结构：核酸（DNA/RNA）,蛋白衣壳，包膜（某些病毒有）；病毒特点：1.在易感的活细胞中寄生。病毒的致病作用主要通过侵入易感细胞、损伤细胞或改变细胞功能而引发。2.病毒感染用抗生素治疗无效，目前理想的抗病毒药物不多。3334第五章病原微生物实验室生物安全管理---病原微生物的种类及特点非细胞型微生物：朊粒（prion）：朊粒的特点：1.一种特殊的致病因子，只含蛋白质，不含核酸。2.朊粒：是一种由正常宿主细胞基因编码的、构象异常的朊蛋白，是人和动物的传染性海绵状脑病（TSEs）的病原体。TSE可通过多种途径传播（消化道、血液、神经及医源性）。3.抵抗力很强，一般高压灭菌条件不能破坏。对患者的血液、体液，手术器械等必须用1mol/LNaOH处理1小时,再高压灭菌134C,2小时。35一、病原微生物的风险等级第一类病原微生物是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物；如:天花病毒、新疆出血热病毒、埃博拉病毒、猴痘病毒等29种病原体。第二类病原微生物是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物；如:汉坦病毒、告致病性禽流感病毒、爱滋病毒、乙型脑炎病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病毒、SARS冠状病毒、西尼罗病毒、炭疽杆菌、布氏杆菌、结核分枝杆菌、霍乱弧菌、鼠疫杆菌等70种。第三类病原微生物是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物；如:肠道病毒、轮状病毒、肝炎病毒、风疹病毒、流感病毒、疱疹病毒、沙眼衣原体、破伤风梭菌致病性大肠杆菌、脑膜炎球菌、伤寒沙门菌、志贺菌、葡萄球菌、白假丝酵母菌等275种第四类病原微生物是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。如:小鼠白血病病毒36二、病原微生物实验室生物安全防护危险度等级生物安全水平实验室类型实验室操作安全设施1级基础实验室-一级生物安全水平基础的教学、科研GMT不需要：开放实验台2级基础实验室-二级生物安全水平初级卫生服务；诊断，研究GMT，加防护服，生物危害标志开放实验台，此外需BSC用于防护可能产生的气溶胶3级防护实验室---三级生物安全水平特殊的诊断、研究在二级生物安全防护水平上加特殊防护服，进入制度，定向气流BSC和其他所用实验室工作所需的基本设备4级最高防护实验室---四级生物安全水平危险病原体研究在三级生物安全防护水平上增加气锁入口，出入淋浴，污染物品的特殊处理III级BSC或II级BSC并穿着正压服，双开门高压灭菌器，经过滤的空气37（一）病原微生物样本的采集病原微生物菌（毒）种、样本及已知或疑含病原体的物质均称为感染性物质。基本要求：1.采集设备与器材：必须有相应的生物安全防护设备与器材。如个人防护用品（隔离衣、帽、口罩、鞋套、手套、防护眼镜等）、防护器材、生物安全防护设施和实验条件等。2.采集人员与操作规范：必须由掌握相关专业知识和操作技能的工作人员进行采集遵循生物安全操作规范具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手段具有详细的样本采集记录具有应急措施与预案3.样本的分类、包装与运输：必须按规定要求对感染性物质行分类、包装与运输。疑似高致病性病原微生物样本，应该采取特殊明确的标示.38（二）病原微生物菌（毒）种的保藏与管理1.菌（毒）种的供应：第一类、第二类菌（毒）种：由卫生部指定的保藏管理机构统一供应，其他任何单位或个人不得对国内、外办理。第三类、第四类菌（毒）种：专业实验室负责供应所管理的菌（毒）种，其他菌（毒）种均由各有关保藏管理中心供应。2.菌（毒）种的使用:使用单位需符合生物安全要求的条件和设备。菌（毒）种应有专人负责管理，建立必要的制度。*使用第一类菌（毒）种的单位，必须经国务院卫生行政部门批准；*使用第二类菌（毒）种的单位必须