蛋白质含量检查方法验证方案

蛋白质含量检查方法验证方案编号：VP-2015-1-015页码：1/18版本号：01修订号：01机密等级：秘密仅限吉林亚泰生物药业股份有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。蛋白质含量检查方法验证方案吉林亚泰生物药业股份有限公司2015年10月蛋白质含量检查方法验证方案编号：VP-2015-1-015页码：2/18版本号：01修订号：01机密等级：秘密仅限吉林亚泰生物药业股份有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。方案批准题目蛋白质含量检查方法验证方案起草人部门职务起草日期审核人部门职务审核日期批准人部门职务批准日期蛋白质含量检查方法验证方案编号：VP-2015-1-015页码：3/18版本号：01修订号：01机密等级：秘密仅限吉林亚泰生物药业股份有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。目录1.目的……………………………………………………………………………………………42.范围和责任……………………………………………………………………………………43.人员确定………………………………………………………………………………………44.引用标准………………………………………………………………………………………45.材料…………………………………………………………………………………………55.1仪器设备……………………………………………………………………………………55.2器材、用具…………………………………………………………………………………56.风险因素分析…………………………………………………………………………………57．内容…………………………………………………………………………………………57.1检查法验证简述……………………………………………………………………………57.2验证方法……………………………………………………………………………………57.3验证步骤……………………………………………………………………………………58.偏差……………………………………………………………………………………………79.附录…………………………………………………………………………………………8蛋白质含量检查方法验证方案编号：VP-2015-1-015页码：4/18版本号：01修订号：01机密等级：秘密仅限吉林亚泰生物药业股份有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。1.目的在进行常规的蛋白质含量检查之前，需验证在实际检验条件下，检验用物品及操作程序不得对检验方法造成不良影响。本试验是关于对本公司产品的蛋白质含量检查方法的验证，结果应显示：本公司产品的蛋白质含量的检查方法符合验证要求。2.范围和责任2.1.本验证方案适用于吉林亚泰生物药业股份有限公司人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）纯化原液、精制卡介菌多糖核酸检验方法的验证。2.2.验证委员会：负责验证方案的审批；验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施；验证数据及结果的审核；负责验证报告的审批。2.3.质量控制部：负责本验证方案、报告的起草与实施，并做好相应的记录；在验证过程中对验证相关SOP进行确认。2.4.验证管理部：负责验证过程中的组织协调，负责审核验证方案和验证报告，并对验证全过程进行跟踪和督导2.5.质量保证部QA：参与验证实施，协助验证部门对过程中出现的偏差进行处理。2.6.质量副总：批准验证文件。3.人员确定确定参与本次验证的人员并要求所有参与人员签名确认。小组职务姓名所在部门签字日期组长孙丽萍质量控制部组员张晶质量控制部组员赵磊验证管理部组员范博质量保证部4.引用标准4.1.《蛋白质含量测定SOP》4.2.《偏差管理SOP》4.3.《中华人民共和国药典》2015版第四部蛋白质含量检查方法验证方案编号：VP-2015-1-015页码：5/18版本号：01修订号：01机密等级：秘密仅限吉林亚泰生物药业股份有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。5.材料5.1仪器设备5.1.1紫外分光光度计、电子天平5.2器材用具5.2.1.比色皿、量瓶、刻度吸管、具塞试管6.风险因素分析评估项目潜在风险风险级别控制措施是否需要确认专属性不能正确检出被测物。中进行专属性试验证明辅料等基质成分对待检成分检出无影响。低重现性不能准确测定出被测物含量。中进行重复性试验证明该方法的精密度可以满足试验要求。低线性与范围不能准确测定出被测物含量。中进行线性试验证明该物质的浓度与含量成正比例关系。低7.内容7.1检查法验证简述蛋白质含量测定系采用福林酚法（Lowry法），蛋白质分子中含有的肽键在碱性溶液中与Cu2+螯合形成蛋白质-铜复合物，此复合物使酚试剂的磷钼酸还原，产生蓝色化合物，同时在碱性条件下酚试剂易被蛋白质中酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸还原呈蓝色反应。在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比，以蛋白质对照品溶液作标准曲线，采用比色法测定供试品中蛋白质的含量。7.2验证方法严格按照蛋白质含量检验方法，准备人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）纯化原液样品、精制卡介菌多糖核酸样品各3批和试验材料，并依据检验方法的操作步骤对样品进行多次检验，验证试验结果均应表明试验的专属性、重现性蛋白质含量检查方法验证方案编号：VP-2015-1-015页码：6/18版本号：01修订号：01机密等级：秘密仅限吉林亚泰生物药业股份有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。及线性与范围均能达到试验要求。7.3验证步骤7.3.1.文件检查7.3.1.1.目的：验证所需的参考文件是完整可用的。7.3.1.2.测试方法：根据资料清单，逐一检查文件的完整性。7.3.1.3.可接受标准：所有必需的文件必须是可用的和经过批准的。7.3.1.4.记录：见附录1。7.3.2.培训7.3.2.1.目的：确认参与验证的人员都经过此方案和相关SOP的培训。7.3.2.2.测试方法：检查培训记录。7.3.2.3.可接受标准：验证执行前，参与验证的人员已进行此方案和相关SOP的培训。7.3.2.4.记录：见附录2。7.3.3.测试用仪器、仪表检查7.3.3.1.目的：对测试用仪器、仪表进行确认。7.3.3.2.测试方法：检查仪表参数和设备登记卡。7.3.3.3.可接受标准：测试用仪器、仪表符合测试要求。7.3.3.4.记录：见附录3。7.3.4.试剂配制7.3.4.1.碱性铜试液：取氢氧化钠10g，碳酸钠50g，加水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g，加水50ml使溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使溶解，将两液混合作为乙液。临用前，合并甲、乙液，并加水至500ml。7.3.4.2.标准品溶液的制备取血清白蛋白(牛)标准品1支，至50ml量瓶中，加水稀释至刻度，用刻度吸管移取10ml至25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。7.3.4.3.供试品溶液的制备精密量取供试品溶液1ml至具塞试管中。7.3.5.线性关系考察7.3.5.1.精密量取对照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml(对照品蛋白质含量检查方法验证方案编号：VP-2015-1-015页码：7/18版本号：01修订号：01机密等级：秘密仅限吉林亚泰生物药业股份有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。溶液取用量可在本法测定范围内进行适当调整），分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，室温放置10分钟，各加入福林酚试液[取福林试液中的贮备液（2mol/L酸浓度）1→16]4.0ml，立即混匀，室温放置30分钟，照紫外-可见分光光度法，在650nm的波长处测定吸光度。7.3.5.2.可接受标准蛋白质浓度和其吸光度在在规定范围内呈线性，相关系数（R2）≥0.995。7.3.5.3.记录：见附录4.7.3.6.专属性7.3.6.1.精密量取空白辅料溶液、供试品溶液与标准蛋白质溶液各1ml置玻璃试管中，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，室温放置10分钟，各加入福林酚试液[取福林试液中的贮备液（2mol/L酸浓度）1→16]4.0ml，立即混匀，室温放置30分钟，照紫外-可见分光光度法，在650nm的波长处测定吸光度。7.3.6.2.可接受标准空白辅料溶液对蛋白质含量测定无干扰；供试品溶液与标准蛋白质溶液在650nm波长处有吸收峰；7.3.6.3.记录：见附录5。7.3.7.重现性7.3.7.1.取供试品人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）纯化原液3批，取精制卡介菌多糖核酸3批，精确称取0.1g样品用10ml水稀释，分别精确量取1.0ml样品，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，室温放置10分钟，各加入福林酚试液[取福林试液中的贮备液（2mol/L酸浓度）1→16]4.0ml，立即混匀，室温放置30分钟，照紫外-可见分光光度法，在650nm的波长处测定吸光度。7.3.7.2.可接受标准每批供试品的平行含量测定结果的相对标准偏差应不得过2.0%。7.3.7.3.记录：见附录6。8.偏差当该方案的某一部分无法实施或实际情况无法达到可接受标准时，需要进行蛋白质含量检查方法验证方案编号：VP-2015-1-015页码：8/18版本号：01修订号：01机密等级：秘密仅限吉林亚泰生物药业股份有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。偏差报告。当偏差出现时，参考《偏差管理SOP》处理，确保所有的偏差得到评估和有效的解决。验证过程中产生的偏差记录在附录7。9.附录9.1.附录1：文件检查确认记录9.2.附录2：培训记录9.3.附录附录3：仪器、仪表校验检查记录9.4.附录4：线性关系检查记录9.5.附录5：专属性检查9.6.附录6：人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）纯化原液含量测定记录9.7.附录7：精制卡介菌多糖核酸含量测定记录9.8.附录8：验证偏差蛋白质含量检查方法验证方案编号：VP-2015-1-015页码：9/18版本号：01修订号：01机密等级：秘密仅限吉林亚泰生物药业股份有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。附录1文件检查确认记录资料名称文件编号存放地点是否可接受蛋白质含量测定SOPJYT-SOP03-5-1-033质量保证部是□否□偏差管理SOPJYT-SOP02-7-0-003质量保证部是□否□测试的符合性□合格□不合格备注：□无（如没有，打勾）检查人：日期：审核人：日期：蛋白质含量检查方法验证方案编号：VP-2015-1-015页码：10/18版本号：01修订号：01机密等级：秘密仅限吉林亚泰生物药业股份有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。附录2培训记录培训课题蛋白质含量检查方法验证方案的培训培训目的使被培训人员掌握蛋白质含量检查方法的验证方法和过程培训内容蛋白质含量检查方法的验证方法培训日期：培训时间：—共小时培训师：培训方式：培训地点：培训人员签到：姓名签字姓名签字姓名签字赵磊张晶范博测试的符合性□合格□不合格备注：□无（如没有，打勾）检查人：日期：审核人：日期：蛋白质含量检查方法验证方案编号：VP-2015-1-015页码：11/18版本号：01修订号：01机密等级：秘密仅限吉林亚泰生物药业股份有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。附录3仪器、仪表校验检查记录仪器、仪表名称型号设备编号生产厂家是否接受？（Y/N）紫外分光光度计UV-2401PC03A-032日本岛津是□否□电子天平FA22403B-164上海舜宇恒平科学仪器有限公司是□否□测试的符合性□合格□不合格备注：□无（如没有，打勾）检查人：日期：审核人：日期：蛋白质含量检查方法验证方案编号：VP-2015-1-015页码：12/18版本号：01修订号：01机密等级：秘密仅限吉林亚泰生物药业股份有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。附录4线性关系检查记录浓度（μg/ml）4080120160200A值曲线方程相关系数r2测试的符合性□合格□不合格备注：□无（如没有，打勾）检查人：日期：审核人：日期：蛋白质含量检查方法验证方案编号：VP-2015-1-015页码：13/18版本号：01修订号：0