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一、Nucleofector细胞核转染技术基本工作原理Amaxa公司的Nucleofector细胞核转染技术是非病毒介导的转染，仪器采用独特的电转参数（包括电流、电压、电击时间长短等）以内存的优化转染程序名体现，同时该技术的核心专利是细胞类型特异性的细胞核转染液，即针对不同的原代细胞和传代细胞有各自特异的细胞类型特异性转染液，为外源基因进入细胞核提供友好界面。结合优化转染程序和细胞类型特异性转染液进行的转染能确保目的基因转入细胞核的效率。该技术直接將外源基因送到細胞核內，因此转染效率不再依赖细胞分裂，可以高效转染分裂增殖较慢甚至于不分裂的细胞。二、Nucleofector细胞核转染技术的组成Nucleofector细胞核转染技术由两部分组成：1.NucleofectorSolution转染液转染过程中，细胞首先悬浮在转染试剂中，选择相应的转染程序，仅需数秒钟，转染结束，将细胞转移到培养基中培养、观察。针对不同的转染细胞都有相应的转染试剂，配合相应Amaxa转染仪的程序，使DNA直接转入细胞核内，转染效率高，易操作，实验周期短。2.NucleofectorDevice转染仪Nucleofector转染仪的原理是基于细胞特异性的细胞核转染液和电穿孔技术的结合。细胞特异性的细胞核转染液为外源基因进入细胞核提供友好界面，降低转染过程对细胞的损伤。Nucleofector转染技术有一般的电穿孔无法比拟地优点，它具有独特地电子参数，每一套电子参数是作为一种程序去适应不同的细胞类型。由于电子参数是预先精心设计好的，因此操作者不用进行电子参数的优化、转染条件的摸索等繁琐的工作，您只需按动按钮选用规定的程序即可。三、Nucleofector细胞核转染技术操作步骤整个操作过程只需四步，非常简单、高效。第1步：处理细胞，精确计数第2步：混合DNA、转染液，重悬细胞，加入转染杯第3步：将转染杯放入转染仪，按键选择相应程序，按start键开始转染，10秒钟左右第4步：取出细胞继续培养四、Nucleofector细胞核转染技术应用1、免疫学/血液学：Amaxa公司的细胞转染仪可以转染原代T、B细胞、免疫细胞系如，K562，JURKAT或白血病细胞如CLL或AML等细胞及单核细胞、巨噬细胞或郎格罕氏细胞、单核细胞派生或CD34阳性细胞派生的树突状细胞的实验方案也已开发出来。Amaxa公司现在可以提供以下转染试剂盒：HumanBCells、HumanTCells、HumanCD34Cells、K562CellsDMSZ）、JURKATCells。2、心血管研究：借助于Nucleofector技术，可进行成体干细胞、CD34阳性细胞、CD34阳性细胞派生的干细胞和间叶干细胞（MSC）等的转染。Amaxa公司现在可以提供一下转染试剂盒：HUVECs（HumanUmbilicalVeinEndothelialCell）、HCAECs、HumanAoSMCs、HumanCD34＋Cells。3、皮肤医学和组织工程：Nucleofector?转染技术能转染人的皮肤纤维原细胞或人的表皮黑色素细胞。Amaxa公司现在可以提供一下转染试剂盒：HumanDermalFibroblasts（转染率70％）、NHEMs。4、肿瘤研究：Amaxa公司现在可以提供一下转染试剂盒：HUVECs、NHEms、HumanDendriticCells、Commonlyusedcellline（CHO-K1（ATCC）、CHO-K1（DSMZ）、COS-7（DSMZ）、HEK293（ATCC）、293HEK（DSMZ）、HeLa（DSMZ）、HepG2（ATCC）、NIH3T3（DSMZ）等。5、神经生物学：可以转染原代神经细胞和细胞系。目前，神经干细胞和星细胞等的实验方案正在开发中。Amaxa公司现可以提供一下转染试剂盒：MouseneuronsChickenneuronsPC-12等。五、AMAXA细胞核转染仪(Nucleofector)技术参数及物理参数1、电转参数电流16VA/fuse0.315A仪器采用独特的电转参数（包括电流、电压、电击时间长短等）以内存的优化转染程序名体现。电压230VAC+10%/-20%电击时间长短根据选用程序定时间长短2、核转染液针对不同的原代细胞和传代细胞有各自特异的细胞类型特异性转染液，为外源基因进入细胞核提供友好界面。3、工作频率50-60Hz结合优化转染程序和细胞类型特异性转染液进行的转染，在50-60Hz的工作频率中，能确保目的基因转入细胞核的效率。4、体积重量30×23×11cm体积小，且轻便，携带方便。2.5kg5、转染方式直接把外源基因导入细胞核非病毒介导的转染快捷、迅速的转染，能在数小时内完成从实验操作到结果分析全过程6、转染效率高效率的转染其它方法难以奏效的传代细胞，在神经生物学、肿瘤研究、免疫学、组织工程学及心血管疾病研究领域中倍受青睐大多数细胞原代细胞的转染效率为50％-70％某些原代细胞，如人表皮纤维原细胞转染效率超过90％7、转染仪突出优势世界唯一直接把外源基因导入细胞核的革命性转染技术世界唯一能高效转染原代细胞和一般方法难以转染细胞，如神经细胞、血液细胞的非病毒介导的转染技术世界唯一能在数小时内完成从实验操作到结果结果分析全过程的转染技术创新的全球共享细胞优化转染程序数据库高效转染质粒DNA，siRNA和Oligo。8、转染仪基本技术原理非病毒介导的转染技术，仪器采用独特的电转参数（包括电流、电压、电击时间长短等）以内存的优化转染程序名体现，同时该技术的核心专利是细胞类型特异性的细胞核转染液，即针对不同的原代细胞和传代细胞有各自特异的细胞类型特异性转染液，为外源基因进入细胞核提供友好界面。结合优化转染程序和细胞类型特异性转染液进行的转染能确保目的基因转入细胞核的效率。该技术直接將外源基因送到細胞核內，因此转染效率不再依赖细胞分裂，可以高效转染分裂增殖较慢甚至于不分裂的细胞