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________________________________________________________________一．目的将一系列化学合成的oligo通过PCR的方法拼装成客户所需的基因序列，并将合成的基因克隆入pMD18-T载体。二.方法1.基因序列的QC：对所需合成的基因全序列进行分析，检查基因内部是否含有复杂二级结构和重复序列。根据序列的具体情况设计合成方案；2.根据基因序列分析的结果，进行单链oligo的设计及合成；3.利用PCR将合成的oligo拼接成完整的基因；4.将合成好的基因装入pMD18-T载体并转化至感受态细胞DH5；5.测序验证重组克隆中基因序列是否与要求相符。三.材料1.克隆载体：pMD18-T（Takara公司，载体图谱如下）：基因插入位点________________________________________________________________四.结果1.重组克隆名称：抗性：Amp质粒DNA体积：20ul含质粒的甘油菌液体积：300ul储存条件：-20°C2.测序验证结果（重组克隆中插入基因序列，经拼接）：五.结论所合成的基因经测序验证符合要求。