Biology GenIII Microplate-中文

BiologGENIIIMicroPlate使用说明书1/11GENIIIMicroPlateTM使用说明书售后服务专线：400-888-6211电话：[phone]传真：[phone]BiologGENIIIMicroPlate使用说明书2/11主要用途GenIII微孔板使用固定在微孔板上的94个不同的生化试验来对广泛的革兰氏阳性和阴性细菌提供表型概况并进行鉴定1,2。Biolog鉴定系统（Microlog-M，MicroStation，Omnilog®）中的软件通过读取GenIII微孔板上所表现出的表型图谱来对细菌进行鉴定。概述BiologGenIII微孔板可以对微生物进行94种表型测试，其中包括：71种碳源利用测试（图1，1-9列）以及23种化学敏感性测试（图1，10-12列）。微生物在测试板上所显示出的“表型指纹”被用来在种的水平上鉴定该微生物。所有必要的营养物质以及生化试剂都被预先填充、干化在96个孔中。四唑类氧化还原染料通过色度的变化来指示微生物对碳源的利用程度以及对化学物质的敏感程度。试验的操作过程非常简单，如图2所示。在平板上按照常规方法划线分离需要鉴定的微生物，然后将分离的到的纯种用棉签挑到接种液（IF）3中，配成指定细胞浓度的菌悬液。将菌悬液按每孔100µl的量加到GenIII板后孵育，以便微生物代谢后产生表型指纹图谱。所有的孔在刚开始的时候都是无色的。当孵育一段时间之后，那些能被细胞利用碳源的孔中的呼吸作用增强了。增强的呼吸作用导致四唑氧化还原染料被还原，变成紫色。而阴性孔则保持无色，就像没有碳源的阴性对照孔（A1）一样。同样，还有一个阳性对照孔（A10）作为列10-12化学敏感性测试的参考。孵育后，通过显紫色孔所产生的表型指纹同Biolog数据库中的数据进行比较。如果找到匹配的，所分离出来的微生物在种的水平上得到鉴定。BiologGENIIIMicroPlate使用说明书3/11A1NegativeControl阴性对照A2Dextrin糊精A3D-MaltoseD-麦芽糖A4D-TrehaloseD-海藻糖A5D-CellobioseD-纤维二糖A6Gentiobiose龙胆二糖A7Sucrose蔗糖A8D-TuranoseD-松二糖A9Stachyose水苏糖A10PositiveControl阳性对照A11pH6A12pH5B1D-Raffinose蜜三糖,棉子糖B2α-D-Lactoseα-D-乳糖B3D-Melibiose蜜二糖B4β-Methyl-D-Glucosideβ-甲酰-D-葡糖苷B5D-SalicinD-水杨苷B6N-Acetyl-D-GlucosamineN-乙酰-D-葡糖胺B7N-Acetyl-β-DMannosamineN-乙酰-β-D-甘露糖胺B8N-Acetyl-D-GalactosamineN-乙酰-D-半乳糖胺B9N-AcetylNeuraminicAcidN-乙酰神经氨酸B101%NaClB114%NaClB128%NaClC1α-D-Glucoseα-D-葡糖C2D-MannoseD-甘露糖C3D-FructoseD-果糖C4D-GalactoseD-半乳糖C53-MethylGlucose3-甲酰葡糖C6D-FucoseD-果糖C7L-FucoseL-果糖C8L-RhamnoseL-鼠李糖C9Inosine肌苷C101%SodiumLactate乳酸钠C11FusidicAcid梭链孢酸C12D-SerineD-丝氨酸D1D-SorbitolD-山梨醇D2D-MannitolD-甘露醇D3D-ArabitolD-阿拉伯醇D4myo-Inositol肌醇D5Glycerol甘油D6D-Glucose-6-PO4D-葡糖-6-磷酸D7D-Fructose-6-PO4D-果糖-6-磷酸D8D-AsparticAcidD-天冬氨酸D9D-SerineD-丝氨酸D10Troleandomycin醋竹桃霉素D11RifamycinSV利福霉素SVD12Minocycline二甲胺四环素E1Gelatin明胶E2Glycyl-L-Proline氨基乙酰-L-脯氨酸E3L-AlanineL-丙氨酸E4L-ArginineL-精氨酸E5L-AsparticAcidL-天冬氨酸E6L-GlutamicAcidL-谷氨酸E7L-HistidineL-组胺E8L-PyroglutamicAcidL-焦谷氨酸E9L-SerineL-丝氨酸E10Lincomycin林肯霉素,洁霉素E11GuanidineHCl盐酸胍E12Niaproof4硫酸四癸钠F1Pectin果胶F2D-GalacturonicAcidD-半乳糖醛酸F3L-GalactonicAcidLactoneL-半乳糖醛酸内酯F4D-GluconicAcidD-葡糖酸F5D-GlucuronicAcidD-葡糖醛酸F6Glucuronamide葡糖醛酰胺F7MucicAcid粘酸；粘液酸F8QuinicAcid奎宁酸F9D-SaccharicAcid糖质酸F10Vancomycin万古霉素F11TetrazoliumViolet四唑紫F12TetrazoliumBlue四唑蓝G1p-Hydroxy-PhenylaceticAcidp-羟基-苯乙酸G2MethylPyruvate丙酮酸甲酯G3D-LacticAcidMethylEsterD-乳酸甲酯G4L-LacticAcidL-乳酸G5CitricAcid柠檬酸G6α-Keto-GlutaricAcidα-酮-戊二酸G7D-MalicAcidD-苹果酸G8L-MalicAcidL-苹果酸G9Bromo-SuccinicAcid溴-丁二酸G10NalidixicAcid萘啶酮酸G11LithiumChloride氯化锂G12PotassiumTellurite亚碲酸钾H1Tween40吐温40H2γ-Amino-ButryricAcidγ-氨基-丁酸H3α-Hydroxy-ButyricAcidα-羟基-丁酸H4β-Hydroxy-D,LButyricAcidβ-羟基-D,L丁酸H5α-Keto-ButyricAcidα-酮-丁酸H6AcetoaceticAcid乙酰乙酸H7PropionicAcid丙酸H8AceticAcid乙酸H9FormicAcid甲酸H10Aztreonam氨曲南H11SodiumButyrate丁酸钠H12SodiumBromate溴酸钠图1：微孔板测试布局BiologGENIIIMicroPlate使用说明书4/11图2：检测步骤BiologGENIIIMicroPlate使用说明书5/11试剂及耗材MicroPlates微孔板:CatalogNo.1030-BiologGENIIIMicroPlates(10/box).AgarCultureMedia琼脂培养基:CatalogNo.71102-BUGAgarwith5%sheepblood(BUG+B);CatalogNo.Bio-M1012-ChocolateAgar;CatalogNo.70101-BiologDehydratedGrowthAgar,500gm(BUGAgar).InoculatingFluid接种液:CatalogNo.72401-IF-A,CatalogNo.72402-IF-B,CatalogNo.72403-IF-C.Inoculatorz™无菌一次性接种棉签:CatalogNo.3321-Steriledisposableinoculatorswabs(20x50);CatalogNo.3323(100x1).StreakerzTM木质无菌一次性接种棒:CatalogNo.3025-Steriledisposablewoodenagarplatestreakers(10x100);CatalogNo.3026(50x20).TransferPipets无菌一次性移液管:CatalogNo.3019-Steriledisposable9inchtransferpipets.Reservoirs无菌一次性V型加样槽:CatalogNo.3102-Steriledisposablereservoirs.MultichannelPipettes多道移液器:CatalogNo.3711-8channelelectronicpipettor.PipetTips无菌移液器吸头:CatalogNo.3201-SterilerackedpipettipsforOvationmultichannelpipettor;CatalogNo.3001-Matrixmultichannelpipettortips.Turbidimeter浊度计:CatalogNo.3531-110voltmodel,CatalogNo.3532-220voltmodel,CatalogNo.3585-240voltmodel.TurbidityStandards标准比浊管:CatalogNo.3441-85%T;CatalogNo.3440-65%T.选择恰当的规程（接种液及细胞浓度）所有的规程都可按相同的方法操作，只需跟居不同情况选择不同的接种液及细胞接种浓度。规程A用于大多数的菌株。规程B适用于少部分强还原性的菌株和产芽孢的菌株（主要是气单孢菌Aeromonas，弧菌Vibrio，革兰氏阳性芽孢杆菌中的一些菌株）。这些菌株在使用接种液A时可能使A-1孔产生假阳性。如果发生这种情况，仅需使用规程B重新实验。规程C1用于缓慢生长的菌，通常是在BUG+B生长24小时形成的菌落非常小（直径小于1mm）的细菌（图2.d）。这些主要是微好氧、嗜CO2的革兰氏阳性球菌及微小杆菌（详见表1）。规程C2用于苛刻生长、嗜CO2、对氧气很敏感的细菌，在BUG+B上生长非常缓慢或根本不BiologGENIIIMicroPlate使用说明书6/11生长。例如，一些从呼吸道样品中分离出来的需要在6.5%CO2下巧克力培养基上培养的革兰氏阴性苛生菌。一些对氧气很敏感的革兰氏阳性细菌，同样需要用接种液C2配制比较高接种浓度的接种液（详见表1）。如果不确定使用何种试验规程，则先尝试规程A。如果是由于A-1孔假阳性造成鉴定失败，则尝试规程B。而如果是由于阳性的碳源代谢反应太少而造成的鉴定失败，则尝试规程C1，如还不理想，则继续尝试规程C2。表1：试验规程规程接种液细胞浓度适用菌种AA90-98%TNearlyall–thisisthedefaultprotocol几乎所有——默认规程BB90-98%TStronglyreducingandcapsuleproducing强还原性和产芽孢的GN(e.g.,someAeromonas气单胞菌属,Vibrio弧菌)andGP(e.g.,someBacillus杆菌,Aneurinibacillus解硫胺素芽孢杆菌属,Brevibacillus短芽孢杆菌属,Lysinibacillus赖氨酸芽孢杆菌属,Paenibacillus类芽孢杆菌属,andVirgibacillus枝芽孢杆菌属)C1C90-98%TMicroaerophilic,capnophilic微好氧，嗜二氧化碳GP(e.g.,Dolosicoccus狡诈球菌属,Dolosigranulum狡诈菌属,Eremococcus另位球菌属,Gemella孪生球菌属,Globicatella球链菌属,Helcococcus创伤球菌属,Ignavigranum不活动粒菌属,Lactobacillus乳杆菌属,Lactococcus乳球菌属,Leuconostoc明串珠菌属,Pediococcus片球菌属,Streptococcus链球菌属,Weissella魏斯氏菌属,andsomeAerococcus气球菌属,Arcano