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操作说明书第3单元1－28CELL－DYN®3200系统操作手册914018H－2001.10概述CELL–DYN3200用于测量、计数和计算血液学参数的原理,在本单元“样本分析循环概述”和“介绍流式细胞计数”中论述。随后的内容讨论了针对白细胞、红细胞、血小板、和HGB的测量步骤。在最后的子单元“操作信息与数据报警”中，讨论了由于所测得的参数超出先前限定的范围之外、样本变态、测量过程中发生干扰、或者探测到变态成分时由设备生成的报警。质量控制方法在第11单元—“质量控制”中论述。网织红细胞与网织红细胞报警在第14单元—“网织红细胞程序包”中论述。在CELL–DYN3200中所使用的两个独立的测量通道是：●用于测定白细胞、NOC、和红细胞/血小板数据的光学通道。●用于测定HGB的血红蛋白通道在每一次设备循环过程中，在测量每个参数之前，样本都经过吸样、稀释和混合的步骤。注意：在R红细胞和F白细胞模式中会发生报警增多的现象。吸样在CELL–DYN3200上有两种模式的全血吸样。操作人员从RUN（运行）屏幕中选择吸样模式。●OpenSamplerMode（开放式进样装置模式）用于从一个已经打开的并置于开放式吸样针下的收集管中吸样。●ClosedSamplerMode（封闭式进样装置模式）用于通过穿刺试管管塞的方式直接从一个闭合的收集管内吸入血液样本。吸样剂量为：开放式模式150µL±10%封闭式模式(CS)240µL±10%自动进样装置(SL)240µL±10%一旦选定了吸样模式，凭借真空/压力作用全血样本被吸入至分液阀。位于分液阀上流端的一个超声波传感器会在血样进入分液阀之前检查其完整性。位于分液阀下流端的一个发光二极管传感器会检查血样以确保正确剂量的血样被传送通过分液阀。样本分析循环概述注意：本文中列出的样本和试剂剂量表示象征性的数值。设备间微小的差异可能引起这些剂量会随之改变。这些差异由出厂设置的内部稀释因素所弥补。操作说明书第3单元2－28CELL－DYN®3200系统操作手册914018H－2001.10吸样以开放式模式或者封闭式模式吸样并将其传送至分液阀。开放式模式中的样本剂量为150µL。封闭式模式中的样本剂量为240µL。样本片断为了分离三份剂量的吸入全血样本旋转分液阀。三份剂量为：20µL用于白细胞稀释1.67µL用于红细胞/血小板稀释12µL用于血红蛋白稀释红细胞/血小板分析1.稀释液/鞘状注射器将2.79mL的稀释液分配至分液阀，穿过分液阀与1.67µL剂量的红细胞/血小板一起被转移至红细胞混合装置内。2.然后将片断和稀释液传送至红细胞/血小板混合装置，在那里以漩涡作用混合稀释液。最终稀释液的比例为1:1675。3.样本转移泵将红细胞/血小板稀释液从红细胞/血小板混合装置中转移至光学流动池样本入口喷嘴处。4.以恒定压力下在鞘液池内将稀释液/鞘液试剂引入激光流式细胞仪。5.随后，样本测定注射器将24µL的红细胞/血小板稀释液注入流动池内，其注射压力（和速度）低于稀释液/鞘液试剂的压力（和速度）。6.围绕在红细胞/血小板稀释液周围的鞘液速度越高，汇集红细胞/血小板稀释液的流动池的特定几何学意义越明显，因此即可以逐个计数个体流动池。7.一束激光聚焦在流动池上。当样本流截断激光束时，在0度、10度和90度处测量被分散的光束用于红细胞，在0度、10度处测量用于血小板。血红蛋白分析1.稀释液/鞘状针管将1.7mL的稀释液分配至分液阀，穿过分液阀与12µL剂量的HGB一起被转移至HGB流动池内。2.在稀释液将HGB液样转移至HGB流动池后，HGB溶解针管将0.9mL的HGB溶解产物分配至行内。HGB溶解产物的入口点位于分液阀和HGB流动池之间。3.将片断、溶解产物和稀释液传送至HGB流动池，在那里以漩涡作用混合稀释液。最终稀释液的比例为1:218。4.将一个低能量发光二极管连在HGB流动池上以测量555纳米处的光吸收值。该吸收值与样本的HGB浓度成比例。白细胞分析按照下列方法视觉分析白细胞：1.白细胞溶解针管将0.973mL的白细胞溶解试剂分配至分液阀，穿过分液阀与20µL的白细胞液样一起被转移至白细胞混合装置。操作说明书第3单元3－28CELL－DYN®3200系统操作手册914018H－2001.102.然后将片断和试剂传送至白细胞，在那里以漩涡作用混合稀释液。最终稀释液的比例为1：50。经稀释的样本在混合舱内停留14秒钟以供红血球溶解。3.样本转移泵将白细胞从白细胞混合装置内转移至激光流式细胞仪样本入口喷嘴处。4.以恒定压力下在鞘液池内将稀释液/鞘液试剂引入激光流式细胞仪。5.随后，样本测定注射器将46.5µL的白细胞稀释液注入流动池内，其注射压力（和速度）低于稀释液/鞘液试剂的压力（和速度）。6.围绕在白细胞稀释液周围的鞘液速度越高，汇集白细胞稀释液流的流动池的特定几何学意义越明显，因此即可以计数个体流动池。7.一束激光聚焦在流动池上。当样本流截断激光束时，在分别位于前向（0度和10度）以及测向（90度和90度直角）位置上的四个不同的探测器测量由流动池分散的光束。脆性与阻溶性红细胞当在正常的患者模式下运行样本时，如果显示F白细胞报警时操作人员可能怀疑出现了脆性，或者如果显示R红细胞和N红细胞报警时操作人员可能怀疑出现了阻溶性红细胞。在样本中含有脆性或者阻溶性红细胞的情况下，一种替代方法可以用于测量白细胞。这种方法的结果被称为核光学计数（NOC）。NOC测量来源于HGB稀释液，如下文所述。附加说明请参考本单元后面段落中的“核光学计数”和“阻溶性红细胞”中的内容。在标本类型屏幕上有两个不同的关键标签，一个用于脆性，另一个用于阻溶性红细胞。有关可应用的标本类型讨论请参考运行菜单软键，子单元：第5单元“操作说明”中的标本类型。当选择了脆性标本类型时，在数据记录器中会同时报告NOC和WOC。NOC数值会在运行屏幕和实验室工作表上白细胞的形式报告。当选择了阻溶性红细胞标本类型时，在数据记录器中会同时报告NOC和WOC。NOC或者WOC会在运行屏幕和实验室工作表上白细胞的形式（取决于算法化决策）报告。注意：当选择了QC标本类型时，在数据记录器中会同时报告NOC和WOC。NOC或者WOC会在运行屏幕和实验室工作表上白细胞的形式（取决于算法化决策）报告。针对脆性和阻溶性红细胞所作的分析具体如下：1.在测量HGB样本之后（参考本单元前面所述的血红蛋白分析），样本转移泵将经过稀释的溶液从HGB流动池中转移至激光流式细胞仪样本入口喷嘴处。2.以恒定压力下在鞘液池内将稀释液/鞘液试剂引入激光流式细胞仪。3.随后，样本测定注射器将140µL的HGB稀释液注入流动池操作说明书第3单元4－28CELL－DYN®3200系统操作手册914018H－2001.10内。4.围绕在HGB稀释液周围的鞘液速度越高，汇集白细胞稀释液流的流动池的特定几何学意义越明显，因此即可以计数个体流动池。5.一束激光聚焦在流动池上。当样本流截断激光束时，使用0度探测器测量被流动池分散的光束。计数溶解细胞的核子作为NOC结果。6.脆性和QC标本类型中的白细胞分析步骤如同本单元前面所述的白细胞分析中的内容。7.阻溶性红细胞模式中的白细胞分析步骤如同上文白细胞分析中所述，但是不同之处在于经稀释的白细胞片断在白细胞混合装置内另外溶解15秒钟。所显示的结果所有数据被传送至数据模块用于分析。结果参数的结果经计算后显示在运行屏幕上。同时结果还被储存在称作数据记录器的记录模式中。冲洗设备1.吸样步骤中残留的样本片断被冲洗入2号废物舱内。2.白细胞和红细胞混合装置内的残留的片断被冲洗入3号废物舱内。3.送至激光流式细胞仪的片断被冲洗入1号废物舱内。漂洗设备1.使用稀释液/鞘液从内部和外部漂洗开放式吸样探针。2.在关闭式模式中，使用稀释液/鞘液从内部和外部漂洗针头。3.使用稀释液/鞘液漂洗白细胞和红细胞/血小板混合装置。4.使用稀释液/鞘液漂洗激光流式细胞仪和样本行试管。5.使用稀释液/鞘液漂洗HGB流动池。流式细胞计数介绍流式细胞计数CELL-DYN3200运用了流式细胞计数的技术分析红细胞/血小板、白细胞、和NOC总数。本单元对流式细胞计数的原理进行了简要介绍。流式细胞计数是一个步骤，其中在一个单一纵列内由一条液流产生的个体细胞和其他生物微粒穿过一道光束。一个或数个传感器通过测量光束的丢失或者分散从而获得细胞或者微粒的物理或化学特点。流式细胞计数能够对大数量的细胞进行快速筛选并且在单一细胞水平上提供定量细胞分析。流式细胞计数的基本成分包操作说明书第3单元5－28CELL－DYN®3200系统操作手册914018H－2001.10括：一个样本收集器和传送器一个流动系统以汇集样本流向一个光源和聚焦光学器件光束收集器、信号探测器、和偏光器数据收集和储存数据显示和分析图3.1光工作台使用光工作台探测光工作台组件包括构成流式细胞计数的成分。描述见图3.1。光工作台的主要目的是当光束穿过流动池时探测被流动池分散的光束。探测步骤在本单元中论述。光源是一束垂直偏振的10mW氦氖激光，其波长为632.8nm。该激光束穿过一个圆柱形镜头后，其形状由圆形改变为椭圆形。然后该光束被引导并穿过一个125µm的裂缝，该裂缝将光束较微弱的外缘阻挡。这一过程产生了一个波长大约为80µm、强度均匀的光束，使池流可以轻度徘徊在流动池内但是仍然暴露在相同的光照强度下。一个成像镜头将聚焦激光束集中在石英流动池上。样品转运注射器将不同的样本稀释液注入激光流式细胞仪内的鞘液流中。以液体流动学的方式将样本聚焦于直径大约为30µm的小液流中。这一经过聚焦的液流使经过稀释的池排列成单一的纵列穿过光束，这样就可以在探测器的传感区域内一次一个地探测细胞。由于小池的平均直径小于经过聚焦的光束，所以小池不会过多分散激光束。如果残留的未经分散的光束可以达到0°和10°（前倾）探测器，那么它将使电子饱和。因此，一个遮蔽条阻挡了0°–1°前倾未经分散的光束。前倾的分散角被引入一个穿孔镜。0°（1°–3°）分散光穿过镜子达到0°硅光敏二极管探1直角（90°和90°D）分散光探测器2激光管3前倾角（0°和10°）光探测器4激光流式细胞仪5激光操作说明书第3单元6－28CELL－DYN®3200系统操作手册914018H－2001.10测器。10°（7°–10°或者更窄的角度）分散光经镜子折射偏离到达10°硅光敏二极管探测器。直角分散光被引入至一个700µm的裂缝，该裂缝阻挡了来自于流动池壁的分散光。然后，一个光束分离器将直角分散光分成两份。一份光被引入至90°PMT。剩余部分被引入穿越一个水平偏振器。只有改变了偏振作用（去偏光）的光方可穿过偏光器到达90°DPMT（使用PMT是因为相对于此角度没有光线分散）。每个探测器收集的光信号被转化为电子信号或者脉冲。这些脉冲根据强度进行数字化处理后被分类为256个通道供每个角度的光束测量之用。如果一个脉冲超出了0°和10°探测器的硬件阈值区间，那么池计数器会计数该脉冲并储存以供进一步评估之用。低于该阈值区间的脉冲不包括在计数之内。来自于每个探测器上的信息以列表模式被收集。这种格式储存了来自于每个通道的四维信息。然后，该数据用于测定WOC鉴别和红细胞、血小板、以及NOC计数。以列表模式的格式存储在软盘上的数据可以随时被修改为分散点图或者经修改后以不同的运算法则分析。激光流式细胞仪在流式细胞计数中，细胞悬浮液经由一个样本试管从混合装置内被转移至一个特殊的带有小型开启顶端的流动舱内。然后，悬浮液被注入一股快速移动、不含细胞的液体（鞘液）中。由于不同的液体流动速率不同，因此它们彼此不会混合。流动细胞的特定几何学以及鞘液的流速迫使细胞进入单一的纵列中。这一过程叫做流体动力学聚焦。（激光流式细胞仪见图3.2）当细胞进入视野剂量（特定的观测区域）时，它们截断了激光束。不同类型的细胞以不同的角度分散光束，从而生成有关细胞大小、内部结构、粒度和表面形态学方面的信息。由细胞产生的光学信号经过探测后被传送至电子脉冲，后者被计