稳定性试验总结

复方双氢青蒿素片稳定性试验总结报告张美义、肖文中、林燕芳、詹利之摘要:复方双氢青蒿素片是由双氢青蒿素、磷酸派喹、甲氧苄啶三种主要成分组成。本品经过强光照射试验、高温试验、高湿试验、室温空气放置试验等影响因素试验，以及加速试验、室温留样考察等试验，证明本品除在高温80℃下，双氢青蒿素不稳定外，其他成分在各种试验条件下均比较稳定。关键词：稳定性影响因素加速试验室温放置一、试验材料与方法1.样品来源：复方双氢青蒿素片，批号：由重庆通和制药有限公司提供，批号：。981020批、981021批、981022批共三批（影响因素试验使用981020批），按临床用药质量标准（草案）检验符合规定。2.主要试验仪器：高效液相色谱仪：岛津LC-10AT色谱柱：YWGC1810μm250×46mm紫外可见分光光度计：TU-1901电子分析天平：SHINKOSH-210R智能溶出度试验仪：ZRS-6型3.试验方法：（1）影响因素试验样品除去外包装，样品在裸露条件下进行观察。①强光照射试验：将复方双氢青蒿素片置于平皿中，于室温3600Lx光下照射，并于5、10天各取样测定一次。②高温试验：把复方双氢青蒿素片置于密闭器皿中，分别置于40℃、60℃、80℃的恒温箱中，在3天、5天、10天各取样测定一次。试验前供试品先准确称重，样品取出时再准确称重。③高湿试验：把复方双氢青蒿素片置于平皿中，放在相对湿度分别为75%及92.5%条件下的封闭干燥器中，恒温25℃，分别于5、10天取样观察和检测。④室温空气放置试验：供试品置于室温空气中，第5、10天各取样测定一次。（2）加速试验：将铝箔包装的复方双氢青蒿素片（模拟上市包装）3个批号的样品放置在40℃，相对湿度为75%的条件下三个月，每月每批样品检测一次（3）室温留样观察试验：将铝箔包装的复方双氢青蒿素片（模拟上市包装）3个批号的样品置于室温条件下，定期分别于0、3、6、12、18、24、36个月，按考察项目进行检测。4.考察项目：①外观色泽；②片芯性状；③溶出度；④含量；⑤色谱检查分（降）解产物。5.考察项目的检测方法：（1）、外观色泽、片芯性状用肉眼观察。（2）、含量：双氢青蒿素取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于双氢青蒿素0.1g）置研钵中，加适量无水乙醇充分研磨，使双氢青蒿素溶解，以无水乙醇约75ml将研钵中的供试品定量移入100ml量瓶中，超声振荡15分钟，放至室温，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置小烧杯中在60℃-70℃水浴上冷风吹干，残留物用乙醚分次提取并通过硅胶层析柱（用3g100-200目的青岛产层析硅胶，干法一次性装入内径约2.5cm的玻璃层析柱中，振摇，均匀下沉，不须预洗），用乙醚50-60ml，以吸管吸取乙醚液，分次洗脱双氢青蒿素，收集乙醚洗脱液在50℃-60℃水浴上冷风吹干，残物用无水乙醇定量移入100ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，静置2小时后，精密量取5ml置50ml比色管中，加2%氢氧化钠溶液20ml，摇匀，置59℃±1℃的水浴中，加热30分钟，取出，立即冷却至室温，作为供试品溶液；另取经五氧化二磷减压干燥至恒重的双氢青蒿素对照品约100mg，精密称定，置100ml量瓶中，加适量无水乙醇，超声振荡使溶解，并稀释至刻度，摇匀，按供试品溶液制备项下自“精密量取续滤液10ml”起，同法操作，作为对照品溶液。以无水乙醇—2%氢氧化钠溶液（1:4）混合液加热30分钟同法操作为空白，照分光光度法（中国药典1995年版二部附录IVA），在238nm的波长处分别测定对照品溶液和供试品溶液的吸收度，计算，即得。磷酸哌喹精密称取上述研细的粉末适量（约相当于磷酸哌喹80mg），置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液约75ml，超声振荡20分钟，放至室温，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，滤过。精取续滤液2ml，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取80℃真空干燥至恒重的磷酸哌喹对照品80mg，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液约75ml，超声振荡20分钟，放置室温加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀。精取2ml置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，作为对照品溶液。用0.1mol/L盐酸溶液为空白，照分光光度法（中国药典1995年版二部附录IVA），在345nm的波长处，分别测定对照品溶液和供试品溶液的吸收度。计算，即得。甲氧苄啶照高效液相色谱法（中国药典1995年版二部附录VD）测定。系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈—0.75%二乙胺（15:85混合后用磷酸调pH至2.5）为流动相，检测波长为271nm。柱温为室温，理论塔板数按甲氧苄啶计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取经105℃干燥至恒重的甲氧苄啶对照品约25mg，置100ml量瓶中，加95%乙醇适量超声震荡30分钟溶解，放冷至室温，用95%乙醇稀释至刻度，摇匀。精取5ml置25ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备精密称取上述研细的粉末适量（约相当于甲氧苄啶25mg），置100ml量瓶中，加入95%乙醇适量，超声波浴中震荡30分钟，使样品溶解，放冷至室温，用95%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精取续滤液5ml置25ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作供试品溶液。测定法：精取对照品溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪、记录色谱图，量取峰面积，按外标法计算供试品中甲氧苄啶的含量。（3）溶出度：取样品，照溶出度测定法（中国药典1995年版二部附录XC第二法），以0.1mol/L盐酸溶液900ml为溶剂，转速为每分钟75转，依法操作，经30min，取溶液20ml，滤过。精密量取续滤液2ml，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取经80℃真空干燥至恒重的磷酸哌喹对照品适量，用0.1mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml约含14μg/ml的溶液，作为对照品溶液照分光光度法（中国药典1995年版二部附录IVA）在345nm的波长处，分别测定吸收度，计算出每片中磷酸哌喹的溶出量。另精密量取上述续滤液5ml，置25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另分别精密称取经105℃干燥至恒重的甲氧苄啶对照品与经80℃真空干燥至恒重的磷酸哌喹对照品适量，用0.1mol/L盐酸溶液溶解并分别制成每1ml约含甲氧苄啶20μg，磷酸哌喹71μg的溶液，作为对照品溶液⑴，对照品溶液⑵。照分光光度法（中国药典1995年版二部附录IVA）取对照品溶液⑵，以271nm为测定波长(λ2)，在366nm波长附近（每间隔0.2nm）选择等吸收点波长为参比波长（λ1），要求△A=Aλ2-Aλ1=0。再在λ2与λ1波长处分别测定供试品溶液与对照品溶液⑴的吸收度，求出各自的吸收度差值（△A），计算出每片中甲氧苄啶的溶出量（4）、色谱检查分（降）解产物方法如下：①精密称取本品细粉适量（约相当于双氢青蒿素50mg）加氯仿5ml搅拌使双氢青蒿素溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另精密称取双氢青蒿素对照品适量，加氯仿溶解使成每1ml中含双氢青蒿素10mg作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典1995年版二部附录VB）试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—醋酸乙酯（8:2）为展开剂，展开后，晾干，喷以0.5%香草醛硫酸溶液[香草醛0.5g加入硫酸—水（4:1）混合液100ml使溶解]加热使杂质斑点显色。各种稳定性试验的供试品与对照品斑点作比较。②精密称取本品适量（约相当于磷酸哌喹80mg），加80%冰醋酸5ml搅拌溶解，滤过滤液作为供试品溶液；另精密称取磷酸哌喹、甲氧苄啶对照品适量，加80%冰醋酸使成每1ml中含磷酸哌喹16mg、甲氧苄啶4.5mg溶液作为对照品溶液，照薄层色谱法（中国药典1995年版二部附录VB）试验，吸取上述溶液各5μl分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿—甲苯—二乙胺（5:4:2）为展开剂，展开后，晾干，置紫外灯（254nm）下检视，各种稳定性试验的供试品与对照品斑点作比较。二、试验结果㈠影响因素试验强光照射试验结果结果详见表1，显示本品在强光照射下稳定。色谱检查分（降）解产物见照片1-1、1-2（附后），5、10天与对照品比较未见改变。表1强光照射试验结果光照时间（天）外观色泽片芯性状溶出度（标示量%）含量（标示量%）色谱检查分解产物0浅绿色长条形薄膜衣片浅黄色P:999999979796D：P：T：98.5100.896.5见色谱图T:9494949396915浅绿色长条形薄膜衣片浅黄色P:9799100999998D：P：T：99.399.996.7与对照品比较没有差异T:93949393949210浅绿色长条形薄膜衣片浅黄色P:9998100979999D：P：T：99.7100.195.6与对照品比较没有差异T:959394929395注：D为双氢青蒿素P为磷酸哌喹T为甲氧苄啶以下同㈡高温试验结果结果详见表2。显示本品在40℃及60℃基本不变，80℃以上双氢青蒿素出现分解斑点，含量也随之下降。色谱检查分（降）解产物见照片2-1、2-2（附后）。表2高温试验结果温度℃受热时间(天)外观色泽片芯性状平均片重(g)溶出度（标示量%）含量(标示量%)色谱检查分解产物0浅绿色长条形薄膜衣片浅黄色P:999999979796D:P:T:98.5100.896.5见色谱图T:9494949396913浅绿色长条形薄膜衣片浅黄色实验前0.6006实验后0.5988D:P:T:99.5101.395.6与对照品比较没有差异405浅绿色长条形薄膜衣片浅黄色实验前0.5983实验后0.5945D:P:T:98.2100.896.4与对照品比较没有差异10浅绿色长条形薄膜衣片浅黄色实验前0.6000实验后0.5922P:100981009810299D:P:T:99.8100.695.1与对照品比较没有差异T:9297939390933浅绿色长条形薄膜衣片浅黄色实验前0.6015实验后0.5954D:P:T:100.7101.593.7与对照品比较没有差异605浅绿色长条形薄膜衣片浅黄色实验前0.6000实验后0.5946D:P:T:99.8104.296.8与对照品比较没有差异10浅绿色长条形薄膜衣片浅黄色实验前0.6022实验后0.5922P:9997991009896D:P:T:97.3100.595.6与对照品比较没有差异T:959395949491温度℃受热时间(天)外观色泽片芯性状平均片重(g)溶出度（标示量%）含量(标示量%)色谱检查分解产物3浅绿色长条形薄膜衣片，绿色比0天浅浅黄色D:P:T:83.0100.996.5P、T与对照品比较没有差异，D出现分解点805浅绿色长条形薄膜衣片，绿色比0天浅黄色实验前0.5999实验后0.5789D:P:T:81.299.895.0P、T与对照品比较没有差异，D出现分解点10浅绿色长条形薄膜衣片，绿色比0天浅黄色实验前0.5983实验后0.5747P:1009498989894D:P:T:83.697.297.2P、T与对照品比较没有差异，D出现分解点T:969395959798㈢高湿度试验结果结果详见表3。显示本品在RH92.5%10天质量稳定。色谱检查分（降）解产物见照片3-1、3-2（附后）。表3高湿度实验结果湿度（25℃）放置时间(天)外观色泽片芯性状平均片重(g)溶出度（标示量%）含量(标示量%)色谱检查分解产物0浅绿色长条形薄膜衣片浅黄色P:999999979796D:P:T:98.5100.896.5与对照品比较没有差异T:94949493969175%（NaCl）10浅绿色长条形薄膜衣片浅黄色实验前0.5980实验后0.6157P:10010099999495D:P:T:101.0101.494.8与对照品比较没有差异T:9495