质谱操作

质谱操作流动相要求推荐使用尽量不使用有机溶剂反相：乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷正相：吐仑、己烷、苯、环己烷、四氯化碳四氢呋喃缓冲液乙酸铵、甲酸铵磷酸盐、柠檬酸盐、碳酸盐酸乙酸、甲酸、三氟乙酸（正离子）硫酸、高氯酸、磷酸、盐酸、磺酸碱氨水季胺、三乙胺、强碱其它清洁剂、表面活性剂、离子对试剂、不挥发的盐在使用液质进行分析的过程中1.如果分析的是生物样品，那么生物样品中的基质可能会增强或者抑制其响应，从而对我们影响我们检测，这就是基质效应；2.如果我们的线性范围很宽，ULOQ很高，那么在分析完ULOQ后，可能在系统中残留一些待测物，这样就会对低浓度的检测有影响，这就是Carryover；3.我们进行MRM或者SRM检测时，不同的离子通道间可能存在相互干扰的现象，这就是Cross-talk。1）基质效应大概用质谱的朋友都遇到过基质效应的影响吧．用基质溶液配制标准曲线或用基质溶液配制一定浓度的标准溶液对检测结果进行校正是一种方法，这种方法在一些检测标准方法中也提到．但在实际检测中，发现即使是同一种基质的不同样品，产生的基质效应也会有不同，有时甚至是相反的．所以更有效的方法还是尽量采用有效的净化方法，如SPE、液液萃取、GPC、冷冻离心等。2）Carryover在实际检测中有遇到。个人觉得对于不同情况的残留应当采取不同的方法来处理。就残留的影响程度来看，对于程度较权的残留，如只是对后一针样品有影响，可以采用穿插空白分析的方法来避免。一般情况下我们在标准曲线进样后都会进一针空白。但对于较严重的空白，则就需要对系统进行一些清洗了。就残留的部位分可分为仪器部件和管路的残留及色谱柱中的残留。对于存在于仪器管路和部件（如进样器）的残留，可将流动相换为异丙醇与水的混合溶液（1：1），并在进样瓶中也装入足够多的相同溶液，连续进样20针左右，一般就可以去除。若是残留在色谱柱中，则需要针对残留物的性质，选用合适的方法对色谱柱进行清洗，而且最好换用一根更适合的色谱柱。3）Cross-talk曾经遇到过。一般情况下，即使两化合物的母离子相同，其子离子也不会完全相同，采用MRM方式，可尽量选用不同的子离子进行分析。但若母离子、子离子、保留时间均相同，则可能是需要改换色谱柱或流动相，看是否可以在液相分离上寻求一些帮助了1.定期震气，更换机械泵油、滤网，必要时仪器除尘等。2.每个项目做完，大约1000个样品后，清洗离子源、样品锥孔、预四级杆等。3.定期对质谱进行期间核查、校准等。仪器状态正常时，以上是最基本的维护。还有一些注意事项：1.每次进完样后，液相和质谱部分都要冲洗干净。2.样品前处理一定要干净。3.非挥发性的盐不能用在质谱中。4.如果遇到放长假，实验室没有人，最最保险的办法就是关机，以免遇到停电的情况。5.质谱所处的工作环境最好要无尘，温、湿度要严格控制。6.样品浓度不能太高，以免污染离子源和四级杆。7.做实验时，经常关注真空、柱压、碰撞气压力等，如遇情况可以及时处理。一般也就是勤冲洗，特别是测完样品后多冲，离子源多清洗，泵油定期检查、更换，滤网及时更换清洗一、做液质，加离子诱导剂得是挥发性的，生物碱用甲酸或乙酸二、我认为要维护好仪器，首先流速不能过大，液质是不能承载过大流速的；其次电压不要加到极限，尤其是正负离子转换时要适当调整；最后是做完样一定要及时冲洗和吹扫管路。注意：做液质时跑一针的时间最好不要超过45分钟，否则仪器会很累。三、LC和MS的条件优化是成功的关键。四、1、由于液质的流速较小（ESI一般为0.2ml/min），所以配置样品的溶剂强度不能太大，尽量小于起始比例，否则，会出现保留时间偏移等问题。2、如果在液相上摸好的条件，注意尤其是流动相的组成要转化成合适LCMS分析的。3、磷酸盐及其他不挥发缓冲盐在离子源会沉淀并堵塞毛细管等，要更换成可挥发的有机缓冲盐。4、缓冲盐会导致离子抑制，因此要控制缓冲液的强度，10mM。5、去污剂、表面活性剂会有离子抑制现象发生，表面活性剂产生的加合物和离子簇会干扰质谱数据，因此作液质联用仪时，不要使用洗涤剂清洗玻璃器皿等容器，如果一定要用，建议超声清洗多次。五、要做好质谱的维护工作，就得从小处着手。比如分析的样品必须要干净，这样既可以保护色谱柱，也可以防止污染质谱；分析了大量的生物样品后，冲洗系统时，先用高比例的水相冲洗，把源也给洗一下，然后再换用高比例的有机相，这时要把柱后管路从源上拿下来，避免柱中的杂质给冲进质谱……细节很多很多，大家在日常应用中尽量注意和避免就可以了。六、注意点1.前处理：样品一定要干净，不管是为了质谱还是为了保护柱子，生物样品提取的好些，如果直接沉淀，一定要注意，尽量高转速12000rpm以上，低温离心，最好离2次（保险一点），转移样品也要仔细，从中间慢慢吸，有时会有漂浮物，岛津的质谱好像做直接沉淀的源比较容易堵，Waters的好些。2.样品浓度：质谱是灵敏度很高的仪器，进样浓度一定不能太高，1－2μg/ml已经可以啦，太高的浓度对仪器来说比较容易造成残留，而且定量也会不准啦。3.流动相：流动相中尽量加易挥发的盐，尽量不要加表面活性剂之类的，容易离子抑制，如果遇到离子抑制，可以试试把你的样品峰往后推推或者改变提取方法，也可以试试用APCI源。如果你的液相是低压混合的，尽量不要跑梯度，那样很费时间，如果没办法，一针又要走很长时间的话，可以考虑切换，只测样品出峰前后的那段时间，这样可以保护质谱。但是如果你用粗柱子，较高流速的也可以考虑跑梯度，如API4000，但要尽量减小死体积。4.冲洗：冲柱子自然不用说了，低有机相和高有机相分别冲一定时间（各至少半个小时以上吧），柱子保存在高有机相中。做完试验，冲源也是很重要的，也是低有机相和高有机相冲，但是时间可以不用那么长，你可以先冲源再冲柱子，或者两者分开冲，个人觉得分开冲好些，这样柱子上的脏东西就不会进到源里面去啦。冲源的时候气可以关小些。七、1、样品必须过0.22μm滤膜过滤，不得有颗粒物；2、上样的溶剂，必须是色谱纯，最好和你的流动相比例一致；3、反相体系，不允许用正己烷之类极性弱的溶剂溶解样品并上样。4、水，自然是纯净水了；5、样品不允许含有金属离子、表面活性剂（不要用洗洁精洗瓶子）、磷酸盐、硼酸盐等不挥发盐；6、淋洗液缓冲溶剂必须用可挥发的，如乙酸、乙酸铵、氢氧化四丁基铵等，色谱纯级别。7、样品pH5~7严禁含有无机或有机强酸强碱。8、六通阀处变三通，最好把没有信号的区域，切换到废液，这样减少源的污染9、定期振气、清洗离子源，换油1、分子量校准所用校正液：AB的仪器API4000,用PPG和PPG3000.进行校正PPG原液可以直接向AB购买，货号：4019362、锥孔清洗清洗雾化室，离子源的外表面，是不需要停真空的；但是如果要清洗里面，或者拆下离子源等清洗，就需要先把真空卸了，然后用甲醇、异丙醇等擦洗，或者拆下来超声，skimmer前面的毛细管堵AB4000QTRAP中的TDF(TimeDelayedfragmentation，时间延迟碎裂扫描)功能应用3、AB4000的离子源腔体比较大，且中间有晕针之类的东西阻碍，内部不是很好清洗，请教下有经验者，是否有必要清洗，该如何清洗？感觉用一段时间后里面还是挺脏的把喷针拔出来，用个长点的镊子夹无尘纸擦擦就行了（沾1：1异丙醇水擦洗、甲醇-水清洗）仪器响应很弱的话，都要进行彻底清洗的（2个月左右1次），清洗的时候都拆下来把内源每个部件都清洗，一般用1：1甲醇水超声清洗（我们的是waters的，Agilent工程师一般习惯用1：1异丙醇水），如果太脏还要加几滴甲酸在里面（注意：电路板或者带塑料的部件不能用甲酸的），必要时候还会用棉棒沾氧化铝粉末从仪器供应商那里买的，普通规格的不要用）擦，氧化铝粉末也可以浸在甲醇或者异丙醇里用棉棒沾。用个长点的不掉屑的海绵签伸进去擦擦就可以了，可以用异丙醇，水，甲醇，依次擦拭即可，注意不要碰到Gas2的陶瓷套管就可以了，那个比较脆弱。