2012-2-15-吉凯基因广州讲座

肿瘤基因研究解决方案韩海雄博士、客户支持经理吉凯基因科技2012年2月联系方式tel：13917379475Email：[e-mail]肿瘤的特点:Cell,Vol.100,57–70,January7,2000,ReviewTheHallmarksofCancer肿瘤的发展进程:Cell,Vol.100,57–70,January7,2000,ReviewTheHallmarksofCancer基因所起的作用肿瘤基因研究的不同层次1.机制研究:分子水平：相互结合，表达调控，翻译后修饰前，降解调控，剪切调控，胞内定位，激酶信号传导等2.功能研究:细胞水平：生长，凋亡，转移，侵润，血管新生，耐药模式动物：移植模型，自发模型，诱导模型，组合模型3.相关性研究:组织水平：肿瘤组织样本基因的表达，定位等临床水平：表达水平与各种临床特点（恶性程度，转移与否，耐药性，生存率等）的相关性已确定肿瘤研究方向，手头有组织样本，但未确定目的基因的研究者已确定目的基因或者做过表达芯片，有候选基因列表明确基因发挥功能的机制已找到基因功能肿瘤(临床，样本)基因机制（分子）功能（细胞，动物）不同类型的合作者对应的研究阶段芯片产品不同阶段研究者的推进过程所涉及产品已确定肿瘤研究方向，手头有组织样本，但未确定目的基因的研究者已确定目的基因或者做过表达芯片，有候选基因列表明确基因发挥功能的机制已找到基因功能肿瘤基因机制功能基因芯片让我们用心，换取您的放心！蛋白芯片让我们用心，换取您的放心！组织芯片IHC：Immunohistochemistry让我们用心，换取您的放心！芯片产品工具产品功能检测不同阶段研究者的推进过程所涉及产品已确定肿瘤研究方向，手头有组织样本，但未确定目的基因的研究者已确定目的基因或者做过表达芯片，有候选基因列表明确基因发挥功能的机制已找到基因功能肿瘤基因机制功能肿瘤功能基因的基本研究方式1.对目的基因的操作包括表达上调,表达下调,敲除,外源添加,化学抑制,竞争抑制2.功能的检测生长,凋亡,转移,血管新生对目的基因的操作1.分子水平(molecular level)•点突变（mutation）•结构域缺失（motif，domain deletion)•融合蛋白（fusion protein）2.细胞水平(cell level)•表达上调(转基因)•表达下调(RNAi)•基因敲除(knockout)•重组蛋白添加(胞外配体添加，可溶受体添加，TAT‐融合蛋白）•化学抑制剂（激酶，合成酶，代谢酶类的抑制剂）3.动物水平(animal model）•转基因过表达技术•基因敲除(knockout)技术，包括全身性敲除，组织特异性敲除，诱导性敲除，多重敲除•病毒感染：慢病毒，腺病毒•蛋白，化合物的添加142006年的诺贝尔生理学奖获得者：Andrew Z. FireCraig C. Mello基因沉默的分子机制模型PTGSTGSRNA介导的基因沉默LongdsRNAdsRNARISCmRNAcleavageChromatinmodificationTranslationarrest让我们用心，换取您的放心！RNAi中使用的siRNA让我们用心，换取您的放心！功能检测function detect1生长proliferation•细胞水平:细胞计数(cell count),MTT,克隆形成(clone formation),细胞周期(cell cycle)检测•动物水平:成瘤试验(xenograft tumor model)2凋亡apoptosis•细胞水平:细胞膜完整性检测(ANNEXIN‐5染色),细胞核DNA量的检测(PI染色),染色体和DNA检测(电泳,TUNEL),凋亡相关蛋白的检测。•动物水平：成瘤试验，瘤体内免疫组化检测3转移metastasis,侵润invasion•细胞水平:细胞形态的变化(morphology),运动能力变化(motility,transwel, scratch),细胞运动相关蛋白表达与成份的变化(cadherin，integrin，vimentin，catenin)•动物水平：接种后血液，淋巴液中癌细胞检测，转移灶检测4血管新生angiogenesis•细胞水平：血管内皮迁移endothelial cell migration，增殖（endothelial cell proliferation），体外血管形成试验（tube formation)•动物水平:成瘤试验，瘤体血管密度检测，鸡胚血管新生实验机制研究不同阶段研究者的推进过程所涉及产品芯片产品工具产品功能检测已确定肿瘤研究方向，手头有组织样本，但未确定目的基因的研究者已确定目的基因或者做过表达芯片，有候选基因列表明确基因发挥功能的机制已找到基因功能肿瘤基因机制功能分子水平研究（分子机制）•结合试验（interaction）：蛋白相互结合(co‐IP)，蛋白与核酸的结合（CHIP）•修饰试验（modification）：磷酸化，泛素化，糖基化，甲基化，sumo化•催化试验（catalysis）：蛋白异构，DNA高级结构改变，化合物的降解代谢文章示例Cell, Vol. 117, 927–939, June 25, 2004Twist, a Master Regulator of Morphogenesis, Plays an Essential Role in Tumor MetastasisFigure1.MicroarrayAnalysisIdentifiedTwisttoBeUpregulatedduringtheMetastaticProgFigure3.SuppressionofTwistExpressionInhibitedtheAbilityof4T1CellstoMetastasizefromtheMammaryGlandtoLungFigure4.SuppressionofTwistExpressionReducedthePresenceof4T1CellsintheBloodCirculationFigure5.TwistInducesanEMTandCellMigrationFigure6.ExpressionofTwistResultsinRepressionofE-CadherinTranscriptionFigure7.ExpressionofTwistinHumanTumorCellLinesandinHumanBreastCarcinomas该文章关键节点：1.Figure1：由芯片结果找出功能基因twist2.Figure6：找出受调控的下游相关基因及功能验证How？Lucky？？OrSomethingimportantbutnotshow？?不同阶段研究者的推进过程所涉及产品芯片产品芯片产品工具产品功能检测已确定肿瘤研究方向，手头有组织样本，但未确定目的基因的研究者已确定目的基因或者做过表达芯片，有候选基因列表明确基因发挥功能的机制已找到基因功能肿瘤基因机制功能表达芯片获得候选基因列表不同阶段研究者的推进过程所涉及产品?芯片产品芯片产品工具产品功能检测已确定肿瘤研究方向，手头有组织样本，但未确定目的基因的研究者明确基因发挥功能的机制已找到基因功能肿瘤基因机制功能高通量筛选!不同阶段研究者的推进过程所涉及产品?芯片产品芯片产品工具产品功能检测已确定肿瘤研究方向，手头有组织样本，但未确定目的基因的研究者已确定目的基因或者做过表达芯片，有候选基因列表明确基因发挥功能的机制已找到基因功能肿瘤基因机制功能表达芯片获得候选基因列表1Cell.2006Mar24;124(6):1283-98.肿瘤功能基因高通量筛选的基本要素•基因操作工具•功能实验方法•数据采集分析系统吉凯基因肿瘤功能基因组学研究平台构成及其优势•基因操作工具：高覆盖lentivirus介导的RNA干扰与过表达文库•功能检测方法：增殖、凋亡、转移、血管新生等功能实验方法•高通量数据采集分析系统：Thermo cellomicsarrayscan高通量筛选系统吉凯基因肿瘤功能基因组学研究平台构成及其优势•高覆盖lentivirus介导的RNA干扰与过表达文库：RNAi文库覆盖18738个基因过表达文库覆盖14592个基因两库同时覆盖12176个基因国内最早的RNAi服务提供者，提供高效，快速，经验证，低成本的基因操作工具。吉凯基因肿瘤功能基因组学研究平台构成及其优势•功能检测方法：增殖、凋亡、转移、血管新生等功能实验方法1.多年不断优化验证以及研发，构成了完整的肿瘤功能试验方法平台2.累积8年的科研实验服务经验，总数超过5000个的科研服务合同经验，每年超过2000个以上的科研服务合同的执行能力针对肿瘤基本功能的常规实验检测方法w生长：细胞计数，MTT，克隆形成，细胞周期(PI染色)检测w凋亡：ANNEXIN‐5染色，PI染色，凋亡相关蛋白的检测w转移：细胞形态的变化，运动能力变化，相关蛋白检测w血管新生：血管内皮迁移，增殖，体外血管形成试验吉凯基因肿瘤功能基因组学研究平台构成及其优势•高通量数据采集分析系统：Thermo cellomicsarrayscan高通量筛选系统1.功能试验的数据量化研发（快速准确提取出最能反应实验结果特征的量化信息）2.功能试验与高通量仪器的整合（将功能试验调整到适合高通量仪器的检测模式）3.前期1000个基因的高通量功能筛选（高通量平台的完整运转，历时1年时间的磨合调整）基于芯片的基因功能高通量筛选流程让我们用心，换取您的放心！细胞或组织基因芯片（I）表达验证（细胞，组织）（III）高通量功能筛选（IV）2000 Genes~30Genes4‐5 Genes文献分析判断（II）~60Genes机制筛选(干扰后表达芯片）（IV）？Genes高通量具体实施案例文章关键推进步骤的具体实验使用吉凯基因的产品发表的文献020406080100120140200520062007200820092010IF值18%1IF值223%2IF值331%3IF值524%5IF值109%IF值105%NatureCellNaturemedicineCancercellNeuronJBiolChemMolCellBiol……PublicationnumberDistributionNatMed.IF=27.136Treatmentofcerebralischemiabydisruptingischemia-inducedinteractionofnNOSwithPSD-95.ZhouL,LiF,XuHB,LuoCX,WuHY,ZhuMM,LuW,JiX,ZhouQG,ZhuDY.2010Dec;16(12):1439-43.Epub2010Nov21.产品/服务领域目的细胞基因名称后续检测过表达慢病毒细胞生物学皮层神经元细胞（原代培养）HumannNOS-N1-133WesternBlot、小鼠脑皮层注射让我们用心，换取您的放心！NatCellBiol.IF=19.527CytosolicFoxO1isessentialfortheinductionofautophagyandtumoursuppressoractivity.ZhaoY,YangJ,LiaoW,LiuX,ZhangH,WangS,WangD,FengJ,YuL,ZhuWG.2010Jul;12(7):665-75.Epub2010Jun13.产品/服务领域目的细胞基因名称后续检测慢病毒介导的RNAi肿瘤生物学肺癌H1299、结直肠癌HCT116、子宫颈癌HeLa细胞HumanCytosolicFoxO1RT-PCR、WesternBlot、免疫共沉淀、免疫荧光、裸鼠成瘤、免疫组化让我们用心，换取您的放心！吉凯基因科技有限公司让我们用心，换取您的放心！让我们用心，换