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1高效液相色谱药物分析中的应用【摘要】在药物分析技中，现代分析方法包括色谱技术随药品质量要求的不断提高而得到推广及普及。而高效液相色谱法作为现代分离测试的重要方法，被广泛运用于各个领域。因其选择性好、灵敏度高、可准确分析微量组成、分析痕量样品等特点已成为医药学分析领域发展最快捷的分析技术。【关键词】高效液相色谱；药物分析；应用一、高效液相色谱的发展在所有色谱技术中，液相色谱法（liquidchromatography，LC）是最早（1903年）发明的，但其初期发展比较慢。到了20世纪60年代后期，人们在经典柱色谱法的理论与实践的基础上，将已经发展得比较成熟的气相色谱法的塔板理论等有关理论及先进实验技术应用到液相色谱上来，使液相色谱得到了迅速的发展。特别是填料制备技术、检测技术和高压输液泵性能的不断改进，使液相色谱分析实现了高效化和高速化。具有这些优良性能的液相色谱仪于1969年商品化。从此，这种分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography，HPLC），也称高压液相色谱法或高速液相色谱法。经过几十年的发展，现代高效液相色谱技术不断的完善和改进，在输液泵、检测器、色谱柱及数据控制和处理系统等方面采用许多专利技术，使泵的稳定性和重复性、检测器的灵敏度和检出能力、色谱柱的分离效能和应用范围及数据处理软件的智能化得到了很大的提高。在我国药物分析的发展过程中，随着仪器的普及，HPLC方法已成为我国药物分析论文中使用频率最高的一种分析方法，在质量标准中的应用也迅速增加。仪器的自动化包括自动进样、数据处理以及检测器的多样化：UV、DAD、ELSD、荧光及化学检测器均有应用。同时分析柱固定相的研究也非常活跃，相继出现了分子烙印手性固定相、棒状液相色谱柱、不同功能团球形聚合物固定相及硅胶改性的各种液相色谱固定相[1]。后来出现的LC-MS-MS、LC-NMR、LC-NMR-MS等色谱联用技术的应用也活跃起来，为解决HPLC定性差的弱点提供了许多方法。2由于高效液相色谱法具有分离效能高、分析速率快、应用范围广等诸多优点，已经成为药物分析中最终呀的分析方法及医学研究与诊断常用的方法之一[2]。二、高效液相色谱在中药质控中的应用中药学的研究是通过不同单味药与复方药的配伍方法及煎煮时间等来发掘中药中化学成分的变化规律与药理联系。在实际应用中，最为简捷有效的方法为选取长度足够的色谱柱，设置合适的时间以温和流动相进行洗脱[3]。HPLC是一种非常有效并普遍使用的中药分析方法。HPLC不像GC那样受样品挥发性和热稳定性的限制，可用于高分子、极性、离子和热不稳定化合物的分离分析。在中药的定性、定量和杂质检查等方面都发挥了重要作用。药材及饮片551个品种中国，有281个建立了含量测定，其中那个采用HPLC分析方法的有217个，占总数的77%，植物油脂和提取31个品种中，有22个建立了含量测定，采用HPLC分析方法的为17个，亦占总数的77%。成方制剂和单味制剂564个品种中，有438个建立了含量测定，采用HPLC分析方法的为412个品种，占中暑的94%。从使用的各种分析方法看，HPLC占绝对优势。中药质量的评价与控制是中药现代化研究的重要内容，而要控制质量，测定其与功用有关活性成分的含量是关键。中药有效成分的测定已成为评估中药质量的重要标志，实践经验证明，HPLC的适用范围较广，可用于分析高沸点、热不稳定性、大分子量的样品，是一种非常有效和普遍适用的中药有效成分的分析方法。例如，杨红美等[4]测定虎杖及其提取物中自藜芦、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚4种有效成分的含量，方法的平均回收率及RSD分别为：白藜芦醇101.8%，1.7%；大黄素96.2%，1.4%；大黄酚99.7%，1.0%；大黄素甲醚98.6%，0.97%。该方法可用于虎杖药材及其提取物的质量控制。付辉政等[5]采用HPLC法测定复方柳菊片中的蒙花苷。经方法学考察及阴性对照实验表明方法专属性强,处方中其他成分对蒙花苷的测定无干扰，且方法简便、快速、准确、重现性好。三、高效液相色谱在化学药物质控分析中的应用从20世纪90年代末期开始，绝大多数的化学药物都采用HPLC法替代TLC法进行有关物质检查或色谱纯度分析，常用的检测器为紫外或DAD检测器。为了提高检测的专属性和灵敏度，近年来LC-MS在有关物质检测中的应用逐步普3及，甚至还有LC-NMR等其他联用技术在药品杂质分析中得到应用。在HPLC法中，保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数，可用于药物的鉴别。如中国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致。头孢拉定、头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液、曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别。王维剑[6]等以ODS柱，甲醇-0.5%乙酸（1：9）为流动相，DVD检测器，波长329nm测定了一种新型抗肿瘤药替莫唑胺，为申报新药提供了数据。王小平[7]等还采用HPLC指纹图谱法对蜂胶和树胶进行鉴别。这些应用无疑为进一步完善、开发药物鉴别的方法提供了一种新的思路。还有，用高效液相色谱法测定含量可以消除药物中的杂质，制剂中的附加剂及共存的药物对测定的干扰。例如：杜洪光[8]等采用HPLC法测定苯甲酸雌二醇贴片中苯甲酸雌二醇(EB)的含量，李立[9]等用HPLC法测盐酸青藤碱含量，操作简便，回收率高，快速准确。四、高效液相色谱在抗生素质控分析中的应用中国药典从1995年版开始，高效液相色谱法被广泛用于对抗生素药品的质控分析。抗生素是由微生物或其他方法产生的化学物质，在高度稀释的情况下仍具有抑制或杀灭其他微生物的性能。抗生素的分离、分析和定量测定是药物分析中较困难的领域。采用较多的方法是微生物法，分光光度法和化学方法，但所需时间较长，专一性较差。对结构、组分等较清楚的抗生素药物，高效液相色谱分析将逐步取代传统的生物测定。目前，各国药典中应用高效液相色谱分析技术，对抗生素进行质量控制的项目包括鉴别、组分分析、含量测定和相关物质测定等。例如，罗红霉素为新一代大环内酯类抗生素。中国药典2000年版收载，采用微生物效价测定其含量，不仅操作时间长，且操作繁琐，影响因素较多，现行版药典采用高效液相色谱法对其进行鉴别，有关物质检查及含量测定，该法具有操作简便、快捷、灵敏度高、结果准确等特点，从而为控制罗红霉素胶囊的质量提供了切实可行的方法。五、结语高效液相色谱具有专属性强、灵敏度高等特点，既可用于分离也可用于定量4分析，适用于各种各样的有机化合物，因此在药物成分的分离与测定方面能够充分发挥其它分析方法无与伦比的优势。而且随着计算机软件的开发、专家系统的应用、检测手段的进步、各种联用技术的出现以及其他一些相关问题的解决，在医药研究中将会发挥越来越重要的作用。参考文献：[1]田颂九等.色谱在药物分析中的应用.化学工业出版社.2005.12[2]孙毓庆,王延琮.现代色谱法及其在药物分析中的应用.科学出版社.2005[3]中国医学科学院.常用中草药高效液相色谱分析[M].北京:科学出版社,1999:50[4]杨红美,陈波,曾建国,等.HPLC同时测定虎杖及其提取物中4种有效成分的含量[J].中国中药杂志,2006,31(3):202-4[5]付辉政,万凯化,刘兰祥,等.RP2HPLC法测定复方柳菊片中蒙花苷[J].中药,2008,39(2):222-3[6]王维剑,张军仁,庞华.替莫唑胺含量测定方法的研究[J].药物分析杂志,2003,23(5):344[7]王小平,林励,白吉庆.HPLC指纹图谱法鉴别蜂胶和树胶[J].陕西农业科学,2009,55(3):133-135[8]杜洪光,赖宇宏,王丽等.HPLC法测定苯甲酸雌二醇贴片中药物的含量及其体外透皮释放量[J].北京化工大学学报.2004,31(2):110-112.[9]李立,许军,王如意等.正清风痛宁口崩片制备工艺及质量标准研究[J].时珍国医国药.2008,19(5):1195-1196