细胞病理学基本检验技术

中国医科大学盛京医院病理科舒红第八章细胞病理学基本检验第一节细胞病理学基本检验技术定义细胞病理学采集、制备、染色观察是通过检查细胞的形态学特点，进行健康和疾病的筛查、诊断和研究体检、普查诊断、鉴别诊断本节内容提要一.标本采集二.标本涂片三.涂片固定四.涂片染色五.观察涂片六.细胞学诊断七.细胞学诊断的质量保证一.标本采集原则：准确选择采集部位标本保持新鲜，尽快制片尽量避免血液及粘液等混入方法简便，操作轻柔，减少病人痛苦，防止并发症和肿瘤扩散采集、制备、染色、观察原则：准确选择采集部位标本保持新鲜，尽快制片尽量避免血液及粘液等混入（干净）方法简便，操作轻柔，减少病人痛苦，防止并发症和肿瘤扩散标本分类１.脱落细胞：自然脱落细胞非自然脱落细胞2.细针穿刺细胞自然脱落细胞标本：咳出：痰排出：尿、便挤出：乳头分泌物等。非自然脱落细胞标本：如气管，宫颈，皮肤，乳头等。穿刺细胞标本：浆膜腔积液肿瘤穿刺采集、制备、染色、观察自然脱落细胞标本特点包括痰，尿液，乳头分泌物，精液等。容易获取标本能多次采样成分复杂，含多种细胞成分，炎细胞，微生物及外源污染物细胞成分保存较差采集、制备、染色、观察包括痰，尿液，乳头分泌物，精液等。容易获取标本能多次采样成分复杂，含多种细胞成分，炎细胞，微生物及外源污染物细胞成分保存较差霉菌污染0926963,男,78岁,临床诊断:肺炎送检标本:痰污染的虫卵0926965,男,79岁,临床诊断:肺癌?送检标本：痰痰细胞退变非自然脱落细胞标本特点包括气管刷，宫颈刷，支气管灌洗液及皮肤乳头等刮取标本。直接从病变器官表面采样纤维镜能从器官内部获取标本能获取上皮下的病变标本细胞成分保存良好，但诊断标准不同于脱落细胞采集、制备、染色、观察宫颈细胞学的取材与制片方法1刮取法2刷取法气管刷细胞涂片肺泡灌洗液0925790,男,66岁CT：左肺上叶尖后段不整形实变影气管镜：未见病变细胞学诊断：腺癌穿刺细胞标本1体腔抽出液：胸腹水、心包液、脑脊液等；2细针穿刺吸取液：如体表肿物穿刺液，超声定位下肝、胰腺和肾脏穿刺液；借助内窥镜技术穿刺等。理论上适用于任何器官简便，费用低，创伤小良好的穿刺和制片技术可获得最佳结果需外科病理学知识有一定局限性，如采样不足等采集、制备、染色、观察二.涂片制备原则标本新鲜玻片清洁操作轻柔涂片牢固涂片数量采集、制备、染色、观察方法直接涂片：将新鲜标本直接涂在载玻片上１.推片法２.涂抹法３.压拉涂片法间接涂片：将各种液体标本进行浓缩处理后再涂片４.离心法５.液基薄层法６.细胞块法１.推片法采集、制备、染色、观察２.涂抹法采集、制备、染色、观察３.压拉涂片法采集、制备、染色、观察４.离心法和细胞离心法离心法：大量液体标本，如浆膜腔积液、尿液、灌洗液。细胞离心法：将细胞直接离心到载玻片上，制成单层细胞涂片。适用于少量液体、中等量细胞。采集、制备、染色、观察５.液基细胞学（1）薄层法ThinPrep采集、制备、染色、观察宫颈病变好发部位(2)SurePathPrep法标本乙醇固定悬浮于密度梯度溶液中涡旋法使聚集的细胞团和粘液分开密度梯度离心法使细胞成分和非上皮细胞成分分开细胞在重力作用下沉淀到载玻片上传统细胞学状况传统的制备方法（一般是涂抹法）标本质量不一致细胞分布不均杂质成分阻碍视线一个样本需涂多张涂片标准化的细胞学技术液基细胞学卓越的标本质量清晰的背景标准化的标本制备过程均匀的细胞分布一个样本只需一张具有代表性的标本剩余样本可进行其它多种测试（免疫组化等）提高细胞学测试的敏感性和特异性痰低分化鳞癌改善背景细胞清晰度TCTTCT6.细胞块法将标本中的细胞聚集成团，形成与传统组织块类似的细胞块，制成细胞切片，然后可以进行特殊染色。三.涂片的固定※目的：是保持细胞的自然状态，防止细胞自溶和细菌导致的腐败。固定液能凝固和沉淀细胞内蛋白质和破坏细胞内的溶酶体酶，保持细胞自然状态，使细胞结构清晰，易于着色。因此标本愈新鲜，固定愈及时，细胞结构愈清晰，染色效果愈好。采集、制备、染色、观察固定不及时的腺癌细胞固定及时的腺癌细胞固定方法：湿固定：是使细胞的原生质脱水、蛋白质凝固达到固定的目的。可引起细胞皱缩。干燥固定：是通过空气蒸发的方式达到固定目的。细胞有增大的趋势。固定方法的比较A未固定细胞B平铺在玻片上C湿固定D干固定固定液种类：乙醚乙醇固定液；氯仿乙醇固定液；95%乙醇固定液。固定时间：15－30分钟四.常用染色方法巴氏染色法（papanicolaoustain）（湿固定）苏木素-伊红（H-E）染色法瑞氏-吉姆萨染色法采集、制备、染色、观察巴氏染色法（Pap)巴氏染色的来历Papanicolaou(帕帕尼古拉乌)子宫颈抹片这个检验是Papanicolaou医生在公元1928年在美国首度提出。因为简便易行，而且可以早期发现子宫颈癌或不正常细胞以便早期治疗，而后风行全世界，成为一个妇科不可或缺的重要例行检查。为了纪念这位医师的贡献，在国际上这个检查就叫作Paptest或者Papsmear。Papanicolaou医生1883年生于希腊。他的父亲也是一位医生，曾经当过Kymi市的市长。他21岁时完成医学教育，到德国留学研究生殖细胞学，1913年移民美国。他最初研究天竺鼠阴道分泌物内的细胞周期变化。以后用相似的方法去研究妇女阴道内分泌物及细胞的变化。据说全世界第一个Paptest就是用在她的妻子身上。于1925年在纽约以一群自愿的妇女做研究时，在一个妇女的子宫颈抹片上偶然发现一些癌细胞。这个发现使他异常振奋，而后经一系列研究后，于1928年发表一个学术演讲：阴道内的细胞可以用来早期诊断妇女的癌症。Papanicolaou医生因心脏病病逝于1962年。他的妻子Mary，也是一位伟大的、自我牺牲的妇人，她是Papanicolaou医生第一个Paptest的妇人，她曾经作过他的细胞检查员，帮忙训练许多技术人员。以后20年时间，Papanicolaou医生基本上以她作定期的阴道细胞检查，而后完成一本妇人周期性阴道细胞变化的著作。每次Papanicolaou医生介绍他的妻子时，总是说：这是我的太太也是我的受害者。总之，一个成功的男人背后，常常会有一个伟大无私的女人。苏木素-伊红（H-E）染色法瑞氏-吉姆萨染色法其它特殊染色组织细胞化学染色：过碘酸Schiff染色（PAS糖原）、三色染色、普鲁氏蓝染色等。免疫细胞染色：识别细胞类型、来源等。识别微生物的染色：Gram染色，PAS，六胺银，Ziehl-Neelsen染色（抗酸染色）等。胸水细胞块免疫组化染色BerEp4染色五.显微镜观察方法○○视野采集、制备、染色、观察用10倍物镜进行浏览发现异常细胞后，用40倍观察六.细胞病理学诊断细胞形态学判断的基本原则1细胞数量2细胞排列的结构特征3细胞核的特征4细胞质的特征5背景6人为因素１.细胞数量多－增殖指数增加（肿瘤或增生）少－荒凉，注意观察0926164,女，65岁，临床诊断：胸水既往史：骨髓瘤细胞量多宫颈TCT涂片细胞量正常细胞量少2.细胞结构特征涂片中的细胞常常缺乏结构特征正常细胞－有极向、平铺恶性细胞－重叠：异常粘附性、异常聚集性。宫颈涂片中正常的宫颈柱上皮腺癌C0924833，女，65岁，腹水3.细胞核特征良性－大小一致，核质细，核膜光。恶性－大小不一，核质粗，核膜厚。宫颈TCT涂片正常高度病变胸水涂片腺癌4.细胞质的特征核质比增加嗜碱、粘液、空泡、吞噬胞浆内粘液5.涂片背景：包括细胞成分和非细胞成分（血、粘液、炎症、微生物）恶性－坏死背景（肿瘤素质）6.人为因素：制片不佳；污染。七细胞学诊断的质量保证标本采集：尘细胞，宫颈细胞数量制片过程：离心，固定，染色阅片诊断：全面，结合临床及组织学不断理论学习复查会诊（IQAM,EQAM.P274）定期随访：金标准痰中的尘细胞宫颈涂片上的柱上皮细胞病理学诊断的优势安全简便，痛苦少，不良反应少，可重复取材，设备要求低，费用廉。快速准确，检出率约60%，适合大规模防癌普查及高危人群的随访观察，可发现早期癌和原位癌。检查范围大病例举例12007年3月检查病理号200704767女，51岁临床诊断：宫颈炎宫颈TCT：细胞量＜5000，诊断:ASC-H2007年8月活检病理号200719604：ABCDE共5点活检病理诊断：慢性宫颈炎2009年9月复查细胞号0926170诊断:上皮内高度病变2009年9月手术病理诊断：宫颈CINⅢ累及腺体病例举例2TCT诊断：高度病变病理活检：慢性宫颈炎半年后：病理活检：宫颈鳞状细胞癌脱落细胞学诊断的不足有一定的误诊率：细针吸取可有10%假阴性，痰细胞学检查可有20%假阴性，少数出现假阳性。具体部位难确定肿瘤分型困难非肿瘤性疾病诊断研究少细胞学诊断为二级诊断，需经活检组织学证实后，方可进行治疗。细胞病理学诊断是一个复杂的过程，千万不能过分强调最终结论的重要性。why?①细胞病理学检查的影响因素多！患者信息：年龄和性别；激素水平；临床表现；其它检查结果病变部位：局部解剖；影像学特征细胞特点：细胞量；类型；分布和粘附性；背景其它信息：电镜；免疫组化；流式细胞仪；细胞遗传学②没有标准迄今为止，没有一项细胞形态学特征或一套规范的细胞形态学标准能准确可靠地鉴别良恶性细胞。