Trizol法提取细胞总蛋白

Trizol法提取细胞总蛋白1.提取细胞总RNA吸去上清后，按0.3ml乙醇/1mlTrizol加入中间层和下层有机相，混匀，室温静置3min；2.4℃，2000rpm，离心5min，取上清转移至新的EP管中（约0.8ml）；3.加入1．5ml异丙醇沉淀蛋白质，室温放置10min；4.4℃，12000rpm，离心10min，弃上清；5.用2ml含有0．3mol／L盐酸胍的95％乙醇洗涤蛋白质沉淀，室温放置20min，4℃，7500rpm离心5min；重复洗涤三次；6.无水乙醇洗涤一次沉淀，室温放置20min；7.4℃，7500rpm，离心5min；8.真空干燥沉淀，加入适量l％SDS，55℃振荡溶解3h；9.不溶物再以4℃，10000rpm离心10min，取上清即为细胞总蛋白溶液，分装后于-80℃保存待用。全程大约需配制试剂0.3M盐酸胍95%乙醇溶液：2.866g盐酸胍，加100ml95%乙醇。1%SDS溶液：1gSDS溶解于100ml去离子水。