生物样品前处理方法

生物样品前处理方法姓名：朱文兵学号：201312282995专业：药剂学CompanyLogo生物样品前处理的目的▲将药物从缀合物或结合物中释放出来，以测定药物的总浓度。▲将微量药物从复杂的介质中纯化、富集出来。▲为适应和符合分析方法所要求的专属性、灵敏度等。▲防止分析仪器的污染，提高测定灵敏度、准确度、精密度和选择性等。CompanyLogo生物样品前处理的重要性▲进行体内药物分析时，除了极少数情况下只需将样品进行简单处理就可以直接测定外，都要采取分离、净化、浓缩、化学衍生化等预处理技术，为测定创造良好的条件。▲样品预处理是体内药物分析中极为重要的环节，也是分析中最困难、最繁复的工作。▲由于药物在体内存在形式不同、待测药物浓度低、生物介质组分繁杂、待测药物类型众多、理化性质各异等原因，所以样品前处理过程的好坏会直接影响到样品的测定结果。CompanyLogo生物样品前处理的考虑因素▲药物的理化性质和存在形式▲待测药物的浓度范围▲选用的生物样品类型▲样品预处理与分析技术的关系▲药物测定的目的CompanyLogo生物样品前处理-有机破坏法▲湿法破坏硝酸-高氯酸法、电热消化器法、电热板消化法、烘箱消化法。▲干法破坏高温电阻炉灰化法、低温等离子灰化法。▲氧瓶燃烧法▲注意事项有机破坏法均是破坏有机物，只能进行生物样品中的元素分析。CompanyLogo生物样品前处理-沉淀蛋白法▲蛋白沉淀法简介蛋白沉淀法一般是通过加入有机溶剂、酸碱盐等使蛋白质变性而与待测组分分离。适用于强极性药物或两性类药物，这些药物难以用有机溶剂从血浆中提取。▲常用蛋白沉淀的方法盐析法有机溶剂沉淀法等电点沉淀法离子型聚合物沉淀法CompanyLogo生物样品前处理-沉淀蛋白法▲甲醇、乙睛、丙酮和乙醇是沉淀蛋白常用的有机溶剂，中性盐常用的有硫酸铵、氯化铵等。当药物水溶性强时，一般使用甲醇和乙腈。当对药物定量回收要求高时，一般使用三氯醋酸。通常1体积的血浆加入1.5体积以上的乙腈或加入2体积以上的甲醇可以除去98%以上的蛋白质。▲沉淀蛋白法优点操作简便易行▲沉淀蛋白法缺点此法仅除去了蛋白质，内源性杂质并没有除去。运用此法处理后的样品浓度会被稀释，不利于检测。此法所得样品不能用光谱法检测。。CompanyLogo生物样品前处理-液液萃取法▲液液萃取法简介多数药物是亲脂性的，在适当的有机溶剂中的溶解度大于在水相中的溶解度，而生物样品中的大多数内源性杂质是强极性的水溶性物质。因而用有机溶剂萃取一次即可除去大部分杂质。▲溶剂的选择原则了解药物与溶剂的化学结构与性质，按相似相溶原则选用。对药物的未电离分子可溶，而对电离形式的分子不溶。沸点低、易挥发、浓集，与水不相混溶，无毒，不易燃烧。不易形成乳化，具有较高的化学稳定性和惰性。CompanyLogo生物样品前处理-液液萃取法▲液-液萃取法优点应用范围广提取效率较高▲液-液萃取法缺点操作费时有机溶剂用量大易发生乳化现象▲液-液萃取新技术液相微萃取（LPME）是在LLE基础上发展起来的，与LLE相比，LPME可以达到相同的灵敏度，同时所需的溶剂更少，比较适合于生物样品中痕量、超痕量物质的测定。LPME一般包括分散液相微萃取、单滴液相微萃取以及中空纤维液相微萃取等。CompanyLogo生物样品前处理-固相萃取法▲固相萃取法简介固相萃取技术（SPE）是从上世纪八十年代中期发展起来的，广泛运用于医学、制药、环境、食品等领域。固相萃取法（SPE）就是用固体物质作为萃取剂，采用高效、高选择性的固定相，进行萃取的样品预处理技术。▲固相萃取法原理以吸附剂为固定相，当液体样品通过固定相时，保留其中某些组分，再用适当溶剂冲出杂质。然后用少量溶剂洗脱，从而达到分离、净化与浓缩的目的。CompanyLogo生物样品前处理-固相萃取法▲固相萃取法适用范围大多数液体生物样品的前处理（如血浆、尿等）。固体、半固体样品经过处理后也可使用SPE进行分离。▲固相萃取法操作步骤活化：根据所选择固定相的类型使用相应的活化溶剂上样：上样溶剂强度不宜过高淋洗：中等强度溶剂冲去干扰杂质，同时使分析物保留洗脱：选用离子强度较弱但能洗下待测物的洗脱溶剂CompanyLogo生物样品前处理-固相萃取法CompanyLogo生物样品前处理-固相萃取法▲固相萃取法优点分析速度快，回收率高，自动化程度高。溶剂用量少，不易产生乳化。▲固相萃取法缺点截面积小，流量低。易堵塞，尤其是对生物样品。易产生缝隙，降低提取效率。重复性较差。CompanyLogo生物样品前处理-固相萃取法▲固相萃取发展趋势改善填料性能，开发适用范围广的通用性填料。与更多仪器实现在线联用。使SPE小柱更加耐压且易于更换。▲固相萃取新技术固相微萃取技术基质分散固相萃取技术分子印迹固相萃取技术磁力搅拌棒吸附萃取技术CompanyLogo主要参考文献▲李章万,徐秀荣.色谱分析中生物样品的前处理方法[J].药物分析杂志,1996,16(1):55-59.▲刘松青,刘芳.药物色谱分析中生物样品的前处理方法[J].中国医药用药评价与分析,2012,12(10):871-873.▲戴国梁,居文政,谈恒山.生物样品前处理研究进展[J].中国医院药学杂志,2013,33(6):484-487.▲周丽华.体内药物分析测定前样品处理以及测定的基本程序[J].内蒙古中医药,2013,10(1):116-118.▲安彦.固相微萃取技术及其在药物分析中的应用[J].天津药学,2009,21(6):52-55．