Lowry法检测蛋白质的含量

Lowry法检测蛋白质的含量一、实验原理：首先在碱性条件下蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜复合物，该复合物加入酚试剂后产生蓝色复合物。该蓝色复合物在650nm处的吸光度值与蛋白质的含量成正比，根据供试品的吸光度，计算供试品的蛋白质含量。二、配液碱性酒石酸盐溶液：称取无水碳酸钠20.0g，氢氧化钠4.0g，酒石酸钾钠0.2g，加水至1L，溶解混匀。硫酸铜溶液：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O）1.0g，加水至200ml，溶解混匀。碱性铜溶液（现用现配）:量取溶液A100ml，溶液B2ml，混匀即得。标准蛋白质储备液（1mg/ml)：用纯化水将牛血清白蛋白对照品定量稀释至1mg/ml，混合均匀，用1.5ml离心管分装，1ml/管，贴好标签，于-20℃或以下低温冰箱贮存。标准蛋白质工作液（100μg/ml）:将标准蛋白质贮备液用前10倍稀释至100μg/ml。阳性对照（约50μg/ml的牛血清白蛋白溶液）：精密称取牛血清白蛋白25mg，加纯化水溶解，加入500ml容量瓶中，定容至刻度，混合均匀，冷冻管分装，每管2.5ml，贴好标签，于-20℃或以下低温冰箱贮存，有效期两年。三、步骤：1.将标准蛋白质贮备液（1mg/ml）稀释成100μg/ml的标准工作液。2.量取标准工作液（双份）0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分别加入刻度试管中，补水至1ml。3.精密量取供试品和阳性对照1.0ml（双份）于刻度试管中；吸取1.0ml纯化水作为空白对照。4.加碱性铜溶液（溶液A100ml、溶液B2ml混匀）5.0ml到每一管中，涡旋混匀，室温条件放置10分钟。5.加酚试剂（稀释至1N）0.5ml，摇匀，室温放置30分钟。6.在650nm处用空白对照调零后，测定标准溶液的吸光度值，以及供试品和阳性对照的吸光度值。根据标准蛋白浓度和其对应吸光度的标准曲线，计算供试品和阳性对照的蛋白含量。