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液相色谱常见问题－液相色谱常见问题－总结总结1，压力异常问题（压力偏高、波动）2，漏液问题（泵，进样器）3，基线问题（漂移、噪声、异常）4，进样精度问题（面积重现差）5，保留时间精度问题（保留时间变化大）6，出峰问题。(拖尾、变胖）液相色谱常见问题－液相色谱常见问题－压压力力1，压力是液相色谱中最重要的指标，要关注压力及变化。2，保留时间的变化经常是由于压力不稳引起的。3，不同流动相在相同流速和温度的情况下压力是不同的（粘度有关）。4，记下仪器正常状态时，在固定条件下（流动相、流速、温度等）的压力值。液相色谱常见问题－液相色谱常见问题－压力高压力高1，LC-20A压力高的标准是什么？a：LC-20A新仪器系统压力是多少？b：流动相是什么？流速是多少？c:参考标准：水1.0MP以下（1ml/min）（注：进样器和检测器之间接双通）。注意柱子的压差（真实压力值）2，怎么推断压力高的部件在哪儿？（首先排除柱子或保护柱压力高）a：顺推法。b：反推法。（注意检测器双通的堵塞或者管路被憋紧堵塞）脱气机泵单元手动或自动进样器色谱柱检测器液相色谱常见问题液相色谱常见问题高压梯度系统高压梯度系统泵单元混合器保护柱顺推反推液相色谱常见问题－液相色谱常见问题－压压力力高高时时1，首先确认是保护柱或色谱柱堵塞还是系统堵塞(不能超声保护柱芯）2，色谱柱堵时，选择合适的冲洗液，不建议反冲。3，系统堵塞，应确认是哪一部份堵塞，由前向后或由后向前逐部件进行排除。液相色谱常见问题液相色谱常见问题容易发生堵塞的部件容易发生堵塞的部件1，保护柱。2，泵的管路过滤器和泵头管路（LC-10ATvp出口单向阀到右泵头）。3，混合器预混合室过滤器。（主混合器和预混合室建议不要拆洗）4，某些细内径的系统管路。5，自动进样器高压阀和细内径的出口管路（UFLC)。6，自动进样器的进样口到高压阀管路（LC2010)7，手动进样阀的定子堵塞。8，检测器流通池半微量池的入口管和背压管。液相色谱常见问题－液相色谱常见问题－压力高压力高1，建议用户使用保护柱来延长分析柱的寿命。－－柱压高或者分析问题80％原因在保护柱，首先应该排除保护柱。2不建议自己为用户填补柱子。－－柱子没有保修。液相色谱常见问题－液相色谱常见问题－压力高压力高泵的管路过滤器堵塞。泵的管路过滤器堵塞。更换周期更换周期半年∽半年∽11年年228-48607-91老式228-35871-96整体式液相色谱常见问题－液相色谱常见问题－压力高压力高混合器预混合室过滤片更换周期：半年－1年228228--1887218872--9393液相色谱常见问题－液相色谱常见问题－压力高压力高自动进样器堵塞高压阀转子：更换周期2年转子槽磨损掉屑造成堵塞和吸样不准。转子10万次不漏液（PEEK制，含盐流动相缩短次数）液相色谱常见问题－液相色谱常见问题－压力高压力高自动进样器堵塞LC-2010的进样口到高压阀的PEEK管LC2010高压阀4号口LC2010进样口液相色谱常见问题－液相色谱常见问题－压压力力零－泵零－泵如果压力为零：1，泵头中没有液体，充满气泡。2，单向阀完全堵死。3，吸滤头完全堵死。4，排液阀没关上。5，管路漏液。6，主板或者压力传感器。7，泵体锈蚀，柱塞杆不动。液相色谱常见问题－液相色谱常见问题－压压力力低－泵低－泵如果有压力但是压力比正常时低：1，泵头有气泡。2，柱塞密封垫漏液。3，管路漏液。4，单向阀轻度堵塞。5，单向阀磨损。6，吸滤头堵塞7,排液阀没关紧。8，排液阀锣纹磨损或O圈磨损漏液液相色谱常见问题－液相色谱常见问题－压压力力波波动动压力波动主要原因：1，泵头中有气泡。（建议甲醇赶气泡）2，单向阀脏、堵塞、磨损。3，单向阀非耐乙腈型4，柱塞密封垫漏液。5，柱塞杆磨损漏液6，流动相有气泡。7，吸滤头脏。8，脱气机脱气不良。9，泵参数值、原点位置不合适不准。10，泵轴承磨损。液相色谱常见问题－液相色谱常见问题－压压力力波波动动各型号的泵压力允许波动范围（流动相纯水）。1.0ml/min日常运行标准(非安装标准):LC-20AD:0.2MPALC-20AT:0.3MPALC-20AB:0.2MPALC-10ATvp:0.5MPALC-10ADvp:0.2MPALC-2010AHT:0.5MPA超声清洗零部件步骤1，纯水15min2，纯异丙醇15min（低极性溶剂清洗）3，特别脏的用5％硝酸15min或者25％的磷酸（洗锈），再重复前面1，2步骤。系统管路清洗步骤管路脏或者堵的冲洗注意：不能接柱子！流速：1ml/min步骤：时间1，纯水15min2，5％硝酸或25％磷酸60min3，纯水15min4，纯异丙醇60min5，甲醇或50％水/甲醇30min建议定期清洗（1∽2月一次）经经常常漏漏液液的的部部件件1，泵：柱塞密封垫（漏流动相）排液阀清洗垫（漏清洗液）2，手动进样器：转子密封垫自动进样器：进样垫样品环3，检测器：流通池堵塞（垫片损坏、透镜破碎）4，柱子接头处：（接头松动，接头磨损，接头不匹配）基基线线噪噪音音大－毛刺大－毛刺基线噪音标准：基线噪音标准：SPDSPD--10Avp/20A10Avp/20A2020uvuv流动相流动相纯水纯水250nm250nmSPDSPD--M20AM20A5050uvuv流动相流动相纯水纯水250nm600nm250nm600nm原因原因：：11，流动相污染，使用低纯度溶剂。，流动相污染，使用低纯度溶剂。22，流动相、检测器流通池内有气泡。，流动相、检测器流通池内有气泡。33，通过检测池的能量不够，通过检测池的能量不够((光路脏、氘灯老化、流动相、池子脏光路脏、氘灯老化、流动相、池子脏）。）。44，没接好地线。，没接好地线。55，波长设定短（，波长设定短（220nm220nm以下）。以下）。66，电源电压波动几十伏。，电源电压波动几十伏。基基线线漂漂移－起伏和单向移－起伏和单向基线漂移标准：SPD-10Avp/20A:600uv/hour纯水250nmSPD-M20A:2mv/hour纯水250nm600nm原因：11，流动相污染，使用低纯度溶剂。，流动相污染，使用低纯度溶剂。22，检测器的温度受到环境波动（风口，空调口）。，检测器的温度受到环境波动（风口，空调口）。33，冲洗平衡柱子时间不够（半小时），柱子没恒温。，冲洗平衡柱子时间不够（半小时），柱子没恒温。44，柱子或管路太脏。，柱子或管路太脏。55，波长设定短（，波长设定短（220nm220nm以下）。以下）。66，特殊流动相温控影响。（离子对试剂需要恒温较稳定），特殊流动相温控影响。（离子对试剂需要恒温较稳定）77，检测器要预热，检测器要预热30min30min以上。以上。进样面积重现性差进样面积重现性差手动进样阀手动进样阀7725i7725iCV：10ul6针面积RSD1％1，进样量不合适（10ul）。2，进样针定量不准。（不熟练）3，进样针有气泡。（慢提快打）4，进样口转子针密封松动（用橡皮顶紧）。5，进样针太细，插不紧。6，转子密封垫脏、磨损、漏液。7，定量环堵塞。8，废液管堵塞或者位置不对。9，进样的方法不正确。进样针用完以后要及时清洗，否则针会粘住。进样针用完以后要及时清洗，否则针会粘住。进样面积重现性差进样面积重现性差自动进样器自动进样器10ul6针面积RSDSIL-10ADvpSIL-20A0.3%SIL-10AF模式A0.5%模式F1%SIL-10AP1.0%1，清洗液干了。（瓶子或管路）2，没有排气（purge）或排气时间（25min)不够。3，清洗液没脱气。（没有在线脱气机情况）4，高压阀转子密封垫堵塞或磨损。5，进样垫堵塞或磨损漏液。7，非岛津的瓶及瓶垫。8，定量环漏液或堵塞。9，计量泵轴承螺杆磨损。10，进样瓶拧得太紧。保留时间不稳定保留时间不稳定保留时间重现性标准：保留时间重现性标准：10ul6针保留时间RSD（连接色谱柱）7725i7725i和自动进样器：和自动进样器：0.50.5％％1,泵输液送液不正常（压力波动、气泡）。2,柱温的变化（室温变化小于2度）。3,流动相组分挥发变化（封口膜）。4，流动相的PH值不同，缓冲能力不够（样品影响）（低波长用磷酸盐，普通波长用醋酸盐。）5,色谱柱平衡时间不够（C18,15cm30min-60min）。6，梯度洗脱未回初始流动相浓度比例或时间不够。7，纯有机试剂与高盐流动相混合。8，柱子问题。9，低压梯度阀不良。液相系统维护流程图液相系统维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器手动进样器检测器色谱柱一、输液部分一、输液部分接头死体积接头死体积死体积会引起分离度变差重现性变差峰形差柱效差等问题.柱子的连接，高压阀出口连接管线公螺母死体积好的连接差的连接吸吸滤滤头头泵的吸滤头部件号：228-45707-91旧自动进样器吸滤头部件号：228-21984-01吸吸滤滤头头将流动相放高于泵的位置－摆放规范将流动相放高于泵的位置－摆放规范材料：不锈钢(或陶瓷)烧结，孔径10um作用:过滤流动相颗粒杂质或细菌。故障：堵塞，污染更换周期：2年。表现：不断有气泡生成有杂质峰柱压不稳定措施：用异丙醇超声波清洗，或5％稀硝酸超声波清洗，再用蒸馏水清洗泵简单工作示意图泵简单工作示意图凸轮柱塞杆柱塞密封垫单向阀泵头流动相入口流动相出口LC-20AT串联式柱塞往复泵并联式LC-20AD柱塞泵的基本结构－冲程LC-10ATvpLC-10ADvp47ul23ul47ul23ul47ul23ul47ul23ul10ul10ul10ul10ulLCLC--20AT20AT照片照片LCLC--20AD20AD照片照片单单向向阀阀单向阀结构球座吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头抛光面宝石球流动相单向阀工作原理单向阀结构单向阀结构LCLC--20A20A泵入口阀泵入口阀请不要分解阀心A和阀心B。重新组装后性能不被保证，输液可能不稳定。注意：耐耐乙腈乙腈单向阀单向阀LC-20AT主入口阀:228-48249-93副入口阀:228-48249-91LC-10ATvp入口阀：228-48249-93LC-20AD入口阀:228-48249-91LC-10ADvp入口阀:228-48249-91LC20AT主入口阀部件号:228-45704-92LC20AD入口阀LC20AT副入口阀部件号:228-45704-91LC20AD出口阀部件号:228-45705-91单单向向阀（不含耐乙腈）阀（不含耐乙腈）LC10ADvp出口阀LC10ATvp出口阀部件号:228-34976-91LC10ADvp入口阀部件号:228-39093-92LC10ATvp入口阀部件号:228-32166-91单单向向阀阀清清洗洗故障：宝石球沾在球座上。宝石球或球座受污染导致密封不好。球座磨损表现：不送液系统压力波动大。更换周期：两年。措施：1，推荐用注射器连接入口单向阀将其顶开。(附带）2，单向阀的日常维护同流路清洗。3，拆下单向阀，放入纯异丙醇中，超声波清洗15min以上。4，如果太脏，考虑用5％HNO3超声清洗。单单向向阀阀清清洗洗LCLC--20A20A单向阀单向阀注意：超声清洗时开口端向上放置。正确正确错误错误柱柱塞塞密密封封圈圈柱塞密封垫LC-20ADLC-20ABLC-10ADvp部件号228-35146柱塞密封圈LC-20ATLC-10ATvp部件号：228-35145取下和安装柱塞密封垫工具柱塞密封垫的更换柱塞密封垫的更换故障：密封圈磨损导致密封不良。现象：系统压力波动大或泵漏液，或清洗液增多。措施：更换柱塞密封垫。（旧垫换下不用）注意点：1、拆卸泵头前，柱塞杆复位。（P－SET）2、新密封垫用异丙醇浸泡15min后再安装。3、换完后要将送液量清零。4、工具的大小头分清楚。流动相泵头清洗管路柱塞杆密封圈清洗垫柱塞密封垫的更换柱塞密封垫的更换22注意点：4，更换LC-20AT或LC-10ATvp的柱塞密封垫时注意不要弄丢压住密封垫下面的塑料薄白垫圈(Spacer-S)，否则，漏液或波动。流动