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一、选择题、1．下列有关培养基的叙述正确的是……()A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌2.不同培养基的具体配方不同，但一般都含()A．碳源、磷酸盐和维生素B．氮源和维生素C．水、碳源、氮源和无机盐D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素3．获得纯净培养物的关键是……………()A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌B．接种纯种细菌C．适宜环境条件下培养D．防止外来杂菌的入侵4．下列常用的无菌操作中错误的是……()A．用酒精擦拭双手B．用氯气消毒水源c．实验操作应在酒精灯火焰附近进行D．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭5．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是()A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板6．有关倒平板的操作错误的是…………()A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置7．有关平板划线操作正确的是…………()A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞c．将沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可D．最后将平板倒置，放人培养箱中培养8．有关稀释涂布平板法，叙述错误的是…()A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C．再放在适宜条件下培养D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落9．涂布平板操作需要用到………………()A．接种环、滴管、酒精灯B．接种环、移液管、酒精灯C．涂布器、移液管、酒精灯D．涂布器、接种环、酒精灯10．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是……………()A．对比观察培养基有没有被微生物利用B．对比分析培养基是否被杂菌污染C．没必要放人未接种的培养基D．为了下次接种时再使用11关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.是碳源的物质不可能同时是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐D.无机氮源也能提供能量12．作为自养生物唯一碳源的是（）A糖类B石油C二氧化碳D花生粉饼13．大肠杆菌的代谢类型是（）A自养需氧B异氧严格厌氧C异养需氧D异养兼性厌氧14．菌种保藏应控制的条件是（）（1）湿度（2）低温（3）干燥（4）有光（5）隔绝空气（6）适当有氧A（1）（4）（6）B（2）（3）（6）C（1）（5）（6）D（2）（3）（5）15．下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（）A含碳有机物B蛋白胨C含碳无机物D花生粉饼等天然物质16．平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是（）A利于大肠杆菌的接种B防止杂菌污染C利于培养的冷却D防止皿盖冷却水倒流入培养基17。含C、H、O、N的大分子化合物可以作为（）A异养微生物的氮源、能源B异养微生物的碳源、氮源C自养微生物的氮源、能源、碳源D自养微生物的氮源、能源、碳源二、非选择题18．鉴定培养基的制作是否合格的方法是：将制备好的培养基放在中保温1-2天看有无，如果没有说明制作合格，反之则不合格。19．请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。(1)培养细菌用的培养基与培养皿(2)玻棒、试管、烧瓶和吸管(3)实验操作者的双手(1)、(2)、(3)20．19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。(1)根据你所掌握的知识分析导致生产失败的根源是什么?(2)由此得出研究和应用微生物的前提是防止21．在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?22．在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线?参考答案：一、1．A2．C3．D4．D5．C6．C7．D8．D9．C10．B。11D12。C。13。D。14。B。15。C。16。D。17。B。二、18．恒温箱菌落生长，菌落生长19(1)需要灭菌(2)需要灭菌(3)需要消毒20(1)导致生产失败的根源在于发酵物中混入了杂菌。(2)杂菌入侵，获得纯净的培养物。21．不能因空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。22．因划线后线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，这样最终就能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。一：教学目标1知识目标：了解培养基的用途和种类识记培养基制作中的一般成分掌握培养基制作的一般的步骤掌握微生物分离中的划线法和涂布法2能力目标掌握微生物的生活史，对接种的微生物进行鉴别学会一般的消毒、灭毒的方法学会实验的后期处理的方法3情感目标培养学生环保的意识体验微生物与现代生物技术之间的密切的关系二：教学中的难重点重点：培养基的制备、微生物的培养的操作难点：培养基的制备和微生物的分离三：教学过程说明：本实验，我准备安排在选修一开始就进行。原因：如果开展选修一，我准备开设“腐乳的制作”，用到大量的根霉菌和毛霉菌。准备让技术比较好的两组同学接种①创设情景，引入新课②确定目标，引导自学展示几个问题，让学生整理①什么叫培养基？有几种类型？②培养基一般需要的营养成分？了解牛肉膏蛋白胨培养基的营养成分③无菌操作包括几部分？小组讨论，分别让不同小组展示“如何进行无菌操作”三：给出目标，动手实践大屏幕展示：马铃薯培养基：牛肉膏蛋白胨培养基：给出配方，将学生分组自主选择制作的培养基。具体步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。要求学生在课上完成计算、称量、溶化、灭菌操作，然后利用之前学生或教师已经完成灭菌的培养基倒平板。（2）倒平板操作的步骤：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。③用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10～20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。④等待平板冷却凝固，大约需5～10min。然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。一二组完成根霉菌、毛霉菌（带上口罩操作），三四组完成大肠杆菌的操作课下思考课本上的思考★课题目标临沭县实验中学刘长明2010年7月29日16:11（一）知识与技能了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术（二）过程与方法分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象（三）情感、态度与价值观形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神★课题重点无菌技术的操作★课题难点无菌技术的操作★教学方法启发式教学★教学工具多媒体课件★教学过程（一）引入新课在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。（二）进行新课1．基础知识1．1培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。〖思考1〗琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培养基中用作为凝固剂。【补充】培养基的类型及其应用：标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多菌种分离,鉴定,计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养化学组成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生，产降低成本目的用鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别途选择培养基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分离1．2培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。〖思考2〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97％以上。【补充】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。1．3培养基除满足微生物生长的pH、特殊营养物质和氧气等要求。【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。〖思考3〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供糖、维生素和有机氮等营养物质。〖思考4〗培养乳酸杆菌时需要添加维生素，培养霉菌时需要将培养基pH调节为酸性，培养细菌时需要将pH调节为中性或微碱性。活动2：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：1．4获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。1．5无菌技术包括：（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。1．6比较消毒和灭菌（填表）比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能〖思考5〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是防止感染实验操作者。1．7消毒方法：（1）日常生活经常用到的是煮沸消毒法；（2）对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法（作简要介绍）；（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒。（4）实验操作者的双手使用酒精进行消毒；（5）饮水水源用氯气进行消毒。1．8灭菌方法：（1）接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；（2）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；（3）培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。（4）表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。〖思考6〗对接种环灭菌时要用酒精灯的充分燃烧层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位。〖思考7〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是避免妨碍热空气流通。〖思考8〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是有利于锅内温度升高；随后关闭排气阀继续加热，气压升至100kPa，温度为121℃，并维持15～30min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器中的液体暴沸。【补充】培养基的配制原则：①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。②营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比4∶1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3∶1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。2．实验操作2．1计算：根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量。2．2称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。2．3溶化：①加水加热熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯化钠继续加热；③加入琼脂；④用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。2．4调pH：用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。2．5灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。2．6倒平板：待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过