实验十一分光光度法测定火腿肠中亚硝酸盐的含量(精)

1实验十一分光光度法测定火腿肠中亚硝酸盐的含量一、实验原理样品经沉淀蛋白质，除脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染料，通过测定吸光度可与标准进行比较定量。二、试剂与仪器（1）试剂亚铁氰化钾溶液：称取10.6gK4Fe(CN)6.3H2O溶于水定容100mL.乙酸锌溶液：称取11gZn(CHCOO)2.2H2O加1.5mL冰乙酸，溶于水定容50mL。饱和硼砂溶液：称取5gNaB4O7.10H2O溶于100mL热水中，冷却备用。20%盐酸：取54mL浓盐酸加水45mL。0.4%对氨基苯磺酸：称取0.4g对氨基苯磺酸溶于100mL20%盐酸中。200ug/mL亚硝酸钠标准液：精密称取0.1000g经硅胶干燥24小时的亚硝酸钠（GR），加水溶解后，定容500mL。5.0ug/mL亚硝酸钠标准使用液：吸取亚硝酸钠标准液5.0mL于500mL容量瓶中用重蒸馏水定容。（2）仪器电炉电热恒温水浴锅玻棒漏斗铁架台烧杯（50mL、200mL、500mL各2个）；容量瓶（250ml1个）；吸管（2mL,5mL,10mL,50mL各1支）；比色管（50mL10支）三、实验操作（1）样品处理称取3g左右火腿肠于50mL烧杯中，加入饱和硼砂溶液6.3mL，以玻棒搅匀，用70℃左右的重蒸馏水约100mL将其洗入250mL的容量瓶中，置于沸水浴中加热15分钟，取出，一边转动一边加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液以沉淀蛋白质。定容，混匀，静置半小时，除去上层脂肪，过滤，弃去初滤液30mL，收集滤液备用。2（2）绘制标准曲线吸取0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.20mL亚硝酸钠标准使用液，分别置入7支50mL比色管中，各加入0.4%对氨基苯磺酸2mL,混匀，静置3-5分钟后各加入1.00mL0.2%盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15分钟，用2cm比色皿，以零管调零，于538nm处测量吸光度，以亚硝酸钠含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。（3）样液测定吸取40mL样品处理液于50mL比色管中，按标准曲线绘制步骤进行，测定吸光度，通过吸光度从标准曲线上查出亚硝酸钠的含量（ug）。四、计算式中：X——40mL样品处理液中亚硝酸钠的含量（ug）M——火腿肠的质量（g）1000100025040m1000XKgg亚硝酸钠含量