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产品简介试剂盒应用EdU直接测定细胞内DNA的变化。EdU（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU与T非常相似，而EdU染料只有BrdU抗体的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等），可有效避免样品损伤，而且无需抗原抗体反应，能在细胞和组织水平更准确地反映DNA复制活性。试剂盒内容运输与保存室温运输，4˚C储存，勿冻存，荧光试剂请避光保存，可稳定储存一年。使用前须知贴壁细胞宜采用荧光检测方式，适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜、高内涵筛选仪检测，亦可进行爬片检测，。悬浮细胞可用涂片方式荧光检测，亦可采用流式细胞仪分析，但流式细胞仪需要具备相应荧光通道(表4)。实验准备•PBS(pH7.2~7.6)•渗透剂(含0.5%TritonX-100的PBS)•甘氨酸溶液(2mg/mL)（去离子水配置）•细胞固定液(即含4%多聚甲醛的PBS)•96/24/12/6孔培养板注意：请使用一次性手套，废液请妥善处理。试剂浓度InvitroInvivoC10310C10327C10313C10321C10322C10314EdU溶液(试剂A)1000X20μL100μL200μL---EdU溶剂(试剂A)粉末---2mg10mg50mgApollo®反应缓冲液(试剂B)20X500μL2.5mL5mL500μL500μL500μLApollo®催化剂溶液(试剂C)100X100μL500μL1mL100μL100μL100μLApollo®荧光染料溶液(试剂D)300X30μL150μL300μL30μL30μL30μLApollo®缓冲添加剂(试剂E)粉末100mg500mg1g100mg100mg100mgHoechst33342(试剂F)100X150μL750μL1.5mL150μL150μL150μL实验参考表1EdU培养基及染色反应液的使用量参考注：1）*表示贴壁细胞通常采用的培养容器，EdU培养基与染色反应液用量以覆盖细胞为宜；2）悬浮细胞EdU用量请按培养体积而定。表2EdU孵育时间取决于细胞生长速度注：1）EdU孵育时间取决于细胞周期，一般为细胞周期的1/10至1/5；2）*考虑到细胞培养基、温度、湿度、光线等其他因素的影响，细胞周期会有所变化，但大多数细胞系可采用2h孵育时间。表3Apollo®染色反应液的配置（现用现配）注：1）*表示通常配制的Apollo®反应液的体积；96孔板*48孔板24孔板12孔板6孔板5cm小皿EdU培养基100μl150μl200μl300μl500μl2mL染色反应液100μl150μl200μl300μl500μl2mL3T3HelaHEK293*细胞系人胚胎细胞酵母细胞人成纤维细胞人宫颈癌细胞人胚肾细胞系人神经细胞细胞周期~30min~3h~18h~21h～25h~5d孵育时间5min20min2h2h2h1d配制顺序Apollo®染色反应液500μL*1mL5mL10mL1去离子水469μL938μL4.69mL9.38mL2Apollo®反应缓冲液(试剂B)25μL50μL250μL500μL3Apollo®催化剂溶液(试剂C)5μL10μL50μL100μL4Apollo®荧光染料溶液(试剂D)1.5μL3μL15μL30μL5Apollo®缓冲添加剂(试剂E)5mg9mg44mg88mg2）按顺序配制适量1XApollo®染色反应液，以免破坏正常的反应体系(现用现配，30分钟用完)；3）试剂E为白色粉末，较易氧化，使用后请旋紧管盖，如试剂出现棕黄色，则需更换。粉末较难准确称量，称量误差范围可稍微放宽，但不应超过±20%。表4配套染料的相关波长信息注：1）荧光显微镜宜采用Hoechst33342和Apollo®567进行检测DNA复制活性；2）激光共聚焦显微镜采用Apollo®567或Apollo®643均可。产品编号荧光染料ExcitationEmissionSimilartoC00031Apollo®567550nm565nmCy3C00041Apollo®643653nm667nmCy5C00033Hoechst33342350nm461nmDAPI