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上海市实验动物管理办公室实实验验小小鼠鼠和和大大鼠鼠麻麻醉醉手手册册（试用）上海市实验动物管理办公室上海市实验动物管理办公室2目录前言3第一部分麻醉药品的使用4一．常用麻醉药药理4二．全身麻醉技术7三．麻醉深度的判断指标8四．腹腔注射麻醉的步骤9五．异氟烷吸入麻醉实验步骤9第二部分常用实验小鼠和大鼠麻醉效果的评价10一.封闭群KM小鼠10二.近交系小鼠11三.免疫缺陷小鼠13四.封闭群大鼠16第三部分麻醉药品申购与管理17一．科研、教学购用特殊药品（含对照品）申请步骤17二．科研、教学购用特殊药品（含对照品）申请表20三．麻醉药品管理制度（样本）21附表22一.封闭群KM小鼠麻醉的实验数据22二.近交系小鼠麻醉的实验数据27三.免疫缺陷小鼠麻醉的实验数据36四.封闭群大鼠麻醉的实验数据45附照56上海市实验动物管理办公室3前言在动物实验中，从善待动物的观点出发，只要不与研究目的相抵触，就应为减轻动物的实验痛苦，而利用物理或化学的方法，使动物的全身，或局部暂时失去痛觉或痛觉迟钝，减少动物的挣扎和保持安静，以利实验操作的进行，这就是动物的麻醉技术。对一些性情较凶暴的动物，可防止其伤害实验者。在动物实验时实施麻醉是必须的步骤之一。由于麻醉药品是种特殊的药品，其购置必须按照《麻醉药品和精神药品管理条例》，填写《科研、教学购用特殊药品（含对照品）申请表》，递交上海市食品药品监督管理局，由该局的药品安全监管处受理和审批。对于购得麻醉药品的各使用单位，均须制订各自的《麻醉药品管理制度》，妥善管理。须注意不同生产厂商生产的同种麻醉药品的使用效果不尽相同，即使同一生产厂商的不同批次产品的麻醉效果也不完全相同。本手册是基于上海市科技发展基金项目《大、小鼠常用麻醉、镇痛药品的选择、剂量控制及不同给药途径的研究》（项目编号：064909010）的研究结果编写而成。项目由上海交通大学医学院、上海市肿瘤研究所和上海斯莱克实验动物有限公司相关科研人员历经两年共同完成。手册包括三个部分：第一部分麻醉药品的使用；第二部分常用实验小鼠和大鼠麻醉效果的评价；第三部分麻醉药品申购与管理；较全面地介绍了常用麻醉剂在实验大鼠和小鼠上的应用及效果评价；由上海市实验动物管理委员会办公室组织专家审校后印刷成册，供使用者在实践中参考。参加项目组人员名单上海交通大学医学院：杨伟敏潘振业沈志明顾锋丁隽袁春萍汪静姜莹严国锋肖忠标上海斯莱克实验动物有限公司：顾坚忠符杰唐慧青倪雅凤上海市肿瘤研究所：闫明霞姚明手册审校组人员：（按姓氏笔划排列）上海市实验动物管理办公室4杨伟敏杨斐陈国强胡建华高诚徐平潘振业第一部分麻醉药品的使用一.常用麻醉药（对人类）药理1.戊巴比妥钠：适应症：用于镇静、催眠、麻醉前给药及抗惊厥。药理毒理：本品对中枢神经系统有广泛抑制作用，随用量而产生镇静、催眠和抗惊厥效应，大剂量时则产生麻醉作用，作用机制认为主要与阻断脑干网状结构上行激活系统有关。不良反应：常有倦睡、眩晕、头痛、乏力、精神不振等延续效应。偶见皮疹、剥脱性皮炎、运动功能障碍、中毒性肝炎、黄疸等。也可见巨幼红细胞贫血，关节疼痛，骨软化。久用可产生耐受性与依赖性，突然停药可引起戒断症状，应逐渐减量停药。药物相互作用：(1)本品与乙醇、全麻药、中枢性抑制药或单胺氧化酶抑制药等合用时，中枢抑制作用增强。(2)本品与口服抗凝药合用时，可降低后者的效应。(3)本品与口服避孕药或雌激素合用，可降低避孕药的可靠性。(4)本品与皮质激素、洋地黄类、土霉素或三环类抗抑郁药合用时，可降低这些药的效应。(5)本品与苯妥英钠合用，苯妥英钠的代谢加快，效应降低。(6)本品与卡马西平和琥珀酰胺类药合用时可使这二类药物的清除半衰期缩短而血药浓度降低。(7)本品与奎尼丁合用时，可增加奎尼丁的代谢而减弱其作用。中毒症状：(1)中枢神经系统轻度中毒时，有头胀、眩晕、头痛、语言迟钝、动作不协调、嗜睡、感觉障碍、瞳孔缩小等。重度中毒可有一段兴奋期，病人可发生狂躁、谵妄、幻觉、惊厥、瞳孔散大（有时缩小）、肌肉松弛，角膜、咽、腱反射消失，昏迷逐渐加深。上海市实验动物管理办公室5(2)呼吸系统轻度中毒时，一般呼吸正常或稍缓慢。重度中毒时，呼吸减慢、变浅不规则，或呈潮式呼吸，严重时可引起呼吸衰竭。(3)循环系统皮肤发绀、湿冷；脉搏快而微弱、少尿或无尿；血压下降甚至休克。(4)黄疸及肝功能损害。中毒抢救：(1)急性中毒者人工呼吸、给氧等支持治疗。(2)服药5～6h内的中毒者立即洗胃。一般可用1：5000高锰酸钾溶液，将胃内药物尽量洗出；洗胃后可留置硫酸钠溶液于胃内（成人20～30g），以促进药物排泄。(3)应用利尿剂，加速毒物排泄，一般用20%甘露醇注射液或25%山梨醇注射液200mL静脉注射或快速滴注，3～4h后可重复使用。但须注意水、电解质平衡。(4)5%碳酸氢钠注射液静脉滴注，以碱化尿液，加速排泄。2.水合氯醛适应症：催眠药和抗惊厥药，用于失眠烦躁不安及惊厥，.麻醉前、手术前和睡眠脑电图检查前用药。药理毒理：本品为催眠药、抗惊厥药。催眠剂量30min.内即可诱导入睡，催眠作用温和，不缩短REMS睡眠时间，无明显后遗作用。催眠机理可能与巴比妥类相似，引起近似生理性睡眠，无明显后作用。较大剂量有抗惊厥作用，可用于小儿高热、破伤风及子癎引起的惊厥。大剂量可引起昏迷和麻醉。抑制延髓呼吸及血管运动中枢，导致死亡。曾作为基础麻醉的辅助用药，现已极少应用。不良反应：（1）对胃黏膜有刺激，易引起恶心、呕吐。（2）大剂量能抑制心肌收缩力，缩短心肌不应期，并抑制延髓的呼吸及血管运动中枢。（3）对肝、肾有损害作用。（4）偶有发生过敏性皮疹，荨麻疹。（5）长期服用，可产生依赖性及耐受性，突然停药可引起神经质、幻觉、烦躁、异常兴奋，瞻妄、震颤等严重撤药综合症。药物相互作用：上海市实验动物管理办公室6（1）中枢神经抑制药、中枢抑制性抗高血压药（如可乐定、硫酸镁、单胺氧化酶抑制药、三环类抗抑郁药）与本品合用时可使水合氯醛的中枢性抑制作用更明显。（2）与抗凝血药同用时，抗凝效应减弱，应定期测定凝血酶原时间，以决定抗凝血药用量。（3）服用水合氯醛后静注呋塞米注射液，可导致出汗，烘热（hotflashes）、血压升高。中毒症状：可产生持续的精神错乱、吞咽困难、严重嗜睡、体温低、顽固性恶心、呕吐、胃痛、癫癎发作、呼吸短促或困难、心率过慢、心律失常、严重乏力，并可能有肝肾功能损害。中毒抢救：维持呼吸和循环功能，必要时行人工呼吸，气管切开。在因水合氯醛过量中毒的病人，用氟马西尼(Flumazenil)可改善清醒程度、扩瞳、恢复呼吸频率和血压。3.盐酸氯胺酮适应症：本品适用于各种表浅、短小手术麻醉及全身复合麻醉。药理毒理：本品主要是选择性的抑制丘脑的内侧核，阻滞脊髓至网状结构的上行传导，兴奋边缘系统，并对中枢神经和脊髓中的阿片受体有亲和力。产生麻醉作用，主要是抑制兴奋性神经递质（乙酰胆碱、Ｌ－谷氨酸）及Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬酸受体的结果;镇痛作用主要由于阻滞脊髓至网状结构对痛觉传入的信号及与阿片受体的结合，而对脊髓丘脑传导无影响，故对内脏疼痛改善有限。静脉注射1-2mg/kg或肌注4-6mg/kg，分别于30s及3～5min意识消失.麻醉后出现睁眼凝视及眼球震颤，肢体肌力增强，呈木僵状态；眼泪、唾液分泌增多，术前用抗胆碱药可避免或减少发生.对交感神经和循环有兴奋作用，表现在血压升高、心率加快、眼内压和颅内压均升高、肺动脉压及心的排出量皆高；但它对心肌有直接抑制作用，在循环衰竭病人更为突出。大剂量应用时，可出现呼吸抑制和呼吸暂停。对肝肾功能无明显影响。在麻醉恢复期常有恶心、呕吐发生。可使儿茶酚胺增高、血糖上升、内分泌亢进。不影响子宫收缩，但在剖宫产时，应用本品，因血压升高而致出血量较多。不良反应：（1）术中常有泪液、唾液分泌增多，血压、颅压及眼压升高。不能自控的肌肉收缩偶见。（2）偶有呼吸抑制或暂停、喉痉挛及气管痉挛，多半是在用量较大、分泌物增多时发生。上海市实验动物管理办公室7药物相互作用：（1）氯胺酮与苯二氮卓类及阿片类药物并用时，可延长作用时间，并减少不良反应的发生。剂量应酌情减少。（2）与氟烷等，含卤全麻药同用时，氯胺酮的作用延长，苏醒迟延。（3）与抗高血压药或中枢神经抑制药合用时，尤其是氯胺酮用量偏大，静注过快，可导致血压剧降或/和呼吸抑制。（4）服用甲状腺素的病人，氯胺酮有可能引起血压过高和心动过速。4.咪唑安定适应症：各种失眠和睡眠节律障碍，适用于入睡困难者，手术或诊断性操作前用药(肌注用于内镜检查)。不良反应：别在服药后的最初２～３h内可能发生记忆丧失，忘记日常活动。药物相互作用：与中枢镇静药和／或酒精合用时，有相互增强作用。5.异氟烷适应症：全身麻醉诱导及维持。药理毒理：异氟烷为恩氟烷的异构体，属吸入性麻醉药，麻醉诱导和复苏均较快。麻醉时无交感神经系统兴奋现象，可使心脏对肾上腺素的作用稍有增敏，有一定的肌松作用。本品在肝脏的代谢率低，故对肝脏毒性小。不良反应：偶有心律失常，白细胞数增加。诱导时出现咳嗽、刺激喉痉挛，可发生呼吸抑制及低血压；复苏期的寒颤、恶心以及呕吐。注意事项：（1）使用本品麻醉的深度极易发生变化，应使用或用雾化器以精确设定及控制药物输出。（2）本品对呼吸有抑制作用，故术前用药应视患者具体情况而定。一般多选用抗胆碱类药物。（3）象其它卤素麻醉剂一样，异氟烷可引起血压下降和呼吸抑制，要密切注意血压和呼吸的变化。（4）麻醉维持期间血压明显下降与麻醉加深有关，发生此现象应降低吸入浓度。老年患者使用本品时其维持浓度应酌减，并加用其它药物。（5）颅内压增高者慎用。二．全身麻醉技术上海市实验动物管理办公室8动物麻醉的方法很多，有全身麻醉、局部麻醉、针刺麻醉、复合麻醉、低温麻醉等，一般实验实验大鼠和小鼠常选择全身麻醉，下面着重介绍动物的全身麻醉技术。1.麻醉前的准备工作全身麻醉前的一些准备工作不容忽视，如：麻醉药物与器械（参见附照图1-3）的准备，及测定动物体重（参见附照图4），以准确计算麻醉药物的剂量；麻醉中毒解救药物的准备。动物在麻醉前，应该进行足以空腹的一段时间禁食，将有助于防止反胃和胃内容物吸入气管。对大多数哺乳类实验动物和鸟类动物，麻醉前禁食10～12h就了。小型哺乳类动物（如小鼠和大鼠等）和鸟类的代谢率高，需要禁食的时间应短得多，通常只需2～4h。在反刍类动物中，食物在胃内停留时间长，对于大体型的成年动物，麻醉前空腹时间需达36～48h。2.全身麻醉的方法全身麻醉常用的方法有吸入麻醉和非吸入麻醉。（1）吸入麻醉吸入麻醉的方法是用挥发性麻醉剂或气体麻醉剂使动物吸入体内，达到麻醉的效果。挥发性麻醉剂常用的有：乙醚、氯仿、氟脘、甲氧氟脘等。本文介绍的是，目前常用的气体麻醉剂为异氟脘。（2）非吸入麻醉非吸入麻醉，通常采用的是注射方法，可经静脉注射、肌肉注射、皮下注射、腹腔注射等。本文介绍的是以腹腔注射（参见附照图5）目前常用的麻醉药，如戊巴比妥钠、水合氯醛、盐酸氯胺酮复合剂等。在实施吸入麻醉，对动物进行胸腹部手术时，动物可出现体温下降现象，尤以小动物为甚。麻醉期间的体温下降，可导致动物死亡，或麻醉后的恢复期延长。拟将麻醉后的动物置于热水循环器（参见附照图6－7），或其它有助于保持动物体温的装置中（参见附照图8－9），可一定程度地消除因麻醉而导致的体温下降。三.动物麻醉深度的判断指标判断麻醉深度主要以动物的呼吸频率、眼球、瞳孔、足和趾的刺激反射（趾蹼反射）、肌肉紧张度等的变化将动物麻醉由浅入深分为诱导期、浅外科期、深外科期和脱离深外科期。1.麻醉深度分期I.诱导期动物主动动作存在，呼吸和心律增加，运动时表现为步态不稳、后半身躯摇晃，后肢呈麻痹无力状。上海市实验动物管理办公室9II.浅外科期动物停止运动而后呈侧卧状（部分KM小鼠出现角弓反张），置仰卧体位后不能翻正（参见附照图10）。对非疼痛刺激无肢体动作反映，钳夹指间组织尚能引起缩肢趾蹼反射，呼吸规则以胸式呼吸为主，出现中等程度的肌肉松弛，眼睑和角膜反射存在。III.深外科期呼吸频率下降，呼吸方式渐以腹式为主，肌