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细胞工程复习题一、名词解释1.细胞工程：以生物细胞、组织或器官为研究对象，运用工程学原理，按照预定目标，改变生物性状,生产生物产品，为人类生产或生活服务的科学。2.外植体：指用于离体培养的活的植物组织、器官等材料3.植物组织培养：将植物的器官、组织或细胞，在无菌条件下接种于人工配置的培养基上，使其细胞分裂、增值、分化、发育，甚至形成完整植株的方法。4.愈伤组织：在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在外植体切面上产生。5．离体无性繁殖:简称离体繁殖，是指利用组织培养方法进行植物离体培养，在短期内获得大量遗传性一致个体的方法。6．继代培养：更换新鲜培养基来繁殖同种类型的材料（愈伤组织.芽等）。7.体细胞杂交：（原生质体融合）指在人工控制条件下不经过有性过程，两种体细胞原生质体相互融合产生杂种的方法。8细胞分化：即由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的改变，或发育方式改变的过程。9细胞脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态并形成未分化的愈伤组织的现象。10细胞再分化：即脱分化后的分生细胞在特定的条件下，重新恢复细胞分化能力，并经历器官发生形成单极性的芽或根，或经历胚胎发生形成双极性的胚状体，进一步发育成完整植物体，这一过程成为细胞再分化。11人工种子：指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。12植物细胞全能性：指植物体的每一个活细胞都具有该植物的全套遗传信息，具备发育完整植株的潜在能力。13胚状体：在离体培养过程中产生一种形似胚（具有明显的根端和芽端），功能与胚相同的结构。14单倍体植物：单倍体是指具有配子体染色体数的孢子体(植物个体)。具有单套染色体的细胞在人工离体条件下培养，使其单性发育成植物体。这种具有单套染色体的植物称为单倍体植物。15离体受精：（离体授粉）在无菌条件下培养未受精脂肪或胚珠和花粉，使花粉萌发进入胚珠，完成受精作用。16悬浮培养：是将植物游离细胞或细小的细胞团，在液体培养基中进行培养的方法。17看护培养：是用一块活跃生长的愈伤组织来促进培养细胞持续分裂和增值的方法。18突变体筛选：19原生质体：指除去细胞壁的细胞或是说一个被质膜所包围的裸露细胞。20传代：将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养21细胞分裂指数22克隆化：一个克隆的细胞群体是从一个单一母细胞繁殖而来。分离单一细胞并使其繁殖为一细胞群体的方法23原代培养：也称初代培养期。从体内取出组织接种在培养瓶中培养到第一次传代前阶段，一般持续1-4周。24有限细胞系：经继代培养后细胞系即使培养条件均能满足细胞繁殖生长，它们也只能在有限的时间内生存，经过运动世代后细胞将逐渐死亡。25永久细胞系:大多数细胞系在有限的代数内以不变的形式增殖，当超过有限世代后，在体外永久存活下来发育成永久细胞系或称连续细胞系26细胞系：经过再培养后而形成的具有增殖能力、特性专一、类型均匀的培养细胞27细胞株：将所得到的纯净细胞群，以一定的密度接种在lmm厚的薄层固体培养基上，进行平板培养，使之形成细胞团，尽可能地使每个细胞团均来自一个单细胞，这种细胞团称为“细胞株”。28极性：在器官、组织甚至细胞中，在不同的轴向上存在某种形态结构和生理生化上的梯度差异29克隆：指通过无性繁殖的手段，从一个动物细胞获得遗传背景相同的细胞群或个体群的过程。获得的细胞叫克隆细胞，个体群称为克隆动物。30胞质体：是除去细胞核后由膜包裹的无核细胞。植物去核原生质体又称微质体或亚原生质体。31细胞重组：又叫细胞拆合是指从活细胞中分离出细胞器及其组分后，在体外一定条件下将不同来源的细胞器及其组分进行重组，使其重新装配成为具有生物活性的细胞或细胞器的一种实验技术。32接触抑制：当细胞在基质上分裂增殖，逐渐汇合成片即每个细胞与其周围的细胞相互接触时，细胞就停止增殖，即细胞密度不再增加33胚胎工程：在体外受精和体外早期胚胎发育的基础上，通过卵子切割、性别控制、嵌合体制作、细胞核移植、转基因操作等定向控制、改造和创造新遗传性状的技术统称为胚胎工程，又称发育工程。34干细胞：干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，它可以化成多种功能细胞35核质体：由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的小原生质体。也称为微小原生质体36胚胎干细胞：胚胎干细胞是由早期胚胎内细胞团或原始生殖细胞分离出来的多潜能细胞。二、问答题1、植物细胞工程实验室的组成和基本要求有哪些？基本操作室（洗涤区、灭菌区、贮藏区、培养基配制区）、无菌操作室（缓冲准备室、接种室）、培养室、鉴定分析室、温室便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察2、植物组培中有哪些灭菌方法，其适用范围如何？干热灭菌法：各种玻璃器皿和器械湿热灭菌法：培养基、蒸馏水、各种器械、棉塞熏蒸灭菌：接种室和培养室过滤灭菌：液体培养基药剂灭菌：培养材料烧灼灭菌：接种器械、瓶口、棉塞射线灭菌：接种室空气和台面、花粉灭菌抗生素抑菌3、植物细胞和组织培养方法有哪几种？固体培养、液体培养【摇瓶悬浮培养(小规模)、成批培养、半连续培养(大规模反应器)、连续培养】4、单细胞培养包括哪几种培养方法？a.液体浅层培养b.微室培养c.平板培养d.看护培养5、在离体培养中，胚状体发生有哪几种方式？1、体细胞胚从外植体上直接发生2、经过愈伤组织的体细胞胚发生3、细胞悬浮培养的体细胞胚胎发生6、影响植物细胞脱分化和再分化的因子有哪些？（1）培养基组成对植物细胞脱分化和再分化的影响1）培养基的营养组成2）培养基的渗透压3）培养基的酸碱度4）激素在细胞分化中的调控作用（2）环境条件与植物细胞的脱分化和再分化：湿度条件、温度条件、光照条件（3）光周期对植物细胞脱分化和再分化的效应光周期的需要与否，应根据植物种类、培养目的来决定。7、离体无性繁殖中有哪几种器官发生方式？1、不定芽型，2、器官型，3、器官发生型，4、类胚体发生型，5、原球茎型8、简述离体无性繁殖步骤。1、无菌母株制备（制备方法：田间取材（嫩枝）----自来水冲洗-----消毒剂表面灭菌---无菌条件下切割成带1-2个芽的茎段--接种------诱导不定芽----产生丛芽。）2、不定芽增殖（无菌母株——无菌条件——再次切割——继代培养——繁殖，使之在每个芽眼处形成丛芽——反复多次切割培养获得大量不定芽）3、不定根的诱导，完整植株的形成（将继代增殖的幼嫩小植株——转移至生根培养基中诱导根的分化和根系的形成——完整小植株）4、再生植株的锻炼和移栽（出管前一周打开瓶——洗净培养基——移栽——大田移栽。）5、再生植株的鉴定（细胞学鉴定：形态鉴定）9、简述药用植物组织培养常见问题和对策。1、污染及控制（1）材料带菌与控制控制方法：彻底灭菌（2）接种污染与控制。（3）培养过程感染与控制：对培养空间定期进行消毒处理，及时清除污染材料，转移继代材料。（4）培养基的污染与控制：在培养基中加入抑菌剂2、外植体褐化与控制1）、与植物的种类与品种有关控制的措施有：（1）在外植体消毒灭菌前用流水冲洗一段时间，以清洗部分酚类化合物和底物；（2）接种后在短时间内（1周内）多次转接到新鲜培养基上，直至褐化现象基本消失；（3）先短期用液体培养基进行震荡培养，待褐化现象减轻后再转入固体培养基进行培养。2）、与外植体的年龄有关措施：切取幼龄的茎尖、顶芽分生组织、带芽茎段等做外植体接种较3）、与外植体的取样时间有关在春季切取的生长旺盛部位的外植体褐化较轻，4）、与培养基有关：控制的措施：利用吸附剂减低或清除酚类产物，改变氧化—还原势。常用的还原剂有维生素c5）、与培养方式有关(1)调节外植体在培养基中的放置方式(2)改变培养方法。(3)缩短转瓶周期。(4)调节光照。3、试管苗的玻璃化与控制常用的措施有：(1)选择合适的外植体。(2)琼脂的调节。(3)碳源的调节。(4)激素调节。(5)湿度调节。采(6)温度调节。(7)光照调节.(8)改变供氮形式。9)氯离子调节。(10)尽量减少创伤乙烯产生。(11)在培养基中可附加聚乙烯醇(PVA)、活性炭等，降低玻璃苗的产生。4、变异：（1）选择适宜的再生途径（2）植物生长物质选择（3）离体培养和继代时间的调节5、材料死亡6、黄化7、增殖率过低或过高8、组培苗瘦弱或徒长10、植物组织培养所需培养基包括哪些成分？植物组织培养培养基有哪些种类？（一）无机营养成分大量元素微量元素（二）有机营养成分1）糖类2）维生素3）氨基酸类和酰胺类（三）生长调节物质（四）附加成分1、高无机盐含量的培养基2、较高硝酸钾含量培养基3、中等无机盐含量的培养基4、低无机盐含量的培养基11、简述植物激素的应用规律。①先生长素处理，后细胞分裂素处理，有利于细胞分裂，但细胞不分化。②先细胞分裂素处理，后生长素处理、细胞分裂也分化（可能是内源生长素起了作用）。③生长素和细胞分裂素同时处理，分化频率提高。两者同时存在的用量比值可以改变形态建成的方向。生长素／细胞分裂素：比值高：有利根分化，抑制芽形成；比值低：有利芽分化，抑制根形成；比值适中：促进愈伤组织生长。12、哪些因素会影响培养物的遗传变异？培养基和培养方式继代培养的次数13、体细胞无性系变异的诱导和选择方法。1.自发突变2.诱变：物理诱变、化学诱变、转座子插入诱变、复合因子诱变直接选择法（正、负选择法）、间接选政法、绿岛法14、试述离体无性繁殖的程序。1、无菌母株制备2、不定芽增殖3、完整植株的形成4、再生植株的锻炼和移栽5、再生植株的鉴定15、离体无性繁殖中，小植株的驯化要掌握什么样的原则？驯化中要掌握逐步过渡的原则，才能收到良好的效果。移栽前首先要进行日光锻炼，通过“晒苗”措施恢复叶绿体光合作用功能。使小苗由异养逐步过渡到自养。第二步进行湿度锻炼，使小苗逐步适应周围环境的湿度。16、当前脱除植物病毒的方法有哪些？物理方法：高温处理、低温处理化学方法：利用化学药品处理生物方法：茎尖培养脱毒法；微体嫁接离体培养脱毒法；珠心组织脱毒法；愈伤组织脱毒法。17、如何检测再生植株的脱毒效果？（l）直接测定法（2）指示植物法（生物鉴定法、敏感植物鉴定法）（3）抗血清鉴定法（4）电子显微镜鉴定法（5）分子检测法18、花粉孢子体的发育途径有哪几种？均等细胞发育途径：单核小孢子进行一次均等分裂，形成两个均等的子细胞，这两个细胞再经过几次分裂形成多细胞花粉。营养细胞发育途径：单核小孢子进行一次非均等分裂，形成营养细胞和生殖细胞。营养细胞进一步分裂形成孢子体，而生殖细胞不再分裂或者分裂一两次后不再分裂而退化。生殖细胞发育途径：单核小孢子进行一次非均等分裂，生殖细胞进一步分裂产生孢子体，而营养细胞不再分裂，或者分裂一两次后不再分裂而退化。不均等细胞发育途径：小孢子经不均等分裂后，形成营养细胞和生殖细胞，二者进一步分裂并共同参与孢子体发育途径。19、花粉植株的形态发生方式有哪几种类型？1）来自花粉诱导形成的胚状体；2）来自花粉的愈伤组织。20、试述花粉单倍体植物的培养程序。1)材料准备；2)诱导花粉脱分化形成愈伤组织或胚状体；3)愈伤组织的植株分化或胚状体的正常生长；4)完整植物体的形成；5)再生植株的驯化和移植。21、花药培养中花药为什么要经过低温处理？可以激发花粉母细胞产生两个相等核，而不是一个营养核一个生殖核；保持高比例的强生活力花粉，同时延缓体细胞组织的衰老；激发花粉产生原胚；促使细胞同步分裂。22、花药培养时为什么要用较高浓度蔗糖和较低浓度的激素？高糖预处理效应：接种前采用高糖预处理花药，一定时间后，再转移至适宜的糖浓度下培养，对诱导小孢子脱分化、再分化起促进作用，可大幅度地提高愈伤组织和胚状体的诱导率。23、人工诱发单倍体发生方式有哪些？①孤雄生殖②孤雌生殖人工诱发单倍体以孤雄生殖为主，目前在育种中应用最广泛的也是这种类型的单倍体。24、植物胚胎培养包含哪些内容？1、胚培养（l）成熟胚培养（2）幼胚培养2、胚珠培养——指未受精或受精后的胚珠离体培养。3、子房培养——指授粉和未授粉的子房培养4、胚乳培养——指处于细胞期胚乳的离体培养5、