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高效液相操作方法日立双击打开此软件开电脑，将仪器电源打开（共三个），再分别打开需使用的仪器模块，检测器最后打开，等待仪器自检完成后，打开软件。选择需使用的检测器，点击右键RI:示差检测器FLD:荧光检测器DAD:紫外检测器点击右键，可以选择打开或离线打开（通常用于编辑方法和序列，处理数据）软件•新建方法进入离线操作界面，编辑方法点击Method---New点击Pump，设置参数色谱柱最大耐受压设置流动相比例点击Sampler，设置参数样品温度为室温时，将此温度设置为25度。其他参数无需修改点击Oven，设置参数设置柱温箱温度点击检测器，设置参数设置单个样品运行时间检测波长在紫外区间，在此选择D2检测波长紫外检测器的参数设置示差检测器的参数设置设置单个样品运行时间示差检测器使用前需进行冲洗，具体操作方法见后页。荧光检测器的参数设置点击Saveas，保存方法选择保存文件的文件夹。如有需要，请在数据盘下新建文件夹，以名字命名，并将文件保存至此文件夹内•新建序列进入离线操作界面，编辑方法点击Sequence---New选择方法文件，后点击下一步样品ID和数据文件两项均选择：日期和时间填写运行样品数目，点击下一步选择数据保存路径第一个样品瓶所在样品盘位置，点击下一步此页可不填写，直接点击下一步此页可不填写，直接点击完成点击Saveas,保存所建序列•仪器操作流程•排气-冲洗柱前管路-连接色谱柱-采集基线-运行序列打开软件（在线打开），点击控制，选择仪器状态，查看仪器当前状态。若仪器出现错误请及时联系老师。绿色表示正常，红色表示仪器出错•将需使用管路插入流动相瓶内•点击Turnon,打开泵•打开排气阀（左转90度）•点击Purge，出现下面对话框选择管路，点击Purgeon计时5Min,点击Purgeoff.再依次选择其他需使用的管路，进行排气。排气结束请关闭排气阀注意：为了避免盐溶液与高浓度有机溶剂混用，发生盐析出，若流动相中有盐溶液，在使用仪器前后应按照程序清洗管路和泵，避免生成沉淀，造成仪器管路堵塞。清洗方法参见后页。•1.点击ManualSet，出现左边对话框，可以设置色谱柱最大耐受压，流速及流动相比例•2.设置流速3ml/min，冲洗柱前管路•3.设置流速0.2ml/min，连接色谱柱•4.提高流速，检查色谱柱连接是否有漏液•5.关上柱温箱门3.基线检查：点击Start,开始检查基线。在运行样品前，点击Stop，停止基线检查1.打开方法文件，选择运行方法2.点击Download，开始运行方法4.单进样：点击Single多个样品:点击Sequence,打开编辑完成的序列文件示差检测器：使用前需进行冲洗，点击Purgeon,冲洗时间30min以上，点击Purgeoff，冲洗结束。•数据处理1.在打开数据之前，需首先打开方法文件，再打开数据文件。2.打开数据文件流程：点击文件—数据—打开—选择数据使用紫外检测器，需再此选择DAD-CH1通道导出报告模板：RI和FLD通常选用“外标法”DAD通常选用“外标法CH1”使用缓冲盐溶液作为流动相注意事项•注意：1.若使用缓冲盐溶液作为流动相，首先需将该流动相管路插入10%甲醇或乙腈溶液中，进行Purge，然后插入缓冲盐溶液中再次进行Purge，防止缓冲盐溶液遇有机溶液发生盐析出，堵塞管路。实验结束时，将使用过缓冲盐溶液的管路，插入10%甲醇或乙腈溶液中，进行Purge。•2.连接色谱柱之前，使用10%甲醇或乙腈溶液，冲洗柱前管路；连接柱子后，使用5倍柱体积的10%甲醇或乙腈溶液进行过渡，或使用相同配比有机溶剂水溶液，例如，在使用40/60甲醇/磷酸盐缓冲液流动相之前，先使用5倍柱体积的40/60甲醇/纯水溶液冲洗色谱柱。实验结束时，先使用5倍柱体积的10%甲醇或乙腈溶液进行过渡，或使用相同配比有机溶剂水溶液。•以250*4.6mm的色谱柱为例，柱体积约为4.2ml，冲洗5倍体积约为20ml，即以1.0ml/min的流速，要冲洗20分钟。150*4.6mm的色谱柱，柱体积约为2.5ml。