实验一：观察DNA和RNA在细胞中的分布

实验一:观察DNA和RNA在细胞中的分布DNA主要分布于细胞核中，RNA主要分布于细胞质中。【实验原理】1.染色：一般用吡罗红甲基绿混合染色剂将细胞染色以显示DNA和RNA在细胞中的分布。甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色，以此达到区分的目的。2.水解：盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色质中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。【工具/原料】大烧杯、小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台、石棉网、火柴、吸水纸、显微镜。人的口腔上皮细胞、蒸馏水、质量分数为0.9%的NaCl溶液、质量分数为8%的盐酸。吡罗红甲基绿混合染色剂（取A液20mL、B液80mL配成染色剂，使用时现配。A液：取吡罗红甲基绿粉1g,加入100mL蒸馏水中溶解，放入棕色瓶中备用。B液：取乙酸钠16.4g,用蒸馏水溶解至1000mL。取乙酸12mL,用蒸馏水稀释至1000mL。取稀释的乙酸钠溶液30mL和乙酸20mL，加蒸馏水50mL，pH为4.8的溶液）。【方法步骤】一、制片：制作人口腔上皮细胞临时装片1.在洁净的载玻片上用滴管滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液。2.用消毒牙签在自己的口腔内侧壁上轻刮几下，再把牙签上附有碎屑的一端放在液滴中涂抹几下。3.用火柴点燃酒精灯，将涂有口轻上皮细胞的载玻片烘干。如图：二、水解1.在小烧杯中加入30mL质量分数为8%的盐酸，将烘干的载玻片放入小烧杯中。2.在大烧杯中加入30℃温水。3.将盛有盐酸和载玻片的小烧杯放在大烧杯中保温5min。如图：批注[马旭昌1]:常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞(为防止深颜色遮蔽反应产生的颜色，用植物细胞做时，应选择浅颜色的细胞，不可使用紫色表皮细胞)取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。批注[马旭昌2]:维持细胞的形态批注[马旭昌3]:取人口腔上皮细胞时必须漱口，原因是洗去食物残渣批注[马旭昌4]:目的：烘干可迅速杀死并固定细胞，否则细胞内的溶酶体会对核酸造成破坏。用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂。烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却1分钟。批注[马旭昌5]:盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色质中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。批注[马旭昌6]:水浴加热的目的是受热均匀；保温时间过短则水解不彻底，染色不充分，过长则水解过度，不易制片观察三、冲洗用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10s。如图：四、染色1.用吸水纸吸去载玻片上的水分。2.将吡罗红甲基绿混合染色剂滴2滴在载玻片上，染色5min。3.吸去多余染色剂，盖上盖玻片。如图：五、观察1.低倍镜观察：选择染色均匀、色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰。2.高倍镜观察：调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。可以清楚地看到被染成绿色的DNA主要集中于细胞核中，而被染成红色的RNA主要集中于细胞质中。如图所示：END批注[马旭昌7]:冲洗不彻底，残留的盐酸会影响染色批注[马旭昌8]:防止口腔上皮细胞被水流冲跑批注[马旭昌9]:为了更好地染色，水会降低染色剂的浓度批注[马旭昌10]:现用现配，防止染色较浅不易观察归纳：染色较浅不易观察的原因①水解不充分，染液不易进入细胞②冲洗不彻底，残留的盐酸会影响染色③染液配制不好，应现用现配注意事项DNA主要分布于细胞核中，但细胞质中线粒体与叶绿体内也有少量分布。RNA主要分布于细胞质中，但大部分RNA是在细胞核中合成后被运往细胞质的。【实验结果及结论】现象结论绿色明显集中且接近细胞中央DNA主要分布在细胞核中绿色周围的红色范围较广RNA主要分布在细胞质中批注[马旭昌11]:DNA和RNA在细胞核和细胞质中均有分布，只是量不同，故结构中强调“主要”而不能说“只”存在于细胞核或细胞质中。