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血液细胞分析仪基础知识讲座1..血液细胞分析仪原理与关键技术讲座大纲血液检验的地位。血液的常识。血细胞分析仪的知识。血液细胞分析仪示例。血液细胞分析仪的展望本次讲座重点内容1.血液细胞分析仪的基本原理2.白细胞的分类3.如何保证产品的质量4.PE6000液路分析血球仪的发展史42年美国科学家库尔特发明了用电阻法计数粒子的专利技术。56年他又将这一技术应用于血液细胞计数获得成功。62年我国第一台血细胞计数仪在上海研制成功。60年代未血球仪除完成血球计数外增加了血红蛋白测试（HGB），70年代血小板计数问世。80年代开发了血细胞3分类、5分类。90年代开发出可对网织红细胞计数的分析仪，同时5分类及幼稚细胞检测更成熟，并发展成为血细胞分析流水线。医学检验包括：临床生物化学、临床微生物学、临床免疫学、临床血液学和临床基础检验学（临床检验）。临床检验学——着重对人体血液、尿液、粪便及其它体液和分泌物进行检查。血液检验是临床检验中最常用、最有效的基本内容。血液检验的作用对各种系统疾病的诊断和鉴别。是诊断各种血液病的主要依据。一.血液的基本知识血液的组成血液的概况血液是由血细胞和血浆组成，血细胞包括红细胞、血小板和白细胞。血浆中包括各种蛋白（抗体、酶类等）、无机盐、激素、维生素和代谢产物。水分占91%~92%。理化特征：红色（血红蛋白）不透明，含量占体重的7-9%，约5L。Ph值为7.35~7.45，比重为1.05~1.06，相对粘度为4~5，渗透压为2.6~3.9kPa。血液的功能通过循环系统与全身各个组织器官密切联系。参与机体呼吸：携氧和排出二氧化碳。运输：将营养物质运送到器官组织，将体内代谢废物运往肾、肺等器官排出体外。防御：血液中白细胞和抗体参与机体抗感染和其他免疫反应。调节：调节体液渗透压、酸碱平衡和体温平衡。将正常血液抗凝离心后得到沉淀的血液。液体的血浆占50-60%血细胞占40-60%（白细胞、血小板、红细胞）。血液的基本组成血浆白细胞和血小板红细胞血细胞的分类和形态寿命：7天120天8天直径：60~120fl120~1000fl2~30fl(20um)(6.7~7.7um)(2~3um)功能：抗感染，免疫携氧，代谢产物凝血功能白细胞红细胞血小板白细胞的种类•中性粒细胞（75%）•单核细胞（5%）•淋巴细胞（25%）•嗜酸性粒细胞•嗜碱性粒细胞经过瑞氏染色后的各种白细胞血细胞的发育过程共同的母细胞：造血多能干细胞单核细胞原单核细胞幼单核细胞单核细胞白细胞的发育原始粒细胞早幼粒细胞嗜酸性中幼粒细胞嗜酸性晚幼粒细胞嗜酸性杆状核嗜酸性分叶核嗜碱性中幼粒细胞嗜碱性晚幼粒细胞嗜碱性杆状核嗜碱性分叶核中性中幼粒细胞中性晚幼粒细胞中性杆状核中性份叶核红细胞的发育原红细胞早幼红细胞中幼红细胞晚幼红细胞成熟红细胞血细胞分析仪的知识手工法检验的过程1、细胞计数（红细胞、白细胞、血小板等血细胞的镜下计数）2、定量血红蛋白3、白细胞分类（瑞氏染色）4、其它：血细胞比积、红细胞形态、嗜酸球计数等血球仪发展50年代~80年代（半自动）：需将样本经机外稀释后才能检测，易受干扰，随机误差也大。80年代后（全自动）：血液直接被吸入血液细胞分析仪后，在机内自动稀释、自动加溶血素、定时检测，有较高的精确度和准确性。血球仪发展近年（联合型血液细胞分析系统）：将血细胞分析、涂片机、染片机、网织红细胞计数仪串联在一起。自动加样系统和真空采血管的应用，避免实验室的随机误差，提高工作效率，避免实验环节造成的血行感染，成为仪器发展和使用的潮流。血细胞分析仪的发展50年代，库尔特发明电阻抗法库尔特原理（电阻抗法）：根据血细胞是不良导体的性质，它通过微孔时就引起电阻的变化，电信号的变化被检测出来。血细胞分析仪的现况国内：二级医院以上，全自动三分类二级医院以下，二分类或三分类或没有国外：全自动五分类，应用其它新技术，可检测幼稚血细胞。手工法血细胞分析仪手工法操作过程的随机误差，实验器材的系统误差及检测方法本身的固有误差，计数不但费时费力，实验结果的精确性、准确性差。血细胞分析仪测量水平不断提高，测量参数不断增加，快速、高效。为临床提供更多有用的实验数据。工作原理细胞分析原理：阻抗法血红蛋白测量:光电比色法氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法。其它参数：通过计算机内换算白细胞分析原理白细胞分析原理加溶血素后，白细胞大小分布如下：第一群：小细胞区（35~90fl）淋巴细胞第二群：中间细胞（90~160fl）嗜碱性、嗜酸性、单核第三群：大细胞区（160fl以上）中性粒细胞血细胞分析原理血小板分析原理阻抗法电阻阻抗法计数原理血细胞分析仪是利用小孔换能装置实现的,是一个用阻抗法计数的核心部件---阻抗法测试传感器（见下页示意图），管内充满导电液体，两电极接上恒流电源，中部为一小孔，小孔孔径与细胞成比列，在负压的作用下，细胞通过小孔瞬间，排开等体积的电解液，使电解液的等效电阻瞬间变大，这个变大的电阻在恒流源作用下引起一个等比例增大的电压。细胞离开小孔电解液的等效电阻又恢复正常，直到下一个细胞到达小孔，这样细胞连续的通过小孔，就在电极两端产生一连串的电压脉冲。脉冲的个数与通过小孔的细胞数相当，脉冲的幅度与细胞的体积成正比。将这些脉冲经过整形、放大，计算、储存、处理，就得到了细胞分类、计数的原始数据。脉冲宽度窄脉冲宽度宽脉冲幅度低脉冲幅度高小细胞大细胞稀释液稀释液后池电极前池电极恒流源宝石孔后池前池计数池液路的计数实验二.血球仪的三分类2白细胞的三分类第一类（35~90fL）：淋巴细胞第二类（90~160fL）：嗜碱性、嗜酸性、单核第三类（160fL）：中性粒细胞白细胞直方图血液细胞分析仪将白细胞按体积大小（电压幅值的高低）从35~450fL分为256个通道，每个通道1.64fL，细胞按大小放在不同的通道中，得到白细胞的直方图。第一群（35~90fL）：淋巴细胞第二群（90~160fL）：单核细胞（中间细胞）第三群（160fL）：中性粒细胞（大细胞）WBC直方图*各种报警符号RBC直方图PLT直方图氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法红细胞溶解后，血红蛋白被氧化成高铁血红蛋白（Hi），再与CN根结合生成稳定棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。HiCN在540nm有最大吸收峰。HiCN法具有操作简单，显色快且稳定，直接定值等优点。缺点：氰化物有剧毒(氰化钾）无氰溶血素：我公司已于03年研制成功，现已投入批量生产。血细胞分析的过程1.标本的采集和运输。2.稀释标本或用全血上机分析。3.检验者对结果的判断和分析。4.编辑或修改病人报告。5.打印报告。重做注意事项保证采样的规范性。试剂对实验的影响。（应尽量采用原装试剂和溶血素）操作的影响标准物混匀样品的混匀三.血球仪的质量保证质控物（QualityControl）血球产品“质控物”是用来标定出厂仪器的“标准”，也是医院用来定期效准仪器的“标准”。目前使用的“质控物”大多是进口产品，在“质控物”包装盒中供应商会提供一个参考“靶值”。由于不同种类的仪器有其差易，供应商会提供的“靶值”仅供参考。生产商必须测定出与自己生产的仪器相符合的“靶值”供生产作标定用。质控物（QualityControl）用途：用于对血液细胞分析仪的质量控制，以保证仪器测定结果的准确性。用法：与真正血样的操作方式相同，用血液细胞分析仪对质控物进行检验，通过分析测量质控物所得到的数值来评估仪器的准确性。试剂成分：稳定的人类红血球，生物模拟血小板成分和固化红细胞（用于模拟白血球），以及含防腐剂的介质。溯源“溯源”就是找一台溯源标准机（称靶机），目前只有被检验行业公认的“库尔特”和“东亚”两家公司销售出的血球仪（它一定是被定期效准过）。参数转移（一）首先准备一台被检产品的“标准机”取30~50只新鲜血，到选中“靶机”上测试，将测试报告连同血样在2小时内送到被检产品的“标准机”进行测试将测试数据分成3~5组（每10只为一组）统计各组在“溯源”的标准机上测试的各组各参数的均值，计算出总均值，例A参数转移（二）统计各组在被检产品的标准机上测试的各组各参数的均值，计算出总均值，例B计算血样转移参数K1（K1=A/B）将质控物到被检产品的标准机上测试3~5组，统计均值，例C计算质控转移参数K2（K2=B/C）计算靶值根据质控靶值、K1和K2计算出该批质控的靶值，提供给生产定标。每批质控到后都必须这样确定靶值。定靶值过程是一个精细的工作，一般由专人负责。定靶值过程接触新鲜血，要特别提醒，注意事项！定标1、准备：定标液（质控液）本底测试——通过确认重复性好（最少3次）2、标定过程：设好进血模式手工法：新系数=目前系数×标定液参考值/测量平均值自动定标：仪器自动换算新的系数。仪器的定标和质量控制校准物溯源：定标：维持仪器的准确性质控：检测可能存在的系统误差，保证重复性。（对操作者的理论及操作水平有较高要求）血细胞分析仪测试参数WBC白细胞数目：4.0-10.0X109/LRBC红细胞数目：3.5-5.50X1012/LPLT血小板数目：100-300X109/LHGB血红蛋白：110-160g/LLymph#淋巴细胞数目：0.6-4.1X109/LMid#中间细胞数目：0.1-1.8X109/LGran#粒细胞数目：2.0-7.8X109/LLymph%淋巴细胞百分比：20.0-40.0%Mid%中间细胞百分比：1.0-15.0%Gran%粒细胞百分比：50.0-70.0%MCHC平均红细胞血红蛋白浓度：320-360g/LMCV平均红细胞体积：80.0-99.0fLMCH平均红细胞血红蛋白：26.0-32.0pgRDW-CV红细胞分布宽度变异系数：11.5-14.5%RDW-SD红细胞分布宽度标准差：35.0-56.0fLHCT红细胞压积：36.0-48.0%MPV平均血小板体积：7.4-10.4fLPDW血小板分布宽度：15.0-17.0%PCT血小板压积：0.108-0.282%临床应用价值一、诊断临床疾病WBCHGB和RBCPLT二、常规检查判断身体的健康情况和免疫能力临床应用血细胞参数的临床意义红细胞计数：1.生理变异：随年龄和性别不同有差异。新生婴儿、位处高原、情绪激动可使红细胞增加。2.病理意义：先天性心脏病、慢性肺疾患、慢性一氧化碳中毒、高原病等慢性缺氧可刺激红细胞生成引起红细胞增加。严重呕吐、腹泻等引起脱水时，血液浓缩，红细胞相对增多。反之，慢急性失血缺乏造血原料，骨髓造血障碍等引起的贫血时，红细胞数减少。白细胞计数：1.生理变异：随年龄不同时间不同，季节不同，变异较大。早上低、下午高，饭前较饭后低，冬季较夏季高，激烈运动及体力劳动都可使白细胞数增多。2.病理意义：急性化脓性感染，如脓肿、扁桃体炎、肺炎、阑尾炎、脑膜炎、败血症等白细胞数增多。外烧伤，手术后，尿毒症等也会增高。障碍性贫血，部分急性白血病等造血干细胞疾病，某些传染性疾病如伤寒、黑热病、流感、传染性肝炎等白细胞数减少。血小板计数：1.生理变异：健康人血小板数较稳定，无性别、年龄差别。2.病理意义：血小板减少见于脾功能亢进、尿毒症、肿瘤骨髓转移等。白血病、败血症、障碍性贫血、溶血性贫血、骨髓增生综合症均可伴有血小板减少。血小板增多见于原发性血小板增多症，慢性粒细胞白血病，增多症，脾切除手术后等。骨折、出血也可引起血小板中性粒细胞增多，急性化脓性感染，粒细胞白血病，急性出血，溶血，尿、酸、汞、铅中毒。减少，伤寒，流感严重感染等。嗜酸细胞增多，慢性粒细胞白血病、癌转移、铅、铋中毒。减少，伤寒、副伤寒等。淋巴细胞增多，百日咳、传染性单核细胞增多症、慢性淋巴细胞白血病、麻疹、腮腺炎、结核、传染性肝炎等。减少，传染病急性期、放射病、细胞免疫缺陷等。血液细胞分析仪的特点电子原理、光学原理、化学原理的综合光、机、电、生物、化学、流体力学、液、气的集成计算技术应用的典范血液细胞分析仪发展现状1.产品品种多样化：2.控制智能化：3.测试自动化：4.检测项目增多：5.系统网络化：6.先进测试技术在血液细胞分析仪中的应用：血液细胞分析