实验二-食品中酸价的测定

实验二食品中酸价的测定一、实验目的1.掌握食品中酸价的测定原理及方法。2.熟练掌握滴定法操作技巧。二、实验原理用有机溶剂将油脂试样溶解成样品溶液，再用氢氧化钾或氢氧化钠标准滴定溶液中和滴定样品溶液中的游离脂肪酸，以指示剂相应的颜色变化来判定滴定终点，最后通过滴定终点消耗的标准滴定溶液的体积计算油脂试样的酸价。三、器材与试剂除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。1.实验仪器（1）10mL微量滴定管：最小刻度为0.05mL。（2）天平：感量0.001g。（3）恒温水浴锅。（4）恒温干燥箱。（5）离心机：最高转速不低于8000r/min。（6）旋转蒸发仪。（7）索氏脂肪提取装置。（8）植物油料粉碎机或研磨机。2.实验试剂（1）异丙醇(C3H8O)。（2）乙醚(C4H10O)。（3）甲基叔丁基醚(C5H12O)。（4）95%乙醇(C2H6O)。（5）酚酞(C20H14O4)，指示剂。（6）百里香酚酞(C28H30O4)，指示剂。（7）碱性蓝6B(C37H31N3O4)，指示剂。（8）无水硫酸钠(Na2SO4)，在105℃~110℃条件下充分烘干，然后装入密闭容器冷却并保存。（9）无水乙醚(C4H10O)。（10）石油醚，30℃~60℃沸程。3.试剂配制（1）氢氧化钾或氢氧化钠标准滴定水溶液，浓度为0.1mol/L或0.5mol/L，按照GB/T601标准要求配制和标定，也可购买市售商品化试剂。（2）乙醚—异丙醇混合液：乙醚+异丙醇=1+1，500mL的乙醚与500mL的异丙醇充分互溶混合，用时现配。（3）酚酞指示剂：称取1g的酚酞，加入100mL的95%乙醇并搅拌至完全溶解。（4）百里香酚酞指示剂：称取2g的百里香酚酞，加入100mL的95%乙醇并搅拌至完全溶解。（5）碱性蓝6B指示剂：称取2g的碱性蓝6B，加入100mL的95%乙醇并搅拌至完全溶解。四、操作步骤1.试样制备（1）食用油脂试样的制备：若食用油脂样品常温下呈液态，且为澄清液体，则充分混匀后直接取样，否则按照附录A的要求进行除杂和脱水干燥处理；若食用油脂样品常温下为固态，则按照附录B制备；若样品为经乳化加工的食用油脂，则按照附录C制备。（2）植物油料试样的制备：先用粉碎机或研磨机把植物油料粉碎成均匀的细颗粒，脆性较高的植物油料(如大豆、葵花籽、棉籽、油菜籽等)应粉碎至粒径为0.8mm~3mm甚至更小的细颗粒，而脆性较低的植物油料(如椰干、棕榈仁等)应粉碎至粒径不大于6mm的颗粒。其间若发热明显，应按照附录D中D.3进行粉碎。取粉碎的植物油料细颗粒装入索氏脂肪提取装置中，再加入适量的提取溶剂(无水乙醚或石油醚)，加热并回流提取4h。最后收集并合并所有的提取液于一个烧瓶中，置于水浴温度不高于45℃的旋转蒸发仪内，0.08MPa~0.1MPa负压条件下，将其中的溶剂彻底旋转蒸干，取残留的液体油脂作为试样进行酸价测定。若残留的液态油脂浑浊、乳化、分层或有沉淀，应按照附录A的要求进行除杂和脱水干燥的处理。2.试样称量根据制备试样的颜色和估计的酸价，按照表（1）规定称量试样。估计的酸价（mg/g）试样的最小称样量（g）使用滴定液的浓度（mol/L）试样称量的精确度（g）0~1200.10.051~4100.10.024~152.50.10.0115~750.5~3.00.1或0.50.001750.2~1.00.50.001试样称样量和滴定液浓度应使滴定液用量在0.2mL~10mL之间(扣除空白后)。若检测后，发现样品的实际称样量与该样品酸价所对应的应有称样量不符，应按照上表要求，调整称样量后重新检测。3.测定（1）试样测定：取一个干净的250ml的锥形瓶，按照试样称量表要求用天平称取制备的油脂试样，其质量m单位为克。加入乙醚异丙醇混合液50mL~100mL和3滴~4滴的酚酞指示剂，充分振摇溶解试样。再用配制好的氢氧化钾或氢氧化钠标准滴定溶液对试样溶液进行手工滴定，当试样溶液初现微红色，且15s内无明显褪色时，为滴定的终点。立刻停止滴定，记录下此滴定所消耗的标准滴定溶液的毫升数，此数值为V。对于深色泽的油脂样品，可用百里香酚酞指示剂或碱性蓝6B指示剂取代酚酞指示剂，滴定时，当颜色变为蓝色时为百里香酚酞的滴定终点，碱性蓝6B指示剂的滴定终点为由蓝色变红色。米糠油(稻米油)的冷溶剂指示剂法测定酸价只能用碱性蓝6B指示剂。（2）空白试验：另取一个干净的250mL的锥形瓶，准确加入与试样测定时相同体积、相同种类的乙醚—异丙醇有机溶剂混合液和指示剂，振摇混匀。然后再用装有氢氧化钾或氢氧化钠标准滴定溶液的刻度滴定管进行手工滴定，当溶液初现微红色，且15s内无明显褪色时，为滴定的终点。立刻停止滴定，记录下此滴定所消耗的标准滴定溶液的毫升数，此数值为V0。五、计算结果酸价(又称酸值)按照式(1)的要求进行计算：mVVXAV1.56c0（1）式中：XAV———酸价(mg/g)；V———试样测定所消耗的标准滴定溶液的体积(mL)；V0———相应的空白测定所消耗的标准滴定溶液的体积(mL)；c———标准滴定溶液的摩尔浓度(mol/L)；56.1———氢氧化钾的摩尔质量(g/mol)；m———油脂样品的称样量(g)。酸价≤1mg/g，计算结果保留2位小数，1mg/g＜酸价≤100mg/g，计算结果保留1位小数；酸价100mg/g，计算结果保留至整数位。精密度：当酸价1mg/g时，在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值15%；当酸价≥1mg/g时，在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值12%。六、注意事项1.食品中油脂的酸价受温度影响明显，在试样处理过程中应严格控制温度。2.滴定过程中注意控制滴定速度并观察溶液颜色变化。七、思考题1.油脂酸败的原因是什么？2.测定油脂酸价时，装油的锥形瓶或油样中不得混有无机酸，为什么？八、参考文献GB5009.229-2016食品安全国家标准食品中酸价的测定附录A油脂试样的除杂和干燥脱水A.1除杂作为试样的样品应为液态、澄清、无沉淀并充分混匀。如果样品不澄清、有沉淀，则应将油脂置于50℃的水浴或恒温干燥箱内，将油脂的温度加热至50℃并充分振摇以熔化可能的油脂结晶。若此时油脂样品变为澄清、无沉淀，则可作为试样，否则应将油脂置于50℃的恒温干燥箱内，用滤纸过滤不溶性的杂质，取过滤后的澄清液体油脂作为试样，过滤过程应尽快完成。若油脂样品中的杂质含量较高，且颗粒细小难以过滤干净，可先将油脂样品用离心机以8000r/min~10000r/min的转速离心10min~20min，沉淀杂质。对于凝固点高于50℃或含有凝固点高于50℃油脂成分的样品，则应将油脂置于比其凝固点高10℃左右的水浴或恒温干燥箱内，将油脂加热并充分振摇以熔化可能的油脂结晶。若还需过滤，则将油脂置于比其凝固点高10℃左右的恒温干燥箱内，用滤纸过滤不溶性的杂质，取过滤后的澄清液体油脂作为试样，过滤过程应尽快完成。A.2干燥脱水若油脂中含有水分，则通过A.1的处理后仍旧无法达到澄清，应进行干燥脱水。对于无结晶或凝固现象的油脂，以及经过A.1的处理并冷却至室温后无结晶或凝固现象的油脂，可按每10g油脂加入1g~2g的比例加入无水硫酸钠，并充分搅拌混合吸附脱水，然后用滤纸过滤，取过滤后的澄清液体油脂作为试样。若油脂样品中的水分含量较高，可先将油脂样品用离心机以8000r/min~10000r/min的转速离心10min~20min，分层后，取上层的油脂样品再用无水硫酸钠吸附脱水。对于室温下有结晶或凝固现象的油脂，以及经过A.1的处理并冷却至室温后有明显结晶或凝固现象的油脂，可将油脂样品用适量的石油醚，于40℃~55℃水浴内完全溶解后，加入适量无水硫酸钠，在维持加热条件下充分搅拌混合吸附脱水并静置沉淀硫酸钠使溶液澄清，然后收集上清液，将上清液置于水浴温度不高于45℃的旋转蒸发仪内，0.08MPa~0.1MPa负压条件下，将其中的石油醚彻底旋转蒸干，取残留的液体油脂作为试样。若残留油脂有浑浊显现，将油脂样品按照A.1中相关要求再进行一次过滤除杂，便可获得澄清油脂样品。对于由于凝固点过高而无法溶解于石油醚的油脂样品，则将油脂置于比其凝固点高10℃左右的水浴或恒温干燥箱内，将油脂加热并充分振摇以熔化可能的油脂结晶或凝固物，然后加入适量的无水硫酸钠，在同样的温度环境下，充分搅拌混合吸附脱水并静置沉淀硫酸钠，然后仍在相同的加热条件下过滤上层的液态油脂样品，,获得澄清的油脂样品，过滤过程应尽快完成。附录B固态油脂试样的处理按表1的要求，称取固态油脂样品，置于比其熔点高10℃左右的水浴或恒温干燥箱内，加热完全熔化固态油脂试样，若熔化后的油脂试样完全澄清，则可混匀后直接取样。若熔化后的油脂样品浑浊或有沉淀，则应按附录A的相关要求再进行除杂和脱水处理。附录C乳化类油脂试样的处理称取的乳化油脂样品(含油量应符合表1的要求)，加入试样体积5倍~10倍的石油醚，然后搅拌直至样品完全溶解于石油醚中(若油脂样品凝固点过高，可置于于40℃~55℃水浴内搅拌至完全溶解)，然后充分静置并分层后，取上层有机相提取液，置于水浴温度不高于45℃的旋转蒸发仪内，0.08MPa~0.1MPa负压条件下，将其中的石油醚彻底旋转蒸干，取残留的液体油脂作为试样。若残留的油脂浑浊、乳化、分层或有沉淀，,则应按照附录A的要求进行除杂和脱水干燥的处理。对于难于溶解的油脂可采用以下溶剂为浸提液：石油醚+甲基叔丁基醚=1+3，250mL的石油醚与750mL的甲基叔丁基醚充分互溶混合。若油脂样品能完全溶解于石油醚等溶剂中，成为澄清的溶液或者只是成为悬浮液而不分层，则直接加入适量的无水硫酸钠，在同样的温度条件下，充分搅拌混合吸附脱水并静置沉淀硫酸钠，然后取上层清液置于水浴温度不高于45℃的旋转蒸发仪内，0.08MPa~0.1MPa负压条件下，将其中的石油醚彻底旋转蒸干,取残留的液体油脂作为试样。若残留的油脂浑浊、乳化、分层或有沉淀，则应按照附录A的要求进行除杂和脱水干燥的处理。附录D样品的粉碎D.1普通粉碎先将样品切割或分割小片或小块，再将其放入食品粉碎机中粉碎成粉末，并通过圆孔筛(若粉碎后样品粉末无法完全通过圆孔筛，可用研钵进一步研磨研细再过筛)。取筛下物进行油脂的提取。D.2普通捣碎先将样品切割或分割小片或小块，再将其放入研钵中，然后不断研磨，使样品充分的捣碎、捣烂和混合。也可使用食品捣碎机将样品捣碎、捣烂和混合。对于花生酱、芝麻酱、辣椒酱等流动性样品，直接搅拌并充分混匀即可。D.3冷冻粉碎先将样品剪切成小块、小片或小粒，然后放入研钵中，加入适量的液氮，趁冷冻状态进行初步的捣烂并充分混匀。然后，趁未解冻，将捣烂的样品倒入组织捣碎机的不锈钢捣碎杯中，此时可再向捣碎杯中加入少量的液氮，然后以10000r/min~15000r/min的转速进行冷冻粉碎，将样品粉碎至大部分粒径不大于4mm的颗粒。D.4含有调味油包的预包装食品的粉碎先按照D.1~D.3相应的粉碎技术，将预包装食品中含油的、非调味油包的食用部分粉碎，然后依据预包装食品原始最小包装单位中的比例，将调味油包中的油脂同粉碎的含油食用部分一起充分混合。