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标记比例：（抗体:HRP标记质量比位1：1；抗原:HRP质量比为1：4左右）；根据标记比例计算所需HRP量X。一、蛋白透析1、目标蛋白透析到CB(pH9.6，50mM)中，换液2次以上；二、酶的氧化2、称取XmgHRP干粉(BiozymeorSigma)溶于X/20mLddH2O中。3、称取NaIO4ymg(yX)，溶于y/20mL的ddH2O中，吸取X/20mLNaIO4溶液与X/20mL的HRP溶液缓慢混合，4℃下静置30min。（此时溶液为绿色）注意：此后的操作均在避光条件下进行。4、吸取XµL乙二醇（体积太小，难以控制，所以请应事先用水稀释至50µL进行）缓慢加入氧化后的HRP溶液，室温避光静置30min。（此时溶液为褐色）三、标记5、将氧化好的HRP直接加入到已透析充分的抗原/抗体蛋白6、继续透析到CB(pH9.6，50mM)中，换液2次以上；7、加入X/5mgNaBH4到其中（需新鲜配置，先溶于10XµL的ddH2O中），4℃静置2hr（不能再透析），每30min摇动1次。8、PBS(10mM，pH7.2)透析过夜，标记液中加入体积比50%的甘油，混匀后置于-20℃保存。