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常用分子生物学技术的原理及其应用一、选择题（一）A型题1．分子杂交实验不能用于A．单链DNA与RNA分子之间的杂交B．双链DNA与RNA分子之间的杂交C．单链RNA分子之间的杂交D．单链DNA分子之间的杂交E．抗原与抗体分子之间的杂交2．关于探针叙述错误的是A．带有特殊标记B．具有特定序列C．必须是双链的核酸片段D．可以是基因组DNA片段E．可以是抗体3．下列哪种物质不能用作探针A．DNA片段B．cDNAC．蛋白质D．氨基酸E．RNA片段4．印迹技术可以分为A．DNA印迹B．RNA印迹C．蛋白质印迹D．斑点印迹E．以上都对5．PCR实验延伸温度一般是A．90℃B．72℃C．80℃D．95℃E．60℃6．Westernblot中的探针是A．RNAB．单链DNAC．cDNAD．抗体E．双链DNA7．Northernblotting与Southernblotting不同的是A．基本原理不同B．无需进行限制性内切酶消化C．探针必须是RNAD．探针必须是DNAE．靠毛细作用进行转移8．可以不经电泳分离而直接点样在NC膜上进行杂交分析的是A．斑点印迹B．原位杂交C．RNA印迹D．DNA芯片技术E．DNA印迹9．下列哪种物质在PCR反应中不能作为模板A．RNAB．单链DNAC．cDNAD．蛋白质E．双链DNA10．RT-PCR中不涉及的是A．探针B．cDNAC．逆转录酶D．RNAE．dNTP11．关于PCR的基本成分叙述错误的是A．特异性引物B．耐热性DNA聚合酶C．dNTPD．含有Zn2+的缓冲液E．模板12．DNA链末端合成终止法不需要A．ddNTPB．dNTPC．引物标记D．DNA聚合酶E．模板13．cDNA文库构建不需要A．提取mRNAB．限制性内切酶裂解mRNAC．逆转录合成cDNAD．将cDNA克隆入质粒或噬菌体E．重组载体转化宿主细胞14．标签蛋白沉淀是A．研究蛋白质相互作用的技术B．基于亲和色谱原理C．常用标签是GSTD．也可以是6组氨酸标签E．以上都对15．研究蛋白质与DNA在染色质环境下相互作用的技术是A．标签蛋白沉淀B．酵母双杂交C．凝胶迁移变动实验D．染色质免疫沉淀法E．噬菌体显示筛选系统16．动物整体克隆技术又称为A．转基因技术B．基因灭活技术C．核转移技术D．基因剔除技术E．基因转移技术17．目前主要克隆的致病基因是A．糖尿病致病基因B．恶性肿瘤致病基因C．单基因致病基因D．多基因致病基因E．高血压致病基因18．基因疫苗主要是指A．DNA疫苗B．RNA疫苗C．反义核酸D．核酶E．小干扰RNA19．目前基因治疗中选用最多的基因载体是A．噬菌体B．脂质体C．逆转录病毒D．腺病毒相关病毒E．腺病毒20．目前基因治疗多采用的方法是A．基因增补B．基因置换C．基因矫正D．基因灭活E．基因疫苗（二）B型题A．SouthernblottingB．NorthernblottingC．WesternblottingD．dotblottingE．insituhybridization1．不需要电泳、转膜等程序2．电泳前不需进行限制性内切酶消化3．靠电转移完成生物大分子的转移4．直接在组织切片或细胞涂片上进行杂交A．逆转录PCRB．原位PCRC．实时PCRD．多重PCRE．RFLP5．将目的基因扩增与定位相结合6．能动态检测反应过程中的产物量7．将RNA的逆转录和PCR反应联合应用的一项技术8．在同一反应中采取多对引物A．功能克隆B．定位克隆C．转基因技术D．核转移技术E．基因剔除9．也叫基因靶向灭活10．该技术中，被导入的目的基因称为转基因11．从对基因编码产物的功能的了解出发克隆致病基因A．基因疫苗B．基因矫正C．基因置换D．基因增补E．基因失活12．目前基因治疗采用最多的方法是13．将致病基因的异常碱基进行修正的基因治疗方法是14．将正常基因经体内基因同源重组原位替换致病基因的基因治疗方法是15．利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是A．酵母双杂交技术B．标签蛋白沉淀C．电泳迁移率变动测定D．染色质免疫沉淀E．荧光共振能量转换效应分析16．凝胶阻滞实验17．需要设计诱饵基因18．近年该技术与芯片技术结合在一起，成为一项鉴定特定核蛋白的DNA结合靶点的新技术（三）X型题1．核酸探针可以是A．人工合成寡核苷酸片段B．基因组DNA片段C．RNA片段D．cDNA全长或部分片段E．核苷酸2．核酸分子杂交可以形成的杂化双链有A．DNA/DNAB．RNA/RNAC．DNA/RNAD．寡核苷酸/RNAE．寡核苷酸/DNA3．PCR技术主要用于A．目的基因的克隆B．基因的体外突变C．DNA和RNA的微量分析D．DNA序列测定E．基因突变分析4．分子杂交技术的原理涉及A．分子杂交特性B．基因文库C．印迹技术D．生物芯片E．探针技术5．关于DNA链末端合成终止法正确的是A．需加入的链终止剂ddNTPB．dNTP需要标记C．引物也需要标记D．又称Sanger法E．ddNTP缺乏5'-OH6．基因组DNA文库建立需要A．基因组进行限制性内切酶消化B．DNA片段克隆到相应载体中C．重组体感染宿主菌D．筛选目的基因可以通过核酸分子杂交的方法进行E．以λ噬菌体为载体的人基因组DNA文库的克隆数目至少应在106以上7．用于构建基因组DNA文库的载体有A．酵母人工染色体B．粘粒C．λ噬菌体D．腺病毒E．脂质体8．基因诊断较常规诊断其特点有A．属于病因诊断B．特异性强C．适用范围窄D．灵敏度高E．有放大效应9．基因失活的常用技术包括A．基因疫苗B．核酶C．小干扰RNAD．反义核酸E．基因置换10．克隆羊多莉的产生属于A．同种异体细胞转移技术B．同种异体细胞核转移技术C．试管内受精D．无性繁殖E．同种异体细胞转基因技术11．疾病动物模型可用于A．探讨疾病的发生机制B．克隆致病基因C．新治疗方法的筛选系统D．新药物的筛选系统E．新疾病模型的筛选系统12．蛋白质芯片主要应用于A．蛋白质结构的研究B．蛋白质表达谱的研究C．蛋白质功能的研究D．蛋白质之间的相互作用研究E．疾病的诊断和新药的筛选13．研究蛋白质相互作用的技术包括A．标签蛋白沉淀B．酵母双杂交C．凝胶阻滞实验D．噬菌体显示筛选系统E．DNA印迹14．基因治疗的基本程序包括A．治疗性基因的选择B．基因载体的选择C．靶细胞的选择D．基因转移E．回输体内15．目前可用作基因治疗的基因载体包括A．腺病毒相关病毒B．噬菌体C．腺病毒D．逆转录病毒E．粘粒二、是非题1．Southernblot主要用于RNA的定性和定量分析。2．蛋白质印迹分析技术中蛋白质的转移，可以用电转移，也可以靠毛细作用转移。3．实时PCR技术与普通PCR技术相比，它可以动态监测反应过程中产物的量。4．Sanger法在测定核酸序列时，反应管中加入的dNTP仅标记一种即可。5．生物芯片可以是DNA芯片、cDNA芯片或蛋白质芯片。6．酵母双杂交技术是分析DNA—蛋白质相互作用的一项重要技术。7．核转移技术，是指将动物体细胞核全部导入另一个体去除了胞核的卵细胞内，使之发育成个体。8．基因矫正是用正常的基因通过体内基因同源重组，替换致病基因来达到治疗目的。9．目前基因治疗多采用基因增补的方式。10．RNA印迹技术中，RNA分子在转移前需进行限制性内切酶切割。11．PCR反应中变性主要是使模板DNA完全变性为单链。12．实时PCR技术中，TagDNA聚合酶在链延伸过程中遇到荧光探针，可发挥3'→5'核酸外切酶活性。13．酵母双杂交系统可用于证明两种已知基因序列的蛋白质可以相互作用的生物信息学推测。14．转基因技术即动物克隆技术，是无性繁殖。15．内源基因结构突变发生在生殖细胞可引起恶性肿瘤。16．基因转移和基因剔除技术在医学中最重要的用途是建立疾病动物模型。17．定位克隆是指从对基因编码产物的功能的了解出发来克隆致病基因。18．目前DNA序列分析是找出患者有关基因变异所在的最为直接和确切的基因诊断法。三、填空题1．分子杂交是利用DNA和这一基本性质来进行DNA或RNA定性、定量分析的。2．在印迹技术中，将DNA片段在琼脂糖凝胶中使其成为，利用使胶中的生物大分子转移到膜上，使之成为固相化分子。3．印迹技术的基本流程依次为、、和。4．Southernblotting主要用于定性和定量分析，亦可用于和的分析。5．Northernblotting主要用于检测的表达水平，敏感性较PCR，但其具有和的优点。6．Westernblotting主要用于检测样品中的存在、细胞中以及的相互作用研究等。7．PCR的基本反应步骤包括、、。8．基因芯片适用于分析不同组织细胞或同一细胞不同状态下的，其原理是基于。9．在转基因技术中，被导入的目的基因称为，目的基因的受体动物称为。10．标签融合蛋白结合实验主要用于证明是否存在直接的物理结合，分析结合的及筛选细胞内与融合蛋白相结合的。11．染色质免疫沉淀法是目前可以研究与相互作用的主要方法。12．目前克隆致病相关基因主要有和两大策略。13．根据受体细胞的类型不同，基因治疗分为的基因治疗和的基因治疗两大类。14．目前使用的基因载体有和两大类。15．在人类基因治疗实施中，导入基因的方式有和两大类。四、名词解释1．probe2．blottingtechnologe3．genelibary4．核转移技术5．genechip6．genetherapy7．genediagnosis8．基因疫苗9．geneinactivation10．genereplacement11．geneaugmentation12．PCR13．exvivo五、问答题1．简述印迹技术的分类及应用。2．简述PCR反应体系的基本成分、PCR的基本反应步骤和主要用途。3．简述PCR技术的基本原理。4．简述逆转录PCR、原位PCR和实时PCR技术的基本原理和主要区别。5．简述DNA链末端合成终止法（Sanger法）测序的基本原理。6．简述基因转移和基因剔除技术在医学发展中的作用。7．简述酵母双杂交技术的基本原理及应用。8．试述染色质免疫沉淀法基本原理及用途。9．简述基因诊断的概念及特点。10．何为基因治疗，目前基因治疗有哪些基本策略？11．试述基因治疗的基本程序。12．欲生产一种药用多肽，科学家已经将此多肽的基因与某真核表达质粒重组在一起。请你设计一个实验，利用PCR方法鉴定此重组表达质粒是否含有这一多肽的基因。13．请设计一个实验，利用酵母双杂交系统检测从某一癌组织中提取、纯化的一种未知蛋白质X与两种已知蛋白质a、b之间是否有相互作用。14．请为某一单基因遗传病（低表达或不表达）的患者设计一个基因治疗方案。参考答案一、选择题（一）A型题1．B2．C3．D4．E5．B6．D7．B8．A9．D10．A11．D12．C13．B14．E15．D16．C17．C18．A19．D20．A（二）B型题1．D2．B3．C4．E5．B6．C7．A8．D9．E10．C11．A12．D13．B14．C15．E16．C17．A18．D（三）X型题1．ABCD2．ABCDE3．ABCDE4．ACE5．ABD6．ABCDE7．ABC8．ABDE9．BCD10．BD11．ACD12．BCDE13．AB14．ABCD15．ACD二、是非题1．B2．B3．A4．A5．A6．B7．B8．B9．A10．B11．A12．B13．A14．B15．B16．A17．B18．A三、填空题1．变性复性2．变性单链毛细作用NC3．电泳转移杂交放射自显影或化学显色4．DNA重组质粒噬菌体5．mRNA差特异性强假阳性率低6．特异性蛋白质的存在特异性蛋白质的半定量分析蛋白质分子7．变性退火延伸8．基因差异表达情况双色荧光探针杂交9．转基因转基因动物10．两种蛋白质分子具体结构部位未知分子11．体内DNA蛋白质12．功能克隆定位克隆13．体细胞生殖细胞14．病毒载体非病毒载体15．直接体内疗法间接体内疗法四、名词解释1．探针，是指带有特殊可检测标记（放射性核素或其它化合物标记）的核酸片段，它具有特定的序列，能够与待测