阿司匹林含量测定方法综述全.

阿司匹林含量测定方法综述一、阿司匹林原料药的含量测定（1）酸碱滴定法1、直接滴定法2、水解后剩余滴定3、两步滴定法（2）仪器法4、反相高效液相色谱法5、薄层色谱法6、紫外分光光度法二、阿司匹林制剂的含量测定1、两步滴定法光谱法：2、比色法3、双波长紫外分光光度法4、双波比值光谱法5、同步扫描荧光光谱6、萃取-火焰原子吸收光谱法7、紫外分光光度法8、分光光度法9、荧光光度法10、差示分光光度法11、紫外褶合光谱法12、近红外漫反射法色谱法：13、高效液相色谱法14、反相高效液相色谱法15、离子抑制-反相高效液相色谱法16、气相色谱法17、大口毛细管气相色谱法18、胶束薄层色谱法电泳法：19、非水毛细管电泳法20、反向高效毛细管电泳法其他法：21、动力学光度法测定痕量乙酰水杨酸23、电极法24、柱分配色谱-紫外分光光度法25、阻尼最小二乘法26、线性扫描伏安法测定阿司匹林27、百分吸收系数法摘要：阿司匹林是水杨酸类解热镇痛药物，临床上主要用于治疗感冒发烧、牙痛等慢性疼痛，现在的研究发现小剂量的阿司匹林也可用于预防恶性肿瘤，对多种疾病有治疗作用。阿司匹林含量的测定方法很多，有容量分析法，紫外分光光度法，HPLC法，薄层色谱法，气相色谱法等方法，现对其含量测定和鉴别方法作一综述。关键词：阿司匹林含量测定阿司匹林是市场上常见的水杨酸类药物，其化学式为：理化性质：（1）本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭或微带醋酸臭，味微酸；遇湿气即缓慢水解。（2）本品在乙醇中易溶，在三氯甲烷或乙醚中溶解，在水或无水乙醚中微溶。（3）结构中具有羧基具有酸性。（4）结构中有酯键，在氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液中溶解，但同时分解。（5）苯环具有紫外吸收。《中国药典》收载的品种有阿司匹林片、阿司匹林肠溶片、阿司匹林肠溶胶囊、阿司匹林泡腾片和阿司匹林栓，以及国家食品药品地标收载的小剂量的阿司匹林肠溶片，这些药品成分相同，作用类似，市场应用广范。临床上主要用于治疗感冒发烧，牙痛、肌肉痛及神经痛等慢性疼痛，急、慢性风湿病及类风湿病等，是风湿、类风湿关节炎治疗的常用药物。本品主要的副作用是引起幽门痉挛及刺激胃黏膜的胃肠道反应长期服用导致胃肠出血。随着科学技术的进步，各种仪器设备、新方法的应用，形成了阿司匹林鉴别和含量测定方法的各异性。阿司匹林的含量测定一、原料药：（1）酸碱滴定法1、直接滴定法[16]：原理：结构中具有羧基，显酸性，可用碱中和，利用中和反应测定其含量。•方法：取本品0。4g，精密称定，加中性乙醇20ml，溶解，加酚酞指示液3d，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/l）滴定。每1ml滴定液相当于18.02mg的C9H8O4。《中国药典》(2010年版)二部采用此法。计算公式：NaOH滴定度T=0.1×180.16×(1/1)=18.02（mg/ml）F=M（实际）/M(规定)含量（%）=（V×T×F）/W×100%（V为滴定液体积（ml）；T为氢氧化钠的滴定度，W为供试品称样量（g）；F为滴定液浓度校正因子（F=滴定液实际浓度/滴定液规定浓度））•优点：简便、快速。•缺点：1.酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）。2.酸性杂质干扰（如水杨酸）。•适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量测定。2、水解后剩余滴定[2]：原理：利用阿司匹林酯结构在碱性溶液中易于水解的特性，加入定量过量的氢氧化钠滴定液，加热使酯键水解后，再用硫酸滴定液回滴定剩余的氢氧化钠滴定液。•方法：取本品1.5g，精密称定加氢氧化钠滴（0.5mol/l）50.0ml，混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mol/l）滴定剩余的氢氧化钠。计算公式：硫酸标准液与阿司匹林的摩尔比为1∶1。硫酸的T=0.25×（1/1）×180.16=45.04(mg/ml)含量（%）=﹝（V0-V）×F×T﹞/W×100%（V0为空白试验消耗硫酸滴定液的体积（ml）；V为样品测定时消耗硫酸滴定液的体积（ml）；W为阿司匹林样品的称取量（g）；F为硫酸的浓度校正因数；T为硫酸溶液的滴定度）•优点：消除了酯键水解的干扰•缺点：酸性杂质干扰3、两步滴定法[16][3]：原理：两步滴定法系指测定过程分两步进行：第一步中和制剂中的酸性水解产物和酸性稳定剂（同时中和阿司匹林的游离羧基），以消除其干扰；第二步水解与滴定，即水解后剩余量滴定法。Chp2005曾收载两步滴定法测定阿司匹林片和肠溶片的含量。中和：水解与滴定：•方法：•A、中和：取本品10片，精密称定，研细，精密称取片粉适量（约相当于阿司匹林0.3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示剂显中性）20ml，振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/ml）至溶液显粉红色。此时中和了供试品中存在的游离酸，阿司匹林也同时成为钠盐。•B、水解与滴定：在中和后的供试品溶液中，精密加氢氧化钠滴定液（0.1mol/ml）40ml，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液（0.05mol/ml）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。•计算公式：从上述反应式可知：阿司匹林与硫酸的摩尔比为2：1硫酸的T=0.05×（2/1）×180.16=18.02（mg/ml）标示量%=﹝（V0-V）×F×T×W(平均)﹞/（W×标示量）×100%（V0为空白试验消耗硫酸滴定液的体积（ml）；V为样品测定时消耗硫酸滴定液的体积（ml）；F为硫酸滴定液的浓度校正因数；T为硫酸的滴定度（mg/ml）；W为供试品片粉的取样量（g）；W（平均）为供试品的平均片重（g）；标示量为片剂的规格（mg/片））•优点：消除了酸性物质的干扰4、反相高效液相色谱法]1[（1）阿司匹林对照品溶液的制备：精密称取阿司匹林对照品150mg，置50ml量瓶中，加乙腈适量使溶解并稀释至刻度；精密量取10ml，置25ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，制成含阿司匹林1200ug/ml的对照品溶液。（2）部分降解供试品溶液的制备：精密称取阿司匹林样品150mg，平铺于50ml烧杯内，然后置于恒温恒湿箱（75℃、80%相对湿度）中加速其降解，一定时间后取出样品，按（1）项下方法制成部分降解的供试品溶液。（3）含量测定：精密称取不同批样品150mg，置50ml量瓶中，加乙腈适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，取15ul注入液相色谱仪，记录峰面积。另取（1）项下方法制成的对照品溶液（含阿司匹林1200ul/ml）15ul，同法测定，按外标法计算阿司匹林含量。优选：直接滴定法，原料药的纯度较高，可用容量分析法直接测定其含量，不用重新提纯和精制，本法所用仪器价廉易得，操作简便、快速；方法耐用性高；测定结果准确，相对误差在0.2%以下。5、薄层色谱法6、紫外分光光度法二、制剂含量测定1、两步滴定法]3[原理：因片剂中可能加入酒石酸或枸橼酸作稳定剂，也可能有水解酸性产物水杨酸，醋酸等，不能用直接滴定法，而是先中和共存的酸，再水解其目的物质。A．中和：B．水解：C．剩余滴定：2NaOH（过量）＋H2SO4＝Na2SO4＋2H2O反应摩尔比为0.5∶1COONaOCOCH3+NaOHCOONaOH+CH3COONa(定量过量）?©酒石酸枸橼酸水杨酸醋酸+NaOH钠盐+H2O2、比色法[21]原理：利用阿司匹林在碱性条件下能定量水解成水杨酸的特性，采用比色法即水杨酸遇硫酸铁铵指示液显紫色并在530nm±1nm处测定其吸收度，求得水杨酸的量再折算成阿司匹林的量。高革、王福慧将阿司匹林锌用0.1mol/LNaOH溶液定量水解后，用比色法测定了其中阿司匹林的含量。[21]【对照液的制备】精密称取水杨酸适量置1000mL容量瓶中，加水溶解后，加冰醋酸1mL，再加水稀释至刻度，摇匀，配成100μg/mL的对照液。【供试品溶液的制备】取阿司匹林锌约0.4g，精密称定，加水20mL，再加0.1mol/LNaOH液25mL，煮沸并保温30min，放冷后移至250mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀、滤过，弃去初液，精密量取续滤液10mL,置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。【样品测定】取本品约0.4g，精密称定，加乙醚4mL，不断搅拌。用乙醚润湿滤纸，滤过，滤A样渣用乙醚洗涤3次，每次约2mL，滤渣及滤纸全部移至烧瓶中，加水20mL，再加0.1mol/LNaOH液25mL，煮沸并保温30min，放冷后移至250mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10mL置100mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。分别量取对照液及样品液10mL，置25mL量瓶中，分别各加入0.01mol/LHCl溶液2.0mL，硫酸铁铵指示剂2.0mL，再加水稀释至刻度，摇匀。在530nm分别测定其吸收度。【计算】样品%100%D/WC对照A对照A样、A对照分别为样品和对照品的吸收度，C对照为对照液的浓度，D为稀释倍数，W为样品取样量。【讨论】样品液浓度与光吸收值呈简单的线性关系，测定结果相对偏差小，重现性好。样品水解时加碱量及显色时加酸量一定要足够，否则结果偏低或偏高。原料中的游离水杨酸可用乙醚提出后再进行测定。3、双波长紫外分光光度法[6]池秀珍采用双波长紫外分光光度法（测定波长为276nm和322nm），测定了阿司匹林肠溶片的含量，可消除水解产物水杨酸的干扰。【标准曲线的绘制】精密称取阿司匹林对照品适量，用乙醇溶解使成1000μg/mL的溶液。精密吸取1.0、1.5、2.0、2.5和3.0mL，分置于25mL量瓶中，加乙醇至刻度，分别制成40、60、80、100和120μg/mL的对照品溶液，以乙醇为空白，分别在276nm、322nm波长处测定吸收度，以浓度C对△A进行线性回归，得回归方程：C=3.8×10-4+1.5403×10-1△A，r=0.9999（n=5）【样品测定】取阿司匹林肠溶片10片（小剂量20片），精密称定，研细。精密称取约相当于阿司匹林50mg于50mL量瓶中，加乙醇适量，振摇使溶解并定容，摇匀，滤过。精密量取续滤液2mL于25mL量瓶中，加乙醇至刻度，以乙醇为空白，分别在276、322nm波长处测定吸收度，用回归方程计算阿司匹林的含量。【计算】将样品在276和322nm处的得的吸收度计算得的△A，代入标准曲线，求得样品中阿司匹林的浓度。100%C实际测得的含量C标示量样品%4、双波比值光谱法[22]孙增先等应用双波长比值光谱法测定了复方乙酰水杨酸片中阿司匹林、非那西丁、咖啡因三种组分的含量，结果显示阿司匹林（A）在5~20μg/mL，非那西丁（P）在2~10μg/mL，咖啡因（C）在μg/mL浓度范围内线性关系良好，平均回收率分别为100.3%，100.23%，99.96%。优点：该方法适用于吸收光谱严重重叠，组分间互相干扰的复方制剂，测定波长少，计算简单，对仪器的要求不高。5、同步扫描荧光光谱[20]①原理：荧光光度计同步扫描时,得到两组分互不干扰的荧光峰,借此分别测定两组分的含量。②溶液的配制：对照液：精密称取阿司匹林对照品适量，置100ml量瓶，用乙醇定容。精密量取2ml置100ml量瓶，用乙醇定容，即得。供试品：精密称取阿司匹林注射液适量，置100ml量瓶，用乙醇定容。精密量取2ml置100ml量瓶，用乙醇定容，即得。③测定方法：用对照品溶液测定荧光强度与浓度的线性关系后，再在每次测定前，用一定浓度的对照品溶液校正仪器的灵敏度；然后再相同的条件下，分别读取对照品溶液及其试剂空白的荧光强度与供试品溶液及其空白的荧光强度④计算公式：CX=（RX—RXb）/（Rr—Rrb）×Cr（CX和Cr为供试品溶液、对照品溶液的浓度，RX供试品溶液荧光强度，RXb供试品溶液试剂空白的荧光强度，Rr对照品溶液的荧光强度，Rrb为对照品溶液的试剂的空白荧光强度）6、萃取-火焰原子吸收光谱法[24]朱铿等以火焰法测定有机相中铜的原子吸收信号，间接求的阿司匹林的含量，建立了一种原子吸收光谱法间接测定阿司匹林的新方法，并用于实际样品正痛