细胞污染

细胞污染的类型、状态及预防措施陈鹏鹏什么是细胞污染？•凡混入细胞培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染•细胞污染不能完全被消除，但能减少其发生的频率和后果的严重性一、细胞污染的类型及状态物理污染化学污染（内毒素）生物污染真菌细菌支原体原虫黑胶虫病毒细胞污染器皿、器械化学试剂蒸馏水真菌污染霉菌污染后培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，肉眼可见，培养液一般短期不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间，有的呈链状排列霉菌污染细菌污染黑色细沙状，高倍镜下呈圆球状颗粒，做布朗运动；细胞内颗粒增多、变粗；培养基浑浊变黄，pH改变。支原体污染支原体内的DNA被荧光染料着色支原体无细胞壁形态呈高度多形性，可为圆形、丝状或梨形。直径0.2~0.3μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。培养细胞受支原体污染后，多数细胞病理变化轻微，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。原虫污染培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。螨虫污染黑胶虫污染•存在争论生物：直径小于0.1μm，大多国外血清中多见，可能是国外牛血清中含有的某种原虫。非生物：血清中的某些蛋白成分的物质，经过灭活之后丧失活性，在培养基中，镜检见到的运动其实是这些物质在溶液中做“布朗运动”。病毒污染人角膜上皮细胞被HSV-1感染后的形态学变化由于病毒有种属特异性，所以病毒污染的概率比较小。病毒污染难于发现，一般的实验室都没能力检查细胞培养中污染的病毒。由于病毒一般潜伏在细胞内，对整个细胞培养不是致死的，但它可能会影响实验的结果。细胞交叉污染•细胞污染是由于在培养过程中各种细胞同时进行，而所用器具或液体混杂使用所致。这种污染使培养细胞不同种类之间发生混乱，细胞生长特性，形态发生变化。•有些变化轻微，不易察觉，有些则可能由于污染的细胞具有生长优势而最终压过原来细胞而导致细胞生长的抑制，最终死亡。•污染过的细胞由于种类不纯，无法进行实验研究。二、细胞污染的预防消毒（耗材、制备间）无菌操作消毒•制备间0.1%新洁尔灭、75%酒精、紫外照射、臭氧熏•物料耗材高压灭菌、75%酒精、紫外照射、臭氧熏无菌操作•整个操作过程要迅速敏捷但不能过快，以免形成气流。•超净台内放置的所有培养瓶瓶口不能与与风向相逆，不允许用手触及器皿的无菌部分，如瓶口。•开启或封闭瓶口操作时要经过酒精灯的烧灼，并在火焰附近工作。•吸取培养液、DPBS或其它试剂是注意换管，防止交叉污染或污染扩大。•使用培养液前，不宜较早开启瓶口。•不再使用的培养液应立即封口。•培养的细胞在处理之前不要过早的暴露空气中。•操作时不要交谈、咳嗽，以防止唾沫和呼出气流引发污染。•操作完毕后应将工作台面整理好，并消毒擦拭工作面，关闭超净台•温度过冷或过热的温度对细胞可引起细胞生理状态的改变，如从冰箱中取出的培养液直接加至37℃培养的细胞中可能会造成细胞应激，影响实验现象的观察•辐射对紫外线敏感的试剂不能放在紫外线下灭菌，同时对见光易分解的物质进行避光处理•放射线试剂周围不能放同位素•振动它是革兰氏阴性细菌细胞死亡后解体释放出的疏水性的细胞壁组成物质，对塑料等疏水性强的物质有很强的吸附能力。细菌内毒素可刺激部分细胞产生一些激素或细胞因子，对细胞生长和实验结果产生影响。细菌内毒素是临床上的最主要的热原（即注射到动物体内会导致动物发热）。细菌内毒素