实验五、血清中谷丙转氨酶的测定

血清中谷丙转氨酶的测定实验五（2,4-二硝基苯肼法）一、实验目的掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的基本原理。了解血清丙氨酸氨基转移酶的测定方法及临床意义。510nm光吸收法测定相对血清ALT活力二、实验原理丙氨酸氨基转移酶(ALT)催化丙氨酸与α-酮戊二酸生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼在酸性溶液中反应形成相应的2,4-二硝基苯腙，呈黄色，后者在碱性条件下呈红棕色。（1）丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+谷氨酸ALT（2）丙酮酸+2,4-二硝基苯肼丙酮酸2,4-二硝基苯肼(黄色)丙酮酸2,4-二硝基苯肼（3）苯腙硝醌化合物NaOH（黄色）（红棕色）三、实验器材材料：人血清试剂：谷丙转氨酶测定试剂盒用具：分光光度计，微量移液枪，试管，试管架，恒温水浴锅（1）取3支试管，按下表加入试剂:试剂试剂空白管标准管样品管基质液(uL)200200200标准液(uL)–50.0–血清样品(uL)––50.0蒸馏水(uL)50.0––混合37℃水浴放置30min显色剂(uL)20020020037℃水浴放置20min稀释NaOH(uL)200020002000四、实验步骤冷却至室温后，510nm处比色比色方法：以空白管调零，读取标准管及样品管光密度值。（2）计算：依据朗伯-比尔定律：A=KLC标准管谷丙转氨酶活力：57U/L样品管谷丙转氨酶活力（U/L）＝样品管光密度值标准管光密度值×57U样=A样A标×U标参考值谷丙转氨酶血清参考值：0~50U/L正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液应占比色皿的2/3。每次测定时都需用试剂空白溶液调零，不能用蒸馏水代替微量移液枪的正确使用注意事项思考1、血清谷丙转氨酶测定的临床意义？