微生物实验室操作规范及其仪器的使用

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资源描述

微生物实验室操作规程1.工作人员加强有菌观念,无菌操作。2.每日工作前用紫外线照射实验室半小时以上。3.入室前应穿工作服,并做好实验前的各项准备工作。4.实验室内应保持肃静,不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。尽量减少室内活动,以免引起风动,无关人员禁入。5.非必要物品禁止带入实验室,必要资料和书籍带入后,应远离操作台。6.做好标本的登记、编号及试验记录。未发出报告前,请勿丢弃标本。7.标本处理及各项试验应在操作间进行,接种环用完后应立即火焰灭菌,沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。8.实验时手部污染,应立即用过氧乙酸消毒或浸于3%来苏儿溶液中5­10分,再用肥皂洗手并冲洗干净;如误入口内,应立即吐出,并用1:1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口,根据实际情况服用有关药物。9.实验过程中,如污染了实验台或地面,应用3%来苏儿覆盖其上半小时,然后清洗;如污染工作服,应立即脱下,高压灭菌。10.使用后的载玻片、盖片、平皿、试管等用消毒液浸泡,经煮沸后清洗或丢弃。11.所有微生物培养物,不管标本阳性或阴性均用消毒液浸泡后,经煮沸消毒,才能清洗或丢弃。12.取材、最好采用一次性工具,不能采用一次性工具者,每次取材前均应彻底消毒。13.若出现着火情况,应沉着处理,切勿慌张,立即关闭电闸,积极灭火。易燃物品(如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等)必须远离火源,妥善保存。14.工作结束时检查电器、酒精灯等是否关闭,观察记录培养箱、冰箱温度及工作情况,用浸有消毒液的抹布将操作台擦拭干净,并将试剂、用具等放回原处,清理台面,未污染的废弃物扔进污物桶,有菌废弃物应送高压灭菌后处理。15.离室前工作人员应将双手用消毒液消毒,并用肥皂和清水洗净。16.爱护仪器设备,遵守仪器使用规范,经常清洁,注意防尘和防潮。每天观察培养箱、冰箱、干燥箱的温度,并做好记录。17.发出的微生物报告应认真复审,分析报告、评价报告。无菌室使用规程1目的建立无菌室管理使用规程,保证操作者正确使用。2范围适用于无菌室操作。3责任者操作人员、无菌室管理人员。4内容4.1无菌室应严禁放置杂物,无关人员严禁入内。4.2无菌室设有无菌操作间和缓冲间,无菌操作间洁净度应达到10000级,室内温度保持在20-24℃,湿度保持在45-60%;超净工作台洁净度应达到100级。4.3无菌室应备有工作浓度的消毒液,如5%甲酚溶液,70%酒精,0.1%新洁尔灭溶液等。4.4无菌室应严格保持清洁,防止污染。无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁,以保证无菌室的洁净度符合要求。4.5无菌室使用前必须开启紫外灯照射30分钟以上,同时打开超净工作台进行吹风,操作完毕后及时清理,再开紫外灯照射30分钟。4.6实验人员进入无菌室前,必须用肥皂或消毒液洗手消毒,然后在缓冲间更换专用工作服、鞋、帽、口罩等,操作前用0.1%新洁尔灭菌或70%酒精进行手消毒。4.7需要带入无菌室使用的仪器、器械、平皿等一切物品,均应包扎严密,并应经过适宜的方法灭菌。严防一切灭菌器材和培养基污染,已污染者应停止使用。4.8接种环在每次使用前后,必须通过火焰灭菌,待冷却后方可接种培养物。4.9如有菌液洒在桌面或地上,应立即用5%石碳酸溶液或3%来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟,再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时,应立即脱去,高压灭菌后洗涤。4.10所有带菌实验用品,须经有效的消毒灭菌处理后再洗刷,严禁污染下水道。4.11无菌室应定期进行洁净度测试,检查菌落数。在室内及超净工作台打开营养琼脂平皿,开盖暴露30分钟,经37℃培养48h,取出检查。100级洁净区平均菌落数不得过1个/皿,10000级洁净区平均菌落数不得超过3个/皿,如超限,应对无菌室进行清彻底消毒,直至复检合格。手提式高压蒸汽灭菌锅使用规范1.准备:首先将内层灭菌桶取出,再向外层锅内加入适量的去离子水或蒸馏水,使水面与三角搁架相平为宜。2.放回灭菌桶,并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤,以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触,以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。3.加盖,并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓,使螺栓松紧一致,勿使漏气。4.加热,并同时打开排气阀,使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后,关上排气阀,让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时,控制热源,维持压力至所需时间(在温度或者压力达到所需时(一般为121°0.1MPa),需要切断电源,停止加热。当温度下降时,再开启电源开始加热,使温度维持在恒定的范围之内。5.灭菌所需时间到后,切断电源,让灭菌锅内温度自然下降,当压力表的压力降至0时,打开排气阀,旋松螺栓,打开盖子,取出灭菌物品。注意事项:1.灭菌物品不能堆得太满、太紧,以免影响温度均匀上升。2.降温时待温度自然降至60℃以下再打开箱门取出物品,以免因温度过高而骤然降温导致玻璃器皿炸裂。3.在灭菌过程中,应注意排净锅内冷空气。4.由于高压蒸汽灭菌时,要使用温度高达120℃、两个大气压的过热蒸汽,操作时,必须严格按照操作规程操作,否则容易发生意外事故。5.不同类型的物品不应放在一起进行灭菌。6.在未放气,器内压力尚未降到“0”位以前,绝对不允许打开器盖。全自动高压蒸汽灭菌器使用规程1.在设备使用中,应对安全阀加以维护和检查,当设备闲置较长时间重新使用时,应扳动安全阀上小扳手,检查阀芯是否灵活,防止因弹簧锈蚀影响安全阀起跳。2.设备工作时,当压力表指示超过0.165Mpa时,安全阀不开启,应立即关闭电源,打开放气阀旋钮,当压力表指针回零时,稍等1-2分钟,再打开容器盖并及时更换安全阀。3.堆放灭菌物品时,严禁堵塞安全阀的出气孔,必须留出空间保证其畅通放气。4.每次使用前必须检查外桶内水量是否保持在灭菌桶搁脚处。5.当灭菌器持续工作,在进行新的灭菌作业时,应留有5分钟的时间,并打开上盖让设备有时间冷却。6.灭菌液体时,应将液体罐装在硬质的耐热玻璃瓶中,以不超过3/4体积为好,瓶口选用棉花纱塞,切勿使用未开孔的橡胶或软木塞。特别注意:在灭菌液体结束时不准立即释放蒸汽,必须待压力表指针回复到零位后方可排放余汽。7.对不同类型,不同灭菌要求的物品,如敷料和液体等,切勿放在一起灭菌,以免顾此失彼,造成损失。8.取放物品时注意不要被蒸气烫伤(可戴上线手套)。冰箱、冰柜使用规程1操作程序1.1开机:冰箱、冰柜按说明书要求放好后,插上电源线,确定其在正常供电状态下。1.2物品的放置1.2.1将冰箱、冰柜调节到所需功能。1.2.2打开冰箱、冰柜相应功能的箱门,将所需放置/取出的物品,放置/取出在冰箱、冰柜内。1.2.3物品放置好/取出后,将箱门关严,通过屏幕显示确定其在正常供电情况。1.3做好相应登记后方可离开。2安全使用注意事项2.1严禁贮存或靠近易燃、易爆、有腐蚀性物品及易挥发的气体、液体,不得在有可燃气体的环境中存放或使用。2.2实验室使用冰箱、冰柜内禁止存放与实验无关的物品。储存在冰箱内的所有容器应当清楚地标明内装物品的科学名称、储存日期和储存者的姓名。未标明的或废旧物品应当高压灭菌并丢弃。2.3放入冰箱、冰柜内的所有试剂、样品、质控品等必须密封保存。2.4箱体表面请勿放置较重或较热的物体,以免变形。2.5保持冰箱、冰柜出水口通畅。2.6在清洁/除霜时,切不可用有机溶剂、开水及洗衣粉等对冰箱有害的物质。2.7每日观察冰箱、冰柜温度并记录。天平操作规程1、使用天平前应先观察水准器中气泡是否在圆形水准器正中,如偏离中心,应调节地脚螺栓使气泡保持在水准器正中央,单盘天平(机械式)调整前面的地脚螺栓,电子天平调整后面的地脚螺栓。2、天平内须放置变色硅胶等干燥剂,使用前应观察变色硅胶颜色,如硅胶变色必须及时更换干燥硅胶,将吸水失效的硅胶放入烘箱内烘干恢复颜色以备以后使用。3、天平使用前应首先调零,电子天平使用前还应用标准砝码校准。4、天平门开关时动作要轻,防止震动影响天平精度和准确读数。5、天平称量时要将天平门关好,严禁开着天平门时读数,防止空气流动对称量结果造成影响。6、电子天平的去皮键使用要慎重,严禁用去皮键使天平回零。7、如发现天平的托盘上有污物要立即擦拭干净。天平要经常擦拭,保持洁净,擦拭天平内部时要用洁净的干布或软毛刷,如干布擦不干净可用95%乙醇擦拭,严禁用水擦拭天平内部。8、同一次分析应用同一台天平,避免系统误差。9、天平载重不得超过最大负荷。10、被称物应放在干燥清洁的器皿中称量,挥发性、腐蚀性物体必须放在密封加盖的容器中称量。19、电子天平接通电源后应预热2小时才能使用。20、搬动或拆装天平后要检查天平性能。22、称量完毕后将所用称量纸带走。23、称量完毕,保持天平清洁,物品按原样摆放整齐传递窗的使用规程1.目的:保证待处理样品的可靠性传递,尽量避免各区间的空气污染2.适用范围:每个区的传递窗。3.职责:所有工作人员在工作中必须严格遵守。4.步骤:4.1标准操作:实验人员在所在实验区处理好样品后,欲将样品传递到下一区域时,打开传递窗门,放入欲传递的样品,关闭传递窗门。4.2维护每次实验结束后用1﹪的施康溶液对传递窗内部进行清洁,然后打开传递窗内的紫外灯消毒30分钟,并记录紫外灯照射时间,累计10000小时后报废,更换新的紫外灯。光学显微镜使用规范1.取镜和放置:右手紧握镜臂,左一手托住镜座取出。(特别禁止单手提显微镜,防止目镜从镜筒中滑脱)。放置桌边时动作要轻。一般应在身体的前面,略偏左,镜筒向前,镜臂向后,距桌边7~10㎝处,以便观察和防止掉落。然后安放目镜和物镜。2.对光:用拇指和中指移动旋转器,使低倍镜对准镜台的通光孔。打开光圈,上升集光器,并将反光镜转向光源,以左眼在目镜上观察(右眼睁开),同时调节反光镜方向,直到视野内的光线均匀明亮为止。3.低倍镜的使用方法(1)放置玻片标本:取一玻片标本放在镜台上,一定使有盖玻片的一面朝上,切不可放反,用推片器弹簧夹夹住,然后旋转推片器螺旋,将所要观察的部位调到通光孔的正中。(2)调节焦距:以左手按逆时针方向转动粗调节器,使镜台缓慢地上升至物镜距标本片约5毫米处,要从右侧看着镜台上升,以免上升过多,造成镜头或标本片的损坏。然后,两眼同时睁开,用左眼在目镜上观察,左手顺时针方向缓慢转动粗调节器,使镜台缓慢下降,直到视野中出现清晰的物象为止。4.高倍镜的使用方法(1)选好目标:一定要先在低倍镜下把需进一步观察的部位调到中心,同时把物象调节到最清晰的程度,才能进行高倍镜的观察。(2)转动转换器,调换上高倍镜头,转换高倍镜时转动速度要慢,并从侧面进行观察(防止高倍镜头碰撞玻片),如高倍镜头碰到玻片,说明低倍镜的焦距没有调好,应重新操作。(3)调节焦距:转换好高倍镜后,用左眼在目镜上观察,此时一般能见到一个不太清楚的物象,可将细调节器的螺旋逆时针移动约0.5-1圈,即可获得清晰的物象(切勿用粗调节器!)恒温干燥箱使用规程1目的建立恒温干燥箱的操作规程,保证操作人员正确操作。2范围适用于样品的干燥、玻璃仪器的烘干。3职责操作人员对本规程的实施负责。4操作程序4.1接通电源,打开电源开关。4.2设置加热温度4.3待温度达到设置温度并无异常情况,稳定后放入样品,开始记时至所需干燥程度。5注意事项5.1设置温度时,通常将温度设置稍低于实验温度,待温度达到设置温度后,再设置到实验温度。5.2新购电热恒温干燥箱应校检合格方能使用,所有电热恒温干燥箱每年由计量所校检一次。5.3干燥箱安装在室内干燥和水平处,禁止震动和腐蚀。5.4使用时注意安全用电,电源刀闸容量和电源导线容量要足够,并要有良好的接地线。5.5箱内放入试品时不能太密,散热板上不能放试品,以免影响热气向上流动。恒温培养箱使用规范1.目的:建立恒温培养箱标准操作及维修保养规程,用以保证实验仪器操作的一致性。2.操作前准备对箱体内清洁,消毒合格后,执行如下程序。3.操作过程3.1接通电源,开启电源开关。3.2调节调节器按钮,至调节温度档,并调节至所需温度,点击确认按钮,加热指示灯亮,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