无菌检查法标准操作规程

无菌检查法标准操作规程正文：一、目的：规范无菌检查的标准操作，保证检验操作符合要求。二、范围：适用于本公司产品的无菌检查。三、职责：质量中心化验员负责本规程的执行。质量中心管理人员负责本规程执行情况的监督检查。四、内容：1.定义1.1无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。1.2检验数量指一次检验所用供试品最小包装容器的数量。除另有规定外，按表1规定的最少检验数量进行，最少检验数量不包括阳性对照试验的供试品用量。采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量做阳性对照用；采用直接接种法，增加每个培养基容器接种的样品量作为阳性对照用。批出厂产品最少检验数量供试品柜产量N（袋）接种每种培养基所需的最少检验数量注射剂≤10010%或4袋（取较多者）100＜N≤50010袋＞5002%或20袋（取较少者）大体积注射剂（＞100ml）2%或10袋（取较少者）1.3检验量指一次试验所用供试品总量（g或ml）。采用薄膜过滤法时，检验量不应少于直接接种法供试品的总量，只要供试品的特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。1000ml及以下规格产品，容器的内容物全部过滤。1000ml以上，半量过滤。1.3.1若每袋供试品装量按规定足够接种两份培养基，则应分别按下表进行培养基接种：中国药典欧洲药典硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培养基硫乙醇酸盐流体培养基大豆酪蛋白消化培养基2.实验环境无菌检查应在环境洁净度C级下的局部洁净度A级的单向流空气区域。3.实验前准备3.1紫外灯和空气净化系统：空气净化装置在实验前1小时开启，紫外灯在实验前至少1个小时开启。3.2供试品确认供试品数量正确，包装完好无损，无漏液、掉塞。如有异常岗位人员应立即与取样人员联系，并采取措施，保证检验的正常进行。正常样品核对信息后按照《检验用样品管理规程》对供试品进行分类，分类后的无菌检验样品用0.1%新洁尔灭或75%酒精棉擦拭外壁。3.3培养基根据供试品柜次领用硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基（大豆酪蛋白消化培养基），领用时填写《培养基配制使用记录》。检查培养基灭菌指示带、标识牌和批号齐全完好，培养基无浑浊且厌氧层不超过培养基深度的1/5，若有异常应停止使用。3.4实验物品按照供试品品种、数量选用合适类型的集菌器，剪刀、毛巾等充分灭菌后待用。将上述物品移至传递窗，开启传递窗紫外灯半小时，并将无菌衣、帽、口罩移入缓冲间。每次试验中所用物品必须计划好，并有备用物。3.5操作人员关闭紫外灯10分钟后，进入缓冲间，按照《人员进出实验室的净化更衣规程》进入，并按照此规程穿戴无菌服、口罩。4.操作4.1薄膜过滤法4.1.1操作前准备检查无菌室电源和仪器是否完好，标示状态卡是否正确，是否有前次遗留物品及废液等，戴上无菌手套将供试品及所需物品移入无菌操作室，开启超净工作台并擦拭工作台面。4.1.2操作4.1.2.1根据药液性质选用不同型号的培养器，对于普通药液选用型号为PY220、PY330的培养器，腹膜透析液选用型号为SDY220的培养器。需冲洗的治疗性药液选用型号为KSF220、KSF330的培养器。选定以后打开培养器，先确认包装完好无损，选用符合要求的培养器在外壁用记号笔依次标明相应供试品的信息—品名、规格、批号、柜次、培养基批号及检验日期；4.1.2.2将培养器逐个插放在不锈钢座上，将培养器的弹性软管装入集菌仪泵头，定位点准确卡在泵头外侧，将软管平整的围绕泵头走势顺畅。4.1.2.3在酒精灯火焰半尺内，将培养器的针头外帽拔下，外帽放置在操作台上，打开供试品外盖，若发现胶塞上有水珠现象，应在酒精灯火焰外焰处迅速烤干，培养器针头在近火焰处来回三次，立刻插入供试品胶塞中，打开集菌仪，使药液均匀通过培养器，待抽取规定量药液后，关闭电源，将针头取下，插至装有适宜冲洗液的瓶塞内，冲洗集菌培养器的滤膜，照上述操作要求，各品种冲洗次数及冲洗量见附表。滤干，关闭电源。将集菌培养器的上排气孔胶帽取下，下排液管拧上胶帽，将冲洗瓶取下换上相应的培养基瓶，启动电源，将培养基泵入指定的培养器内，关闭电源。4.1.2.4改良马丁培养基或大豆酪蛋白消化培养基罐使用红色夹子、硫乙醇酸盐流体培养基罐使用蓝色夹子。用相应的夹子夹闭与培养器连接部的软管；剪刀在近火焰处来回三次后，在软管剪切线的位置将其剪断，将软管开口端套在集菌培养器的上排气孔处。每次操作时，均应取相应溶剂和稀释剂、及冲洗液同法操作，作为阴性对照。4.1.3实验完毕将废液和实验物品及已操作完毕的含培养基的集菌培养器等移至传递窗并拿出，擦拭工作台面，检查电源是否关闭，是否有遗留物品等。按照《人员进出实验室的净化更衣规程》脱掉无菌服并装入配套的袋中，开启无菌室紫外灯半小时，将无菌服送至特定的洗衣机进行清洗灭菌。实验完毕的样品按照《检验用样品管理规程》进行销毁处理。4.1.4阳性对照取出其中作为阳性对照的管，按阳性对照菌选择原则加入相应的对照菌液，无抑菌作用及抗革兰氏阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰氏阴性菌为主的供试品，以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。阳性对照试验的菌液制备同培养基灵敏度检查阳性对照试验。培养相应时间后应生长良好。大容量非抗菌作用的供试品，薄膜过滤后，无须冲洗。本公司所生产产品阳性对照菌见附表。4.2直接接种法每支供试品按规定量分别接种至含硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基或大豆酪蛋白消化培养基的容器中。除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10%，同时硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不得少于15ml，改良马丁培养基（大豆酪蛋白消化培养基）每管装量不得少于10ml。若供试品具有抑菌作用，可加入适量的无菌中和剂或灭活剂，或加大每个容器的培养基用量。供试品检查时，培养基的用量和高度同方法验证试验。5.培养及观察按规定的温度培养14天。(硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃培养。改良马丁培养基或大豆酪蛋白消化培养基置23～28℃培养)培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。如在加入供试品后、或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中，继续培养，细菌培养48小时、真菌培养72小时，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。6.结果判断6.1阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则试验无效。6.2若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定。若供试品管中任何1管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定。除非能充分证明试验结果无效即生长的微生物非供试品所含。当符合下列至少一个条件时，方可判试验结果无效：（1）无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求。（2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素。（3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。试验若经确认无效，应重试。重试时，必须重新取同量供试品，依法重试，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符合规定。7.操作中应注意事项7.1所有操作均应在酒精灯火焰半尺内进行。7.2培养器针头每次使用前均应在酒精灯火焰外焰处迅速来回3次。7.3培养基揭去纱布后胶塞应在酒精灯火焰外焰处充分灼烧30秒。8.相关文件《检验用样品管理规程》（Q/HRGL04048）《人员进出实验室的净化更衣规程》（Q/HRGZ09003）10.附件培养基配制使用记录仪器：天平编号：□PG-1801-36FM-36□PG-1801-104FM-104压力蒸汽灭菌锅编号：□PG-0111-01□PG-0111-03□PG-0111-101培养基名称：□硫乙醇酸盐流体培养基□改良马丁培养基□0.1%蛋白胨冲洗液□营养肉汤培养基□乳糖蛋白胨培养液□PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液□玫瑰红钠琼脂培养基□营养琼脂培养基□胆盐乳糖培养基□胰酪大豆胨琼脂培养基□沙氏葡萄糖肉汤培养基□沙氏葡萄糖琼脂培养基□胰酪大豆胨肉汤培养基□R2A琼脂培养基□对照培养基□其他干粉培养基批号：配制方法：称取本品g，加ml纯化水，充分溶解后，分装瓶（支），测PH值为：。灭菌温度及时间：配制培养基批号：灭菌后培养基数量：指示带：配制人：灭菌人：复核人：日期：培养基领用使用日期入库数量领用数量剩余数量领用人保管人备注（瓶/支）（瓶/支）（瓶/支）