预制胶——轻松应对蛋白电泳

预制胶——轻松应对蛋白电泳现在，聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)已经成为实验室的最常规实验了。不过可别小看了这个实验，它比核酸电泳可复杂多了，需要准备的试剂多，耗时也长，而且每一次跑出来结果可能都不一样。有时只是为了补一张漂亮的电泳图片，却花了好几天时间，横竖还是不满意。这时，你就可以考虑一下预制胶了。蛋白专家Pierce公司推出了与多种电泳槽兼容的PreciseProteinGel预制胶。PreciseProteinGel是pH值中性的，蛋白不易降解，完整性好，而凝胶也稳定易保存，保质期可达12个月以上。同时，配合Tris-HEPES-SDS缓冲液，分辨率更高，且电泳速度更快，只需45分钟就可以完成电泳。最重要的是，PreciseProteinGel可以与多种电泳槽相兼容，包括实验室中最普遍的Bio-RadMini-PROTEAN3、Invitrogen的NovexXCellIISurelock?和Hoefer等电泳槽，这样你就不用为了几盒胶而特地去买一个槽了，而且说明书也很贴心，针对不同的电泳槽都有详细的步骤和图示。目前有两种梯度浓度(8-16%、4-20%)和三种固定浓度(8%、10%、12%)可供选择，规格是最常用的10孔、12孔和15孔。10孔的上样量达50ul，几乎是其他预制胶的两倍。蛋白分离范围请看下表，大部分蛋白都可以得到很好分离，但是如果蛋白特别大或特别小，估计就不适用了。目录价是1526元(10块)，有点小贵，不过6月10日前有促销，买一送一，相当于每块76.3元。浓度8%10%12%8-16%4-20%分离范围(kDa)205-45205-24205-14205-14205-6.5Invitrogen早在2005年就开始大力推广NuPAGE预制胶，虽说当时的价格确实比较高，但也有不少用户在试用了之后，觉得效果好又方便，还是忍痛买了。现在胶的价格降了2/3，也算是一个福音吧。NuPAGE胶专利的中性pH和缓冲系统使凝胶非常稳定(12个月的保质期)，而且配合NuPAGEAntioxidant一起使用，使蛋白不易降解和氧化，提供了最佳的条带分辨率，减少了蛋白的修饰，改善了Westernblot的分析结果;电泳时间只需要35分钟，非常省时。很多用户使用后反映条带确实很sharp，比自己配胶可强多了。NuPAGE胶分为两种：NuPAGEBis-TrisGel(适合中等大小或小蛋白，2.5-200kDa)和NuPAGETris-AcetateGel(尤其适用于大蛋白，30-400kDa)。目前有五种浓度(10%、12%、4-12%、7%、3-8%)、两种厚度(1.0mm和1.5mm)以及不同孔数可供选择，总有一款合你心水。现在的促销价是每盒(10块)576元，比较实惠，不过就是与其他电泳槽不兼容，还要再花1980元买一个NovexXCellIISurelock?电泳槽。相关的缓冲液都有配方提供，可以选择自己配，除了NuPageAntioxidant，不过如果你的蛋白不易被氧化的话，也可以选择不加。说起跑胶，怎么能忘了Bio-Rad呢?在实验室里放眼望去，几乎全是Bio-Rad的电泳槽。不过大部分用户都是自己配胶，可能还不知道Bio-Rad也有预制胶。Bio-Rad有多种规格、浓度和成分的预制胶，配合不同的电泳系统。平时实验室里最常用的是Mini-PROTEAN3电泳槽，所以这里就介绍与之配套的ReadyGel预制胶。用于聚丙烯酰胺凝胶电泳的ReadyGel有两种：Tris-HClGel和Tris-TricineGel，Tris-HClGel主要用于SDS-PAGE和非变性的NativePAGE;Tris-TricineGel则用于分离肽段。因为是碱性环境(pH8.8)，胶易降解，所以只能保存12周(除去订货和路上的时间，到手估计只有4周了)。有多种浓度和孔数供选择，蛋白分离范围请看下表。ReadyGel可以分离小至1kDa的蛋白，不过对于250kDa以上的蛋白，就无能为力了。它是一块一块单独售卖的，每块的价格在130左右，偏贵，不过偶尔买一块来跑个漂亮的电泳图，用来发paper，还是可以接受的。Tris-HClGel分离范围(kDa)Tris-HClGradientGels分离范围(kDa)Tris-TricineGel分离范围(kDa)5%100-2504-15%20-25016.5%4-307.5%40-2004-20%10-20010-20%1-4010%30-1508-16%6-7012%20-12010-20%10-10015%10-10018%6-50综上，我们将三家公司的预制胶做了一个比较。大家可以根据目的蛋白的大小、实验室的配置来选择合适的预制胶。预制胶因为是大规模生产的，所以胶与胶之间重复性好，不像手工灌胶那样结果差异大。且即开即用，不用再配制N种溶液、灌胶、等胶凝固，节省了宝贵的时间。另外，现在的中性凝胶保质期长，分辨率高，这些都成为我们改用预制胶的理由。但是，价格却限制了它的大规模使用。如果有的实验室只是偶尔跑几次胶，或是进行重要的实验，还是不妨一试吧，毕竟，它能让你从繁重的实验和不确定的结果中解放出来。品牌性能蛋白分离范围(kDa)电泳时间兼容性保质期价格/块PIERCEpH值中性，蛋白不易降解6.5-20545min好12个月76.3InvitrogenpH值中性，蛋白不易降解和氧化，提供了最佳的条带分辨率2.5-40035min不好12个月57.6Bio-RadpH值碱性1-25035-100min不好3个月130来源：生物帮://生活百科,生活中的生物,生物趣闻,图片故事,生物趣闻趣事lb