HPLC外内标法测定含量

采用HPLC外标法测定栀子中栀子苷的含量仪器与试剂Aglient1100seriesHPLC仪(包括VWD检测器、四元恒流泵、在线脱气机、手动进样器)，美国安捷伦公司；SB3200超声波清洗器，宁波新芝生物科技公司。栀子苷对照品：中国药品生物制品检定所，供含量测定用；甲醇、乙腈为色谱纯，Merck公司；栀子药材；其他试剂均为分析纯。实验步骤配制溶液–(1)流动相的配制。甲醇-0．5％冰乙酸水(1：1，V／V)，减压过滤并超声波脱气。–(2)栀子苷对照品溶液的配制。称取10．0mg栀子苷对照品，精密称定质量，以甲醇溶解，转移至2mL容量瓶巾(浓度为0．4g／L)，甲醇定容，分别精密移取0．1，0．5，1．0，2．5，5．0mL于10．0m1．容量瓶中，以流动相溶液定容，得浓度为0．004，0．02，0．04，0．1，0．2g／L的栀子苷对照品溶液。–(3)栀子供试品溶液的配制。取本品粉末0．1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理20min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。平行处理3份。测定(1)安装C18反相柱，按仪器操作说明依次打开色谱仪各单元的电源。(2)色谱条件。C18一ODS色谱柱(53um，4．6mm×250mm)；流动相比例：甲醇-0．5％冰乙酸水(1：1)；流动相流速：1．0mL／min；检测波长：238nm。(3)换卜流动相，待基线稳定后，采用进样器依次吸取浓度分别为0．004，0．02，O．04，0．1，0．2，0．4g／L的栀子苷对照品溶液各10仙L进样，待组分色谱峰出完后，按“停止”键停止分析。记录栀子苷色谱峰面积(保留时间、峰面积)，以栀子苷进样浓度(g／L)为横坐标，色谱峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，进行回归分析。(4)采用进样器吸取栀子样品溶液10¨L，进样，通过保留时间确定栀子苷色谱峰的位置，记录栀子苷色谱峰面积(保留时间、峰面积)，并计算栀子药材中栀子苷的含量。结果实验结果实验结果实验结果栀子药材中栀子苷的含量测定采用进样器吸取栀子样品溶液10“L，进样，记录栀子苷色谱峰面积(保留时间、峰面积)，并计算栀子药材中栀子苷的含量。实验结果表明，栀子药材中栀子苷的含量为3．01％采用HPLC内标法测定待测溶液中扑热息痛和阿司匹林的含量仪器与试剂Aglientl100seriesHPLC(VWD检测器、四元恒流泵、在线脱气机、手动进样器)，美国安捷伦公司；SB3200超声波清洗器，宁波新芝生物科技公司。扑热息痛(CP，含量98％)，国药集团化学试剂有限公司；阿司匹林(CP，含量98％)，国药集团化学试剂有限公司；咖啡因(CP，含量98％)，ALFAAESAR，AJOHNSONMATTHEYCOMPANY；甲醇、乙腈为色谱纯，Merck公司。实验步骤配制溶液(1)流动相的配制。乙腈一0．1％磷酸水(20：80，V／V)，减压过滤并超声波脱气。(2)对照品溶液的配制。分别称取40mg扑热息痛和50mg阿司匹林，精密称定质量，于10mL容量瓶中，加少量甲醇超声溶解，甲醇定容，即得4．0g／L的扑热息痛、5．0g／L的阿司匹林的混合对照品溶液A。称取50mg的咖啡因，精密称定质量，于10mL容量瓶中，加少量甲醇超声溶解，甲醇定容，即得5．0g／L的咖啡因内标溶液B。分别精密移取0．1，0．5，1．0，2．5，5．0mL的混合对照品溶液A和1．0mL的咖啡因内标溶液B于25．0mL容量瓶中，溶解，混匀，以甲醇定容，即得浓度分别为0．016，0．08，0．16，0．4，0．8g／L扑热息痛和0．02，0．10，0．20，0．50，1．0g／L阿司匹林、内标物咖啡因浓度为0．2g／L的5种混合对照品溶液。(3)供试品溶液的配制。精密移取待测样品溶液5mL和1．0mL的B于25mL的容量瓶中，溶解，混匀，以甲醇定容，并平行处理3份。测定(1)安装C18。反相柱，按仪器操作说明依次打开色谱仪各单元的电源。(2)色谱条件：C18一ODS色谱柱(5um，4．6mm×250mm)；流动相比例：乙腈一0．1％磷酸水(20：80，V／V)；流动相流速：1．0mL／min；检测波长：273nm。(3)换上流动相，待基线稳定后，采用进样器依次吸取浓度分别为0．016、0．08、0．16、0．4、0．8g／L扑热息痛和0．02、0．10、0．20、0．50、1．0g／L阿司匹林、内标物咖啡因浓度为0．2g／L的5种混合对照品溶液各10uL进样，待组分色谱峰出完后，按“停止”键停止分析。记录各色谱峰面积(保留时间、峰面积)，以对照品峰面积与内标物峰面积之比为纵坐标(y)，以浓度为横坐标(x)，绘制标准曲线，进行回归分析，求扑热息痛和阿司匹林的线性方程。(4)采用进样器吸取供试品溶液10uL，进样，通过保留时间确定扑热息痛、阿司匹林、咖啡因色谱峰的位置，记录扑热息痛、阿司匹林、咖啡因色谱峰面积(保留时间、峰面积)，并计算待测样品溶液中扑热息痛、阿司匹林的含量。实验结果实验结果实验结果未知溶液中阿司匹林和扑热息痛的浓度测定采用进样器吸取供试品溶液10uL，进样，记录阿司匹林、咖啡因和扑热息痛色谱峰面积(保留时间、峰面积)，计算阿司匹林和扑热息痛对照品峰面积与内标物咖啡因峰面积之比，并计算未知溶液中阿司匹林和扑热息痛的浓度，结果见表5，6