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微生物学Microbiology一、微生物分类鉴定中的经典方法二、微生物分类鉴定中的现代方法1.微生物遗传型的鉴定DNA碱基比例的测定核酸分子杂交法16SrRNA寡核苷酸编目分析2.细胞化学成分的鉴定三、数值分类法第三节微生物分类鉴定的方法菌种鉴定工作的步骤：1.获得该微生物的纯培养物2.测定一系列必要的鉴定指标3.查找权威性的菌种鉴定手册一、经典分类鉴定方法(一)形态特征：包括个体形态和群体形态(即培养特征)1.在显微镜下观察细胞的形状、大小及排列情况，革兰氏染色反应，有无运动，鞭毛着生位置和数目，芽孢的有无及芽孢着生的部位和形状，细胞内含物，个体发育过程中形态变化的规律性。2.在固体培养基上观察菌落的形状、大小、颜色、光泽、粘稠度、隆起形状、透明度及边比重特征，和水溶性色素、质地、移动性、气味等。3.在半固体培养基中观察穿刺接种后的生长及运动情况。4.在液体培养基中观察生长特征，液体是否混浊及混浊的程度；液面有无菌膜；管底有无沉淀以及沉淀的形状；管中有无气泡；培养液中有无颜色变化等。(二)生理生化特性1.营养要求：可根据微生物对营养的不同利用能力来区别微生物。试验多种营养能否被微生物作为碳源和能源利用，以及微生物对一定有机化合物或CO2的利用能力。对于氮源来讲，看其是取自蛋白质、蛋白胨、氨基酸或铵盐、硝酸盐，还是大气中的游离氮。2.代谢产物：不同的微生物，因生理特性的不同而产生不同的代谢产物。因此，检查微生物的代谢产物，可以用来鉴别不同的微生物。在培养基中检查微生物是否形成有机酸、酒精、气体与类似的物质；能否与解色氨酸产生吲哚；是否产生色素或其他物质，如抗生素等。3.酶：产酶的种类何反应特性等。4.对药物的敏感性（三）血清学反应有时确定微生物的种，尤其是亚种，仅依据形态、生理生化等特征很难区别开。因此，常借助于血清学反应。在微生物分类鉴定中，应用血清学反应的基本原理，是用已知菌种、型或菌株制成抗血清，然后根据它们与待鉴定微生物是否发生特异性的血清学反应，来确定未知菌种、型或菌株。血清学反应的方法同样可应用于病毒的分类，尤其是应用于噬菌体的分类，具有良好的效果。一般噬菌体都是良好的抗原，把它注射到动物体内可以产生特异性抗体。噬菌体和抗体间的反应和其他常见的抗原抗体反应相似。二、现代分类鉴定方法（一）微生物遗传型的鉴定1.DNA碱基比例的测定：（G+C）mol%，DNA分子中G和C所占的摩尔百分比。2.核酸分子杂交法：按照碱基的互补配对原理，用人工方法对两条不同来源的单链核酸进行复性，以构建新的杂合双链核酸技术。3.16SrRNA寡核苷酸编目分析4.微生物全基因组序列测定（二）细胞化学成分的鉴定1.细胞壁的化学成分：主要是肽聚糖的基本结构2.全细胞水解液的糖型3.磷酸类脂成分的分析4.枝菌酸的分析5.醌类的分析6.气相色谱技术的应用三、数值分类法•数值分类法：依据数值分析的原理，借助现代电子计算机技术对拟分类的微生物对象按大量表型性状的相似程度进行统计、归类的方法。•步骤：①确定分类单元和选择分类特征；②进行特征测定或从文献中收集有关OUT（操作分类单位）的各项特征资料；③根据所编制的计算机程序要求，将特征资料进行编码、标准化并输入计算机；④由计算机计算各OUT之间的相似性，并根据相似性的数值进行聚类分析、分群归类；⑤输出分类结果、常用树状谱图法表示。数值分类法是根据生物表型特征总的相似性分类，其分类结构的表示是一种表型关系，并不直接表示生物的系统发育。其分类结果可作为建立或修改传统分类单元的依据。该分类方法使生物分类从传统分类的定性描述发展到了进行定量分析的水平，其主要目的是建立一种客观的分类方法，并实现分类过程的自动化。