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PCR实验室作业指导书文件编号：第2版编制：审核：批准：生效日期：2012年月日1目录序号主题内容代号页号1PCR实验室的设置及管理2PCR实验室工作制度3实验室内务管理及清洁制度4PCR实验室人员的配置及管理5实验人员的培训程序6PCR实验室清洁程序7样品编号的标准操作程序8PCR基因扩增实验室的要求9PCR废弃物的处理程序10试剂准备区工作制度、标准操作、程序文件11标本制备区工作制度、标准操作、程序文件12扩增区工作制度、标准操作、程序文件13产物分析区工作制度、标准操作、程序文件14PCR标本的保存操作程序15PCR标本的采集、运送、接收程序16PCR生物安全防护措施17PCR实验室化学试剂配18PCR实验室记录管理制度19PCR应急处理程序20PCR试剂的质检标准操作程序21PCR消耗品进购质检贮存程序22PCR室内质量控制操作程序23PCR室间质量控制操作程序24PCR温度校准标准操作程序125伯乐PTC-200型核酸扩增仪操作规程26ABI7300型荧光定量扩增仪操作维护规程27DYY-6C电泳仪操作维护规程28Bio-RadGelDoc_XR凝胶成像仪使用说明书29恒温水浴箱操作维护规程30旋涡振荡器操作维护规程31普通离心机操作维护规程32高速离心机操作维护规程33低温高速离心机操作维护规程34冰箱操作维护规程35超低温冰箱操作维护规程36生物安全柜操作维护规程37超净工作台操作维护规程38移液器操作维护规程修订页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期1234567891011121314151617181920PCR实验室的设置及管理1．目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染，保证检测结果的可靠性。2．适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。3．负责人：4．细则：4．1分子诊断室为检验科下设的专业实验室，从事基因扩增检测及相关实验工作。4．2本实验室采用普通RT-PCR扩增和实时荧光定量PCR两种技术作为临床基因诊断的主要手段，实验室分为四个区：试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区）、扩增区（第三区）及产物分析区（第四区）。每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。各区标签颜色：红色（第一区）、白色或绿色（第二区）、蓝色（第三区）；专用工作服：粉红色（第一区）、白色（第二区）、蓝色（第三区）。标本的接收则在检验科标本接收处进行。4．3各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，不可混用。4．4各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP文件。4．5严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增区→产物分析区”的单一流向制度，不得逆向进入前一工作区。4．6非本实验室工作人员，未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增区、产物分析区）需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。4．7实验完毕后做好清洁消毒工作。5.本文涉及以下图表：1.实验室设计平面图PCR实验室工作制度1．目的：保持良好的工作环境，以确保检测结果的可靠性，防止交叉污染，防止差错、事故及纠纷的发生。2．适用范围：所有本实验室人员。3．负责人：4．细则：4．1本实验室用于基因扩增检测及相关实验工作，不得进行其它实验操作。4．2各区的用品不得混用。4．3在各区的实验操作过程中，操作者必须戴手套和帽子，严格按照操作规程。4．4试剂准备区只能进行试剂的贮存及配制等相关操作（见相关SOP文件）。4．5标本处理区只能进行临床标本的保存，核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成（见相关SOP文件）。4．6扩增区只能进行DNA或cDNA的扩增、实时荧光PCR扩增产物的分析（见相关SOP文件）。4．7产物分析区只能进行RT-PCR扩增产物的分析（见相关SOP文件）。4.8进行实验时严格执行本实验室的各项操作规程，及时做好各种操作记录，力求准确、可靠。实验完毕，做好清洁、整理及分析统计等工作。4．9室内仪器由专人负责，未经许可，不得随意使用或挪用；爱护使用仪器，定期进行保养与维修。4.10爱护医院财产，注意安全；离开实验室前应关好门窗，检查水、电等。PCR实验室内务管理及清洁制度1．目的：保证实验室日常内务管理及清洁工作顺利进行。2．适用范围：实验室相关人员及相关清洁工人。3．负责人：4．细则：4．1内务管理制度a.非本室工作人员未经允许不得进入实验室。b.各区的用品不得混用。c.实验人员要有强烈的时间观念，按时上下班，不迟到、早退。d.进入实验室的工作人员必须遵守实验室的单一流向的规定，禁止逆向走动。e.所有仪器（如PCR扩增仪）须有专人负责，并有使用维护记录；实验人员必须熟悉仪器性能后方允许操作，并严格遵守操作规程。f.所有试剂进购、配制、质检、使用均要有记录，未经允许不得随意带出本实验室。g.各区的各种清洁消毒均应有记录，工作衣消毒时注意各区应分开进行处理。h.注意保持实验室卫生整洁，严禁在室内抽烟、吃零食，非实验操作人员应尽量少入。i.每天了解仪器运转情况及试剂使用情况，负责仪器的整洁，安全；下班前检查门、窗、水、电，节假日指定人员负责检查实验室的仪器、设备，确保安全。4.2内务清洁制度a.实验室地面保持平整、干净，通道要利于通行，没有无用的物品阻碍。b.合理规划实验室内物品，做到摆放整齐、有序，无用的或使用效率低的物品放置到储存处，常用的物品要容易寻找到。c.抽屉、柜子、文件类物品要作好标记，以方便识别。d.实验结束后用75%酒精对台面进行清洁，并经紫外灯进行消毒。e.每天实验结束后，紫外灯消毒60分钟后，依次关闭各区紫外灯并记录照射时间f.搞卫生时，依次清洁四个区的实验台面和地面，各区清洁消毒工具均专用，不可混用，注意按照单一方向流程的原则来进行清洁。g.处理好各区废弃物，高压消毒后集中处理。h.每周将工作服交消毒洗涤，不同实验区的工作服分开洗PCR实验室人员的配置及管理1．目的：保证实验室有足够数量的合格的具备开展该类实验能力的实验人员。2．适用范围：适用于实验室人员配置、管理、培训及考核。3．负责人：4．细则：4．1人员要求a.鉴于PCR技术要求的特殊性、复杂性，本实验室工人员应为有经验的医学检验专业人员。b.实验室工作人员应参加上级举办的PCR技术培训，并取得合格证。c.对于新进入本室的人员，如尚未取得PCR技术培训合格证，应在实验室有培训合格证的上级技术人员的指导下进行实验工作，实验报告由有资格人员出具，并应在最短的时间内取得上岗培训合格证。d.实验室工作人员上岗前必须学习并掌握PCR实验室管理文件。4．2人员配置a.实验室应根据工作需要配备足够的工作人员，目前实验室有主管技师2人、技师？人，？人都已获得培训合格证，视工作量的增加和业务发展需要，会适当增加工作人员。b.由实验室负责人负责全面管理、技术指导、解决与临床沟通及技术疑难问题；其他各级技术人员履行相应的工作职责。4．3人员管理实验室建立所有工作人员的技术档案，包括：学历、任职资格、发表论文、研究成果、培训等相关材料复印件。技术档案分文本档案和电子档案，文本档案每年更新1次，电子档案随时更新。5.本文涉及以下图表：实验室主要负责人简历表PCR实验室工作人员一览表人员档案卡实验室人员的培训程序1.目的:保证实验室有足够的技术力量和科室适应长远发展的需要。2.适用范围:核酸扩增荧光检测实验室实验人员及预备培训的人员。3.负责人:4.细则：4.1实验室负责人或负责人指定人员参加每年省CDC的室间质评总结会。4.2实验室工作人员每1～2年至少参加1次PCR技术的省级或国家级继续教育项目，参加相关学术交流会议。4.3安排未取得上岗培训合格证的工作人员在合适的时间内参加技术培训。4.4科室不定期组织实验室内部实验人员学习、更新核酸扩增方面的相关知识，提升自身的理论学习水平。特别是在标本接收区采血、接收标本的人员，需定期对其进行有关核酸扩增技术，标本采集、保存、运输等知识的培训。4.5本实验室工作人员每年进行考核一次,考核内容:a)日常工作质量b)室内质控测评c)室间质控测评d)在抱怨处理中的表现4.6本实验室工作人员均建立业绩档案,实行能进能出制度,不断吸收高质量人员,加强培训和提高,对于不适合本室工作的人员要及时调离。5.本文涉及以下表格培训申请表年度培训计划表培训记录表员工培训履历表PCR实验室清洁程序1．目的：保证实验室环境的整洁，防止污染。2．适用范围：适于实验室工作环境、实验台面、工作服、移液器等的清洁消毒工作。3．负责人：操作人：4．细则：4．1实验室地面必须平整、干净，通道要利于通行，没有无用的物品阻碍。4．2合理规划实验室内物品，做到摆放整齐、有序，无用的或使用效率低的物品放置到储存处，常用的物品要容易寻找到。4．3抽屉、柜子、文件类物品要作好标记，以方便识别。4．4实验结束后用75%酒精对台面进行清洁，并用紫外灯进行消毒。4．5每天对使用过的移液器用75%酒精进行擦拭。4．6实验过程中如发生标本或试剂外溅，应立即用75%酒精滴上，滤纸盖上半小时，然后用酒精擦洗，并用移动紫外灯消毒。4．7每天实验前开启各区的通风系统，各区实验结束后，分别打开传递窗紫外灯、天花板紫外灯消毒实验室，每次开启30～60分钟。4．8待紫外灯消毒时间足够后，依次关闭各区紫外灯并记录。4．9依次清洁四个区的实验台面和地面，各区清洁消毒工具均专用，不可混用，注意按照单一方向流程的原则来进行清洁。4．10处理好各区废弃物，交医院集中处理。4．11每周将工作服交院洗衣房洗涤消毒，不同实验区的工作服隔开洗涤。5.本文涉及以下表格实验室清洁消毒记录表垃圾处理记录表PCR样品编号的标准操作程序1．目的：保证标本编号的唯一性，也是准确发放报告的基础。2．适用范围：使用核酸扩增荧光检测实验室所开展的几？种检测项目：流感病毒、手足口病毒、霍乱弧菌等。3．负责人：操作人：4．细则：4．1按检测类型分类标记根据检测项目的不同，每种检测项目对应标记一种唯一的代号。如流感病毒标记为？，手足口病毒标记为？。4．2按标本接收顺序编号在同种检测类型的标本中，按标本检测顺序编号。如第一个检测流感病毒的标本编为？001，第二个检测流感病毒的标本编为？002，第三个检测结核的验单编为？003等。4．3编号步骤a.对接受的标本，根据编号的基本原则编号，每个样本对应一个唯一的编号（如？）。b.在样品送检单和对应的样品管上作好相同的标记。c.做好标本的接收记录，每个样本的记录都应包括以下信息：接收时间、送检单位、患者姓名、性别、年龄、标本类别、标本状态、送标本者、接收人、标本编号等。d.处理好样品、点样后，将反应管放入扩增仪上开始扩增。e.扩增得到结果后，先在登记表上填入结果，作好记录，再一一把实验结果填入相应报告单。f.发放检验报告单。5.本文涉及以下图表：PCR标本接收记录表PCR结果登记表表PCR基因扩增实验室的要求1．目的：规定在各区内所进行的工作及其操作。2．适用范围：所有在本区内进行的工作。3．负责人：操作人：4．程序：实验室分四？区:试剂贮存、准备区；标本制备区；扩增区；产物分析区。进入各区严格按照单一方向进行，即试剂贮存、准备区——标本制备区——扩增区——产物分析区。各区及其设备、物品必须有明确的标记，严禁混用。进入PCR实验室的工作人员（含卫生员），都必须遵守实验室的规则，尤其严格遵守进入PCR实验室的唯一流向。不可进入PCR扩增后区打扫卫生，再返回扩增前区工作。防止非本室工作人员串岗，进入本室。尤其不得为找人，而逆向误入PCR实验室。总则（1）PCR实验室工作人员应具备医学检验、微生物检验基本知识，并受过PCR实验的基础知识和技能培训。（2）PCR实验室分试剂准备，样本准备，PCR扩增和产物分析四个室，各室的实验物品（含加样器，试管架，吸头，记录纸，笔等），不得混用，须贴上标签予以区别。（3）实验室技