性激素六项的检测及临床应用

性激素六项的检测及临床应用董福昌邮箱：[e-mail]联系方式：400-888-1223免疫学检测发展简介免疫学检测主要是利用抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段，由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对检测信号进行放大和显示，因此常被用于检测蛋白质、激素等微量物质。免疫学检测发展简介免疫分析经历了放射免疫检验、荧光免疫检验、酶标免疫检验等不同时期，化学发光免疫检验是免疫分析发展的一个新阶段，它环保、快速、准确的特点已得到人们的普遍认识。因此化学发光免疫分析是通往免疫检验完美境界的必经之路。化学发光免疫分析技术原理化学发光免疫分析（ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA）是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。其机制为某些化合物（发光剂或发光底物）可以利用一个化学反应产生的能量使其产物分子或反应中间态分子上升至电子激态。当此产物分子或中间态分子衰退至基态时，以发射光子的形式释放能量（即发光）。免疫测定(immunoassay)是利用抗原体反应来测定标本中微量物质的方法。化学发光免疫分析技术原理1.使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。2.使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。3.洗涤后加入发光底物，酶促使发光底物发光，通过专用的仪器检测光子的数量，从而反算出未知抗原或抗体的浓度。化学发光免疫检测原理在化学发光免疫分析，基本原理同酶联免疫技术(ELISA)，常采用双抗体夹心法、竞争法、等反应模式。检测方法的比对1、化学发光与酶免的对比2、化学发光与放免的对比3、化学发光与时间分辩荧光检测的对比4、化学发光的突出优点化学发光与酶免的对比酶免原理：1.使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。2.使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。3.洗涤后加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。化学发光免疫检测的灵敏度与可测范围远远高于酶免产品，兼具ELISA法简便的操作方法与较短的反应时间。化学发光与酶免的对比表酶标化学发光测量精度定性/半定量测量定量测量人体伤害底物有致癌性无有效期较短长干扰因素多极少测试项目少多化学发光与放免的对比放免原理是使用具有放射性的I125作标记物，然后用测量射线计数仪放射性（125I）。对环境的污染及对身体的危害，已经为重视环保的国家逐步取消。（如整个欧洲仅尚存几个放免试验室）125I的半衰期短而导致其试剂有效期短标记物125I的稳定性差，导致试剂盒批间、批内的变异较大；标准曲线有效期短，必须每次定标，造成浪费。操作繁琐，出报告时间长。化学发光与放免的对比表放免化学发光测量精度较高高人体伤害放射性无有效期较短长干扰因素较多极少测试项目较少多化学发光与时间分辨的对比时间分辨免疫检测原理和化学发光基本一样，只是标记物改为稀土元素，不用发光底物但需要外在的稳定光源照射，光的波长产生stoke位移，并有一个时间滞后以便于检测波长改变后的光子数量。1、化学发光成本低于时间分辨荧光免疫分析。2、化学发光比时间分辨荧光免疫试剂盒更稳定3、化学发光免疫分析试剂盒对对测试环境条件要求低。4、化学发光不需要外光源，仪器可靠性更高化学发光与时间分辩荧光的对比化学发光时间分辩荧光标记物酶-发光底物两级放大稀土离子，如铕稳定性稳定性非常好影响被标记物的生物活性与免疫活性灵敏度灵敏稍高于化学发光反应体系接近中性酸性，易引起蛋白质变性包被技术不透明微量孔壁吸附,提高分析灵敏度,降低本底采用透明微量孔壁吸附，孔壁的透明度会引起,本底干扰技术性新技术，很成熟新技术，不成熟干扰因素干扰极小容易受内外源稀土离子的干扰测试项目项目齐全缺少部分项目。如：贫血（叶酸，铁蛋白，维生素B12）化学发光免疫分析的优点1．灵敏度高：这是CLIA关键的优越性，其灵敏度可达10-16mol/L（RIA为10-12mol/L）。又如化学发光底物（如AMPPD）可检测出的碱性磷酸酶的浓度比显色底物要灵敏5х105倍。2．宽的线性动力学范围：发光强度在4～6个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度（OD值）为2.0的范围相比，优势明显。虽然RIA也有较宽的线性动力学范围，但放射性限制了其应用。3．光信号持续时间长：辉光型（glowtype）的CLIA产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实验操作及测量。化学发光免疫分析的优点4．分析方法简便快速：绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂（或复合试剂）的一步模式。5．结果稳定、误差小：样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免除了各种可能因素（光源稳定性、光散射、光波选择器等）给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。6．安全性好及使用期长：在上述优点前提下，更免除了使用放射性物质。到目前为止，还未发现CLIA的危害性。有效期可长达1年以上，放射免疫分析由于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一个月，而酶联的底物贮存性差，都无法与化学发光相比，有效期长可以提高劳动效率，也利于推广应用。基本性能对照表化学发光免疫分析种类1.直接化学发光A吖啶酯发光原理：纳米磁珠分离后的吖啶酯标记的抗原抗体复合物，在含H2O2的强酸、强碱激发底物的作用下，快速发出可见光，通过光电倍增管进行光子计数，相对光强度RLU与待测抗原浓度成函数关系。特点：发光过程在5秒内完成，激发发光程序简单，测试速度快，但发光标记物吖啶酯在缓冲液中不稳定，易水解，影响试剂稳定性。代表仪器：拜耳公司、雅培。化学发光免疫分析种类B异鲁米诺发光原理：发光过程和原理与吖啶酯完全相同，但激发发光速度更快，在3秒内完成整个过程，测试速度最快，而且克服了吖啶酯在缓冲液不稳定、易水解的缺点。代表仪器：德国Byk–Sangtec公司C电化学发光原理：纳米磁珠分离后的三联吡啶钌标记的抗原抗体复合物，在三丙胺的作用下，发生氧化还原反应，发出可见光，通过光电倍增管进行光子计数，相对光强度RLU与待测抗原浓度成函数关系。代表仪器：瑞士ROCHE公司。化学发光免疫分析种类2、酶促化学发光或持久发光原理：酶促化学发光一般是将碱性磷酸酶标记在抗体或抗原上，纳米磁珠分离后的碱酶标记的抗原、抗体复合物在发光底物AMPPD作用下，持续发出可见光，通过光电倍增管读取光信号。特点：激发发光时间长，测试速度慢，因为酶易受环境温度的影响，试剂的稳定性不如直接化学发光好。代表仪器：美国贝克曼公司的ACCESS，雅培公司的AXSYM。性激素项目临床应用标本的采集：检查内分泌最好在月经第2-5天，这一段时间称为基础性激素水平，第3天测定最好。可以反应卵巢的功能状态。但对于月经长期不来潮而且又急于了解检查结果者，则随时可以检查。性激素项目临床应用通过测定性激素水平来了解女性内分泌功能和诊断与内分泌失调相关的疾病.常用的性激素有卵泡生成激素(FSH)、黄体生成激素(LH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)、催乳激素(PRL),基本满足了临床医生对内分泌失调与否的筛查和对生理功能的一般性了解。此外，还应用于男女不育症，鉴别诊断垂体或下丘脑的某些功能障碍。适应症：女性出现月经周期紊乱、闭经、生殖道异常出血、妇科相关肿瘤等等，需要常规检查性激素。在男性，出现精液异常、阳痿、激素相关肿瘤等，需要检查性激素。性激素项目常识检查基础性激素前至少一个月不能用性激素类药物（包括黄体酮、雌激素类），否则结果不可靠（治疗后需要复查性激素除外）。月经任何时间检查性激素都可以，每个时段的正常值不同。但是诊治不孕症一定要了解基础性激素水平，首先要选择月经第2～5天检查，称为基础性激素水平，第3天测定最好。确定是来月经第3天，检查性激素5项即可，可以不查孕酮，孕酮应该在黄体期检查（月经21天或排卵后7天）；但不能肯定阴道流血是否月经，应该检查6项，以防止误诊（根据P数据可以大概判断月经周期时段）。性激素项目临床应用雌二醇（E2）正常月经周期中，卵泡早期排卵前达第一个高峰，可达250.0～500.0pg/mL，排卵后迅速下降，黄体期形成第二个高峰，约125.0pg/mL，维持一段时间后，黄体萎缩时下降至早卵泡期水平,即来月经第3天应该为25.0～50.0pg/mL。1、基础E245.0～80.0pg/mL，无论年龄与FSH如何，均提示生育力下降。2、基础E2≥100.0pg/mL时，卵巢反应更差，即使FSH﹤15IU/L，也无妊娠可能。3、监测卵泡成熟和卵巢过度刺激综合症（OHSS）的指标①促卵泡排出：促超排卵治疗时，当卵泡≥18mm，血E2达299.7pg/mL时，停用人绝经期促性腺激素（HMG），当日或于末次注射HMG后24～36小时注射HCG10000IU。②E2﹤1000.0pg/mL，一般不会发生OHSS。③E2﹥2500.0pg/mL，为发生OHSS的高危因素，及时停用或减少HMG用量，并禁用HCG支持黄体功能，可避免或减少OHSS的发生。④E2﹥4032.7pg/mL时，近100%发生OHSS，并可迅速发展为重度OHSS。性激素项目临床应用促卵泡刺激素（FSH）和促黄体生成素（LH）基础值为5～10mIU/mL正常月经周期中，卵泡早期(月经2~3天)血FSH、LH均维持在低水平，排卵前迅速升高，LH高达基础值的3~8倍，可达160mIU/mL甚更高，而FSH只有基础值的2倍左右，很少﹥30mIU/mL，排卵后FSH、LH迅速回到卵泡期水平。监测卵泡早期的FSH、LH水平，可以初步判断性腺轴功能。FSH在判断卵巢潜能方面比LH更有价值。1、卵巢功能衰竭：基础FSH﹥40mIU/mL、LH升高或﹥40mIU/mL，为高促性腺激素（Gn）闭经，即卵巢功能衰竭；如发生于40岁以前，称为卵巢早衰（POF）。2、基础FSH和LH均﹤5mIU/mL为低Gn闭经，提示下丘脑或垂体功能减退，而二者的区别需借助促性腺激素释放激素（GnRH）试验。性激素项目临床应用3、基础FSH﹥12mIU/mL，下周期复查，连续﹥12mIU/mL提示DOR。4、卵巢储备功能不良（DOR）：基础FSH/LH﹥2～3.6提示DOR（FSH可以在正常范围），是卵巢功能不良的早期表现，往往提示患者对超排卵（COH）反应不佳，应及时调整COH方案和Gn的剂量以提高卵巢的反应性，获得理想的妊娠率。因为FSH/LH升高仅仅反映了DOR，而非受孕能力下降，一旦获得排卵时期，仍能获得理想的妊娠率。5、多囊卵巢综合征（PCOS）：基础LH/FSH﹥2～3，可作为诊断PCOS的主要指标(基础LH水平﹥10mIU/mL即为升高，或LH维持正常水平，而基础FSH相对低水平，就形成了LH与FSH比值升高)。6、检查2次基础FSH20mIU/mL，可认为是卵巢早衰隐匿期，提示1年后可能闭经。性激素项目临床应用泌乳素（PRL）PRL由腺垂体嗜酸性的PRL细胞合成和分泌。PRL分泌不稳定，情绪、运动、性交、饥饿及进食均可影响其分泌状态，而且随月经周期有较小的波动，具有与睡眠有关的节律性；入睡后短期内PRL分泌增加，下午较上午升高。因此，根据这种节律分泌特点，应在上午9~10时空腹抽血。PRL显著升高者，一次检查即可确定；PRL轻度升高者，应进行第二次检查，不可轻易诊断高泌乳素血症（HPRL）而滥用溴隐亭治疗。PRL≥25ng/ml或高于本单位检验正常值为HPRL。PRL﹥50ng/ml，约20%有泌乳素瘤。PRL﹥100ng/ml，约50%有泌乳素瘤，可选择性做垂体CT或磁共振。PRL﹥200ng/ml，常存在微腺瘤，必须做垂体CT或磁共振。PRL降低：席汉综合征、使用抗PRL药物