E.coli-DH5α感受态制备步骤

E．coliDH5α感受态细胞制备的主要步骤：①从菌种的甘油冻存管中取一环菌液在LB平板上分区划线，37℃培养至单菌落长出。②挑取平板上的单菌落转移到2~5mL的LB培养基中（37℃，200rpm）过夜培养。③取过夜培养的菌液200μL加入到20mL的LB培养基中（37℃，200rpm）培养至OD600为0.4~0.7.④培养好的菌液转移至预冷的50mL离心管中，冰上静置10min。⑤离心（4℃，2500g，10min）。⑥弃上清液，加入4mL0.1mol/LCaCl2，冰上重悬后静置10min。⑦离心（4℃，2500g，10min）。⑧弃上清，加入2mL0.1mol/LCaCl2（溶液中含终浓度为15%的甘油），重悬沉淀，冰上静置30min。⑨分装（100μL/tube），-80℃保藏。