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氯吡格雷抵抗的血小板功能差异与遗传多态性研究实习生河北北方学院周杏指导老师309医院检验科孙彬军医进修学院主要内容一、研究背景二、研究目的三、技术路线及试验方法四、研究特色与创新之处五、预期结果研究背景军医进修学院1.处理已形成的血栓开通闭塞的血管恢复冠脉灌注溶栓治疗PCI治疗2.防止新的血栓形成防止血栓扩展缩小损伤范围抗凝治疗抗血小板治疗CHD特别是ACS的治疗原则抗血小板药物抵抗军医进修学院治疗反应性差异血小板旁路途径活化临床危险因素基因多态性依从性差/剂量不足药物相互作用药物的生物利用度外部因素内部因素抗血小板药物抵抗的可能机制研究内容氯吡格雷的作用机制氯吡格雷氯吡格雷无活性羧酸衍生物2-氧-氯吡格雷ADP对腺苷酸环化酶的抑制磷酸蛋白（VASP）的磷酸化纤维蛋白受体（GPⅡb/Ⅲa）活化P2Y12受体血小板聚集酯酶小肠吸收（50%）肝内代谢（CYP2C19、CYP1A2、CYP2B6）肝内代谢（CYP3A4/5、CYP2B6、CYP2C19、CYP2C9）+--肝细胞色素P450酶（CYP450）军医进修学院吸收环节：ABCB1代谢环节：CYP3A4、CYP3A5、CYP2C9、CYP2C19受体环节：P2Y12、GPⅡb/Ⅲa影响氯吡格雷疗效相关基因一、遗传多态性与氯吡格雷疗效差异的相关性相关性权重体系个体化二、评价各种血小板功能检测技术，建立行业标准TEGPMPAF-100PL-11sc-2000VerifyNow血小板功能检测方法的比较方法优点缺点预测临床事件AR诊断CR诊断LTAsc-2000已有丰富的数据；结果与临床预后相关；血小板功能检测的金标准重复性差；需血量大；需制备血小板富集血浆；耗时多可可（AA）可（ADP）PFA-100操作简便；需血量少；全血检测；无需处理血样受vWF、PCT、HCT、PLT等因素影响；无调校方法可可不可VerifyNow操作简便；需血量少；全血检测；床旁检测；与LTA相关性好价格昂贵；无调校方法可可（AA）可（ADP）FCM检测血小板表面的抗原；可区分激活状态和非激活状态的血小板仪器和试剂都比较昂贵；操作复杂，需受过特别培训的技术人员；不能作为快速检测项目可可可PL-11操作简便；重复性好；检测信息真实、可靠；检测灵敏；干扰因素少；采用原始样品反映的血小板功能水平更真实；可可可军医进修学院血小板功能检测在血栓病治疗、预防上具有重要价值；但现有的血小板功能检测方法、质量及标准不足以满足临床需要。---《实验室检测诊断对抗血小板治疗的效能》专题研讨会，2011年7月，美国亚特兰大，由AACC与美国心脏病学会联合举办PL-11血小板功能分析仪检测原理•PL-11血小板分析仪采取“自动连续检测法”方法，直接对全血中血小板原始数量检测后，继续对加入诱聚剂后血小板数量进行连续计数检测，通过对比加诱聚剂前血液中血小板数量与加入诱聚剂后血小板数量的变化及血小板下降的速度，评价分析PL-11功能运用价值，建立行业标准。原始血小板数-聚集后最低血小板数×100=MAR%原始血小板数*（原始血小板数-聚剂后最低血小板数=聚集的血小板数量）sc-2000血小板聚集测试仪原理本仪器采用光电比浊法测试血小板聚集:在特定的连续搅拌条件下，在富血小板血浆(PRP)中加入诱导剂，血小板发生聚集，PRP的透光度增高或浊度下降。将光浊度的变化转换为电讯号的变化，从而计算出血小板的聚集率。搅拌方式采用国际先进的磁棒搅拌方式。计算公式如下:PPP光电电压值-实测光电电压值聚集率=(1—）×100%PPP光电电压值-PRP光电电压值*（PPP即贫血小板血浆）技术路线及研究方法军医进修学院技术路线目的基因选择，引物设计行PCI术的冠心病患者血小板功能检测评估患者应用氯吡格雷后的血小板功能状态（低下or正常）提取全血基因组ＤＮＡＰＣＲ-测序*PCR最佳反应条件的建立*患者遗传多态性分析缺血事件发生情况：致死或非致死性心肌梗死、急性或亚急性血栓（支架内再狭窄）、需要再次住院治疗的不稳定心绞痛、脑卒中*评估基因多态性与氯吡格雷疗效的相关性，建立血栓性疾病抗血小板药物治疗的疗效的评估体系。*评价血小板功能检测技术的优缺点，选择最优技术，并建立行业标准。诊断标准、纳入标准、排除标准同一标本先进行血小板功能检测，再进行基因分析标本采集病例资料采集*一般资料*实验室指标*冠脉照影结果*PCI手术情况患者临床特征对TEG检测结果的相关性随访6个月随访6个月随访6个月不同临床类型的CHD患者的临床特征分析血小板功能与基因多态性的相关性军医进修学院血小板功能检测的同一标本提取全血基因组（反应条件的优化）基因测序多态性与缺血事件的相关性研究方法DNAPCR研究特色与创新之处军医进修学院（1）在国内外的研究中，首次同时针对影响氯吡格雷疗效的吸收环节、代谢环节和受体环节的3个环节7个目的基因进行了遗传多态性研究，分析各目的基因对氯吡格雷疗效的影响权重，并考虑了多基因联合多态性的影响；（2）国内外首次探索建立一个以遗传多态性为核心，综合考虑患者其它临床信息，通过计算危险分数，评估患者氯吡格雷疗效的评价体系；（3）PL-11型血小板分析仪是最新的血小板功能检测技术，该仪器采取“自动连续检测法”方法，直接对血样中血小板数量、体积在诱聚剂加入后的变化进行连续检测，直接反应血小板聚集功能水平，提供对该个体血小板功能水平的评价，该技术在国内外几乎无报道。预期结果军医进修学院临床建立统一的评价抗血小板药物反应性的实验室方法和标准精诚合作共谋发展临床检验建立完善优化的个体化治疗方案建立以遗传多态性为核心，评价抗血小板药物疗效差异的评估体系军医进修学院谢谢！