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实验二细菌的革兰氏染色法细菌的芽孢染色法革兰氏染色一、目的和要求1.了解革兰氏染色法原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。2.掌握革兰氏染色的基本步骤。二、原理G+、G-细菌的细胞壁成分和结构不同。G+的CW主要有肽聚糖形成的网状结构组成，在染色过程中，当用95%乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，细胞壁通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞壁内而不易脱色，因此呈蓝紫色。G-的细胞壁中肽聚糖含量低，脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物容易被乙醇抽提出来而脱色，然后又被染上了复染剂的颜色，因此呈现红色。四、操作三、菌种：大肠杆菌Esherichiacoli枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis染液：革兰氏染液，具体步骤制片固定初染（结晶紫染液）1-2min水洗媒染（碘液）1min水洗脱色（95%乙醇至无色）水洗复染（番红复染6-8min/或复红染液1-2min）水洗干燥镜检五、实验报告简述各菌株的染色结果，并分别绘图示其形态特征。革兰氏染色的关键环节涂片不宜过厚，以免脱色不完全，造成假阳性。乙醇脱色时间菌龄：应选择活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色。培养时间过长，或死亡及部分自溶，改变了细菌细胞壁的通透性，造成阳性菌的假阴性反应。火焰固定不宜过热媒染剂的作用媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或吸附力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使之不易脱落。芽孢染色法一、目的和要求1.学习并掌握芽孢染色的基本原理2.初步了解芽孢杆菌的形态特征二、原理用着色力强的染色剂孔雀绿在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可以进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而进入芽孢一经着色则很难被水洗脱色。当用复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更容易区分。三、菌种：枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis培养物染液：孔雀绿水溶液、番红水溶液四、操作步骤常规制片孔雀绿经微波炉加热染色25秒水洗番红复染3-5min水洗镜检五、实验报告绘图示枯草芽孢杆菌的形态特征革兰氏染色：制片固定初染（结晶紫染液）1-2min水洗媒染（碘液）1min水洗脱色（95%乙醇至无色）水洗复染（番红复染6-8min/或齐氏复红染液1-2min）水洗干燥镜检简述各菌株的染色结果，并分别绘图示其形态特征。大肠杆菌Esherichiacoli,枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis芽孢染色：常规制片孔雀绿经微波炉加热染色25秒水洗复染(番红水溶液）6-8min水洗镜检