临床微生物学检验第五版第10章其他革兰阴性杆菌

第10章其他革兰阴性杆菌第一节嗜血杆菌属第二节鲍特菌属第三节布鲁菌属第四节巴斯特菌属第五节弗朗西斯菌属第一节嗜血杆菌属（Haemophilus）嗜血杆菌属是一群没有动力、不形成芽胞、菌体呈球杆状的革兰阴性小杆菌，生长需求较高，在人工培养时需新鲜血液才能生长，故称嗜血杆菌。一、分类流感嗜血杆菌（H.influenzae）副流感嗜血杆菌（H.parainfluenzae）溶血嗜血杆菌(H.haemolyticus)副溶血嗜血杆菌（H.parahaemolyticus）杜克嗜血杆菌（H.ducreyi）埃及嗜血杆菌（H.aegyptius）嗜沫嗜血杆菌（H.aphrophilus）副嗜沫嗜血杆菌(H.paraphrophilus)迟缓嗜血杆菌（H.segnis）二、临床意义菌种常栖部位及所致疾病流感嗜血杆菌原发化脓性感染及继发性感染，包括脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、心包炎、鼻窦炎及中耳炎等。副流感嗜血杆菌口腔及阴道正常菌群，偶尔可引起心内膜炎、尿道炎。溶血嗜血杆菌鼻咽部正常菌群，常引起儿童上呼吸道感染。副溶血嗜血杆菌口腔、咽部正常菌群，偶可引起咽炎、化脓性口腔炎和心内膜炎杜克雷嗜血杆菌软下疳，为性传播病菌。常引起外阴脓疱、溃疡、淋巴结肿大。埃及嗜血杆菌急性亚急性结膜炎、儿童巴西紫癜热嗜沫嗜血杆菌咽部正常菌群、牙菌斑中常见菌、偶致心内膜炎和脑脓肿副嗜沫嗜血杆菌咽部及阴道正常菌群，偶可引起亚急性细菌性心内膜炎、败血症、甲沟炎、、脑脓肿、脑膜炎。几种主要嗜血杆菌常栖部位及所致疾病三、微生物学检验生物学特性临床标本采集抗原检测及核酸检测分离培养鉴定（一）生物学特性1.形态染色G-小杆菌，呈多形性：球杆、长杆、丝状无芽胞、无鞭毛、多数有菌毛，毒力株有荚膜2.培养特性营养要求高需要X、V因子生长温度为35℃最佳培养基：巧克力琼脂菌落特征：巧克力琼脂培养基小、无色透明菌落流感嗜血杆菌巧克力琼脂养基菌落（二）临床检验程序1.标本采集在疾病早期采取标本，立即送检。在取标本时以肉汤湿润，防止干燥。对心内膜炎、患者取血液标本。痰液标本应洗涤、消化，再接种。不能立即送检应室温保存，不要冷藏。2.分离培养血液、骨髓：增菌后接种巧克力色血琼脂平板有杂菌标本接种选择培养基：巧克力琼脂中加入抗生素(万古霉素、杆菌肽、氯林可霉素)3.鉴定菌落形态、涂片染色特点血平板卫星试验Ⅹ、Ⅴ因子需求试验卫星现象当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在血平板上共同培养时，由于金黄色葡萄球菌能合成较多的Ⅴ因子，并弥散到培养基中，可促进流感嗜血杆菌生长，故在葡萄球菌周围生长的菌落较大，越远越小。卫星现象(satellitephenomenon)第二节鲍特菌属（Bordetella）一、分类百日咳鲍特菌(B.pertussis)副百日咳鲍特菌（B.parapertussis）支气管鲍特菌(B.branchiseptica)鸟鲍特菌(B.avium)欣氏鲍特菌(B.hinzii)霍氏鲍特菌(B.holmesii)二、临床意义是百日咳的致病菌一年四季均可发病，冬春季多发，小儿多于成人传播途径：飞沫传染源：患者潜伏期：1~2周致病因素：百日咳毒素(PT)、丝状血细胞凝集素(FHA)腺嘌呤环酶毒素(ACT)、气管细胞毒素、皮肤坏死毒素临床表现卡他期：1~2周，明显卡他症状，传染性强，感染标本培养阳性率高痉挛期：1~4周，阵发性剧烈咳嗽，直至咳出粘稠的痰液或呕吐为止恢复期：1~2周，阵咳减轻，渐趋停止三、微生物学检验生物学特性标本直接检查分离鉴定与培养（一）生物学特性1.形态染色革兰阴性短小杆菌无芽胞，有荚膜支气管鲍特菌、鸟鲍特菌有鞭毛百日咳鲍特菌革兰染色3种鲍特菌抗原因子种特异因子其他因子百日咳鲍特菌12、3、4、5、6、7副百日咳鲍特菌148、9、11、7支气管炎鲍特菌128、9、10、11、72.培养特性专性需氧，营养要求高最适生长温度为35℃～37℃最适pH6.8～7.0常用培养基：B-G培养基（血液、甘油、马铃薯）、CCBA培养基•百日咳鲍特菌在CCBA培养基的菌落（二）临床检验程序1.标本采集咳碟法、鼻咽拭子法2.标本直接检查直接显微镜检查抗原检测核酸检测3.分离培养与鉴定凝集反应鲍特菌检验程序标本直接检查（革兰染色）DFA抗原检出核酸检测分离培养血清学诊断，ELISA等可疑菌落菌落观察镜检生化反应DFA核酸检测鲍-金琼脂动力氧化酶脲酶枸橼酸盐利用硝酸盐还原百日咳鲍特菌-+---副百日咳鲍特菌--++-支气管鲍特菌+++++鸟鲍特菌++---欣氏鲍特菌++-+-霍氏鲍特菌-----6种鲍特菌生化特征第三节布鲁菌属（Brucella）一、分类羊布鲁菌（B.melitensis）牛布鲁菌（B.abortus）猪布鲁菌（B.svis）绵羊布鲁菌(B.ouis)狗布鲁菌(B.canis)森林鼠布鲁菌（B.neotomaes）二、临床意义传染源：病兽，以羊、牛、猪多见传播途径：病兽的组织、尿、乳液、等通过人体的皮肤、呼吸道、消化道进入人体易感人群：发病以青壮年为主，从事兽医、皮毛加工、屠宰的工人发病率较高潜伏期：5~21日，亦可高达数月致病物质内毒素、透明质酸酶、荚膜所致疾病动物：母畜流产、乳腺炎、附睾炎等赤藓醇－－胎盘、绒毛膜含量高人类：波浪热分泌物、乳品消化道、呼吸道黏膜、皮肤及眼结膜人菌血症1～6W潜伏期（70％）发热、出汗、关节痛和全身乏力内毒素进入肝、脾、骨髓（发热消退）繁殖入血菌血症（体温再次上升）波浪热三、微生物学检验生物学特性标本采集标本直接检查分离培养与鉴定（一）生物学特性1.形色染色革兰阴性短小球杆菌，两端钝圆，偶见两极浓染，无动力、无芽胞、无荚膜2.抗原成分A抗原、M抗原马尔他布鲁菌革兰染色A:M羊—1:20牛—20:1猪—2:1需氧，营养要求较高需5%~10%的CO2培养基：硫胺、烟酸、生物素等物质生长温度为35℃最适pH6.7生长缓慢（5~7天）3.培养特性马尔他布鲁菌血平板菌落（二）临床检验程序1.标本采集血、骨髓、尿、乳汁、关节滑膜液2.标本直接检查显微镜检查直接镜检意义不大凝集反应玻片凝集、试管凝集PCR检测3.分离培养与鉴定血液及体液：双相培养基-30d无菌生长阴性分泌物、脏器：选择培养基血清或肝浸液培养基:2~3d可见细小、无色透明的光滑型菌落血平板上不溶血液体培养基开始轻度混浊、两周后有沉淀布鲁菌的生化特性菌种触酶氧化酶糖分解精氨酸脱羧硝酸盐还原尿素酶H2S产生染料的耐受葡萄糖半乳糖阿拉伯糖硫廑(40μg)复红(20μg)羊布鲁菌+++---+V-++牛布鲁菌+++++-+++-+猪布鲁菌++++++++(-)+-森林鼠布鲁菌+-+++-+++--绵羊布鲁菌+--------+(-)犬布鲁菌+++--+++-+-注：V不定;(-)大部分菌株阴性第四节巴斯德菌属（Pasteurella）分类多杀巴斯德菌（P.multocida）嗜肺巴斯德菌（P.pneumotropica）溶血巴斯德菌（P.haemolytica）产气巴斯德菌（P.aerogenes）鸡巴斯德菌（P.qallinarum）犬巴斯德菌（P.Canis）贝氏巴斯德菌（P.beffgae）达可马巴斯德菌（P.dagmatis）明立巴斯德菌（P.tomatts）临床意义为人兽共患病原菌常引起肺部感染、支气管炎、菌血症、脑膜炎、脑脓肿、化脓性关节炎、骨髓炎、阑尾脓肿、腹膜炎、产褥热、肝脓肿及伤口感染近年来，家养宠物增多，所以该病较为多见微生物学检验生物学特性标本直接检查分离培养与鉴定生物学特性形态染色革兰阴性球杆菌无动力、无芽胞分离培养巧克力平板、血平板：白色不溶血小菌落，约0.5~1.5mm鉴定触酶和氧化酶阳性，发酵葡萄糖产酸不产气，不发酵乳糖，能还原硝酸盐多杀巴斯德菌血平板菌落第五节弗朗西斯菌属（Francisella）分类土拉弗朗西斯菌（F.tularesis）新凶手弗朗西斯菌（F.novicida）临床意义流行病学分布广泛，是野生动物中的自然疫源性疾病为人兽共患病原菌人有高度的易感性所以在战争时期该菌被用作生物战剂潜伏期3~5天发病急、高热（39~40℃）剧烈头痛、关节痛甚至发生衰竭及休克、全身中毒症状临床症状微生物学检验生物学特性分离培养与鉴定检验注意事项生物学特性革兰阴性小杆菌，需氧菌无芽胞、无鞭毛、无荚膜卵黄培养基或胱氨酸血琼脂培养基最适温度：35~37℃最适pH6.8~7.2生化鉴定：发酵碳水化合物及醇能力较弱。能发酵葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气；分解脲素，产生少量H2S；触酶阳性；氧化酶阴性；不产生吲哚。不发酵乳糖、蔗糖、鼠李糖、阿拉伯糖、甘露醇、山梨醇。分离培养注意事项本菌属甲类菌种专门实验室进行工作人员应接受预防接种