临床微生物学检验第五版第11章弧菌属气单胞菌属和邻单胞菌属

第11章弧菌属、气单胞菌属邻单胞菌属弧菌科弧菌属异单胞菌属发光杆菌属等共8个属O1群霍乱弧菌非O1群霍乱弧菌副溶血弧菌拟态弧菌·····分类等66个种弧菌属（Vibrio）的共同生物学特性:除麦氏弧菌外，氧化酶阳性、还原硝酸盐发酵葡萄糖产酸罕见产气对O/129敏感（近年出现抗性株）钠离子能刺激其生长，部分菌株嗜盐兼性厌氧，营养要求不高革兰阴性、弧形（短杆）菌、动力（＋）弧菌属的致病性：（含盐和海水环境中自身微生物群的一部分）肠道内感染（霍乱、胃肠炎）肠道外感染（伤口感染、败血症等）致病性弧菌所引起的疾病种所致疾病临床意义标本来源O1群霍乱弧菌霍乱主要致病菌粪便O139群霍乱弧菌霍乱主要致病菌粪便非O1群霍乱弧菌胃肠炎主要致病菌粪便、血副溶血弧菌胃肠炎主要致病菌粪便、伤口创伤弧菌败血症、伤口感染主要致病菌粪便、伤口少女弧菌伤口感染散发感染伤口溶藻弧菌伤口感染散发感染耳、伤霍利斯弧菌胃肠炎散发感染粪便拟态弧菌胃肠炎散发感染粪便河弧菌胃肠炎罕见感染粪便麦氏弧菌胃肠炎罕见感染粪便氟尼斯弧菌胃肠炎罕见感染辛辛那提弧菌菌血症、脑炎罕见感染鲨鱼弧菌伤口感染罕见感染霍乱弧菌VibriocholeraeO1andO139霍乱弧菌是烈性肠道传染病霍乱的病原菌，为我国法定传染病（甲类），俗称2号病。（1号病为鼠疫）。血清学分群（型）在流行病学上有价值抗原H抗原：共同抗原，特异性低O抗原（A、B、C)：是分群和分型的基础。1.依据O抗原不同分155个血清群（O1群、O139群、非O1群霍乱弧菌）2.O1群有三个血清型AB构成小川型（Ogawa)AC构成稻叶型（Inaba）ABC构成彦岛型(Hikojima）3.每个血清型根据表型不同分成古典和El-Tor两个生物型。生物分型：O1群霍乱弧菌噬菌体分型：古典生物型El-Tor生物型第IV组噬菌体古典生物型第V组噬菌体El-Tor生物型霍乱的流行史1817-1923共6次印度恒河三角洲古典生物型1961第7次印度尼西亚Eltor生物型1992.10孟加拉湾的印度、孟加拉O139O139群霍乱弧菌在亚洲的流行(1992.10-1994.11)霍乱的流行史临床意义(致病因素)进入小肠，鞭毛、菌毛、分泌黏液，O139群有荚膜穿过小肠黏膜表面黏液层黏附于小肠黏膜上皮细胞刷状缘的微绒毛上大量繁殖1.侵袭力霍乱弧菌肠毒素（CE,choleraenterotoxin）A1:活性亚单位21812A2:连接亚单位5000B：结合亚单位MW：80000-90000临床意义(致病因素)2.霍乱肠毒素演示发病机制临床意义霍乱弧菌在小肠黏膜部位的致病机制发病机理临床意义感染途径临床意义感染途径临床意义感染途径临床意义感染途径临床意义感染途径临床意义演示感染途径临床意义霍乱弧菌的致病过程引起的疾病临床意义霍乱弧菌的致病（严重时液体丢失量达500～1000ml/h）临床表现临床意义剧烈上吐下泻，严重脱水、酸中毒、痉挛、尿闭、休克、死亡。临床分期临床意义1.前驱期无明显前驱症状，或轻度腹鸣、腹胀和不适。临床分期临床意义2.吐泻期持续2～3天，因剧烈吐泻造成大量水分和电解质丧失。临床分期临床意义3.脱水虚脱期脱水貌，洗衣工手；循环衰竭、代谢中毒、急性肾衰；水电解质平衡紊乱导致肌肉痉挛。4.恢复期各种症状趋于缓解，但可出现发热霍乱弧菌的革兰染色结果生物学特性(纯培养革兰染色)描述：革兰阴性，弯曲弧形或逗点状，粪便标本中可首尾相接鱼群样平行排列鱼群样排列霍乱弧菌形态（电镜）霍乱弧菌的扫描电镜图（金属镀膜）生物学特性(纯培养扫描电镜)描述：弯曲弧形或逗点状霍乱患者小肠黏膜上皮局部平切电镜图霍乱弧菌扫描电镜图（金属镀膜）生物学特性(电镜)霍乱弧菌的糖原颗粒（*）超薄切片，×105000生物学特性(电镜)霍乱弧菌的运动模式图生物学特性：(米泔水样便)描述：穿梭或流星样动力霍乱弧菌的鞭毛生物学特性(电镜)霍乱弧菌的鞭毛染色生物学特性(特殊染色×10,000)生物学特性(培养特性－－培养条件)需氧或兼性厌氧，营养要求不高最适生长温度37℃最适pH8.2～9.0Max:10.2(耐碱怕酸)Eltor生物型在血平板上可形成β-溶血（有变异）初次分离用pH8.5碱性蛋白胨水，经4～6小时液体表面大量繁殖，形成菌膜。生物学特性(培养特性－－选择鉴别性平板)TCBS（硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板）霍乱弧菌在TCBS琼脂平板上形成发酵蔗糖的较大的黄色菌落生物学特性(培养特性－－选择鉴别性平板)含亚碲酸钾的培养基：4号琼脂庆大霉素琼脂霍乱弧菌在含亚碲酸钾的琼脂平板上将碲离子还原成原子态的碲，形成有灰褐色中心的菌落生物学特性(重要的生化反应)霍乱弧菌副溶血弧菌拟态弧菌······麦氏弧菌氧化酶硝酸盐还原＋＋＋＋＋＋－－生物学特性(重要的生化反应)除霍乱和拟态弧菌外，其余弧菌在不含盐的培养基上不生长霍乱弧菌拟态弧菌副溶血弧菌耐盐试验(%NaCl)0%6%7%10%＋＋－－＋＋－－－＋＋－氧化酶、吲哚、枸橼酸盐利用、明胶实验（＋）赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶（＋）、精氨酸双水解（－）、动力（＋）发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇，乳糖（v）生物学特性（重要的生化反应）生物学特性(生物型的区分：根据生化反应分型)characterClassicalbiotypeE1-torbiotype溶血（羊RBC）-d血凝（鸡RBC）-+V-P试验-+多粘菌素B敏感试验+-第IV组噬菌体裂解试验+-第V组噬菌体裂解试验-+生物学性状(血清型：根据抗原分型)是否与O1抗血清凝集O1群非O1群稻叶型(Inaba)小川型(Ogawa)彦岛型(Hikojima)根据O抗原组成不同ACABABC生物学性状(抵抗力)河水中：20天蔬菜水果上：1周冰内：4天耐碱怕酸：胃酸中存活4分钟pH10.2仍能生长对庆大霉素耐药：用于制作选择性培养基多粘菌素B(50u/ml)：Eltrobiotype耐药，Classicbiotype敏感，可作为分型依据对热、干燥、日光和常用消毒剂敏感，100℃1～2min即可杀死标本的采集微生物学检验患者的米泔水样便、呕吐物、尸检肠内容物或携带有病原菌的海产品和污染的水源等检验方法（1）直接镜检：取标本涂片2张，乙醇或甲醇固定，革兰染色，油镜观察。微生物学检验（2）动力和制动试验：水样便，悬滴（压滴）、高倍镜、暗视野观察动力：穿梭似流星状。同法制备另一标本，加入1滴不含防腐剂的霍乱多价诊断血清（效价1:64）；可见运动活泼的细菌运动停止并发生凝集，为制动试验阳性。（3）玻片凝集：O1和O139抗体（4）分离培养：常用碱性蛋白胨水、选择性平板（TCBS等），菌落特征和蔗糖发酵菌落，进一步鉴定。检验方法l）初步鉴定：与01群和O139群抗血清(多价和单价）凝集试验，菌落和菌体形态、氧化酶试验等作出初步报告。2）最后鉴定：根据纯培养后全面生化反应、血清学分群及分型、生物型。微生物学检验检验方法1.初筛试验(1)霍乱红试验(2)O/129敏感试验(3)黏丝试验（4）耐盐试验微生物学检验2.生物分型试验a.羊红细胞溶血试验b.鸡红细胞凝集试验c.VP试验d.多粘菌素B敏感试验e.第IV和V组霍乱弧菌噬菌体裂解试验3.鉴别试验霍乱弧菌与拟态弧菌鉴别：蔗糖发酵（＋）（－）霍乱弧菌和气单胞菌和邻单胞菌鉴别：黏丝试验（＋）（－）副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus)临床意义人食入污染的海产品发病（食物中毒、急性腹泻）、伤口感染、菌血症。致病因子：TDH、TRH和菌毛生物学特性（形态特征）革兰阴性直或微弯杆菌，极端单鞭毛，无荚膜副溶血弧菌革兰染色生物学特性（培养特征）需氧或兼性厌氧营养要求不高，嗜盐（无盐不生长,最适盐浓度3.5%）最适pH7.7～8.0，最适温度30～37℃TCBS上形成绿色菌落副溶血弧菌在TCBS上菌落生物学特性（培养特征）从腹泻患者中分离到的副溶血弧菌95%以上在我妻培养基（人血培养基）上可产生β-溶血现象，称为神奈川现象（Kanagawaphenomenon,KP）在SS平板上形成扁平，无色半透明，蜡滴状的菌落，不易刮下，有辛辣味。生物学特性（生化特征）氧化酶+蔗糖发酵-葡萄糖发酵+NaCl生长试验0%NaCl-3%NaCl+7%NaCl+10%NaCl-脲酶+/-(临床分离菌株常阳性）标本3.5%NaCl碱性蛋白胨水培养基TCBS分离培养可疑菌落（绿色）纯培养菌种鉴定毒素测定微生物学检验程序鉴定特征革兰阴性弧菌或杆菌，动力（＋）氧化酶（＋），临床分离株脲酶常（＋）TCBS上绿色菌落、氯化钠生长试验神奈川现象(+)各种生化试验TDH和TRH的检测：毒素和基因检测气单胞菌属和邻单胞菌属AeromonasandPlesiomonas分类根据分子遗传学研究：气单胞菌属独立成气单胞菌科邻单胞菌属（仅一个种：类志贺邻单胞菌）并入肠杆菌科临床意义（气单胞菌：肠道致病菌）致病物质溶血毒素细胞毒素所致疾病肠内感染主要表现为腹泻（亲水气单胞菌）肠外感染败血症、伤口及软组织感染（亲水气单胞菌和威隆气单胞菌）临床意义（邻单胞菌属）所致疾病：肠道内感染：胃肠炎（水样泻或痢疾样腹泻）肠道外感染：菌血症等（免疫力低下人群发生）病史：进食生水或海产品气单胞菌属的描述革兰阴性直或球杆菌，大多为极端单鞭毛；生长温度范围广（0～45℃）；氧化酶（＋）、触酶（＋）、硝酸盐还原（＋）、发酵葡萄糖产酸、有的产气、产生多种胞外酶；对O129耐药；主要存在于水生系统（更易生活于盐水和淡水交界处，海洋环境中偶见）。邻单胞菌属的描述革兰阴性杆菌，极端2～5根鞭毛（侧鞭毛）；生长温度范围广（8～45℃）；氧化酶（＋）、触酶（＋）、硝酸盐还原（＋）、发酵葡萄糖产酸不产气；可耐受的NaCl浓度为0～5％；大多数菌株对O129敏感；主要存在于水生系统（淡水和蒸汽水中比海水环境更易存在）。对人致病的弧菌、气单胞菌和邻单胞菌的特征特征霍乱和拟态弧菌其他弧菌气单胞菌邻单胞菌生长0％NaCl+-++6%NaCl++--对O/129敏感性10ug++/--+/-150ug++-+氨苄青霉素+/-+--（10ug)敏感性葡萄糖产气--+/--黏丝试验++--KEYPOINTSThegenusVibrioiscalssifiedinthefamilyVibrionaceae,anditisthetypegenusforthefamily.VibriocholeraisthepathogenofcholeraanditisthemostimportantspeciesinthegenusVibrio.Itisnowdividedintothreemajorsubgroups:V.choleraO1,V.choleraO139,andV.choleranon-O1.Vibrioparahaemolyticuscausesgastroenteritisinhumanfollowingingestionofcontaminatedseafood.KEYPOINTSPresumptiveidentificationofVibriospeciesbasedoncolonialandmicroscopicmorphology,definiteidentificationreliesonformerbiochemicaltestsandserologicalreaction.AeromonasistheonlyfamilywithinAeromonaceaeandispathogenicforhumans.Aeromonassppsneedtobeidentifiedfromotheroxidase-possitivefermenters,suchasVibrioandPlesiomonasspps.