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第13章其他需氧革兰阳性杆菌需氧芽胞杆菌属（Bacillus）48个种与医学有关5个种炭疽芽胞杆菌（B.anthracis）蜡样芽胞杆菌（B.cereus）蕈状芽胞杆菌（B.mycoides）巨大芽胞杆菌（B.megaterium）苏云金芽胞杆菌（B.thuringiensis）第一节炭疽芽胞杆菌（Bacillusanthracis)一、临床意义•炭疽是人畜共患的急性传染病•主要是牛、羊等食草类动物的传染病•人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染•“生物恐怖”致病物质•荚膜–抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散•炭疽毒素–保护性抗原、致死因子、水肿因子–损害微血管的内皮细胞，增强血管壁通透性，是发病和死亡的主要致病因素所致疾病•炭疽病：–传染源：患病食草动物及其制品或被污染物–传播途径：接触——皮肤炭疽食入——肠炭疽吸入——肺炭疽•可并发败血症，炭疽性脑膜炎等•乙类传染病•发生肺炭疽按甲类处理病后可获得持久免疫力（一）炭疽芽胞杆菌基本特性•形态结构:致病菌中最大的G+杆菌，两端平切、竹节状有毒株可有明显荚膜二、微生物学检验炭疽芽胞杆菌亚甲蓝染色×1000革兰染色×1000•芽胞——卵圆形，小于菌体，位于菌体中央•多在有氧条件下形成，25～30℃，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞•在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸体严禁解剖•抗原成分：•菌体多糖抗原：--与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应（Ascoli热沉淀反应）--特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、14型肺炎链球菌、人A血型抗原发生交叉反应•荚膜多肽抗原：--与毒力有关，有抗吞噬作用，有利于细菌生长和扩散--荚膜肿胀试验，对本菌鉴定有意义•芽胞抗原：有免疫原性和血清学诊断价值•炭疽毒素：--保护性抗原（PA)、致死因子（LF）、水肿因子（EF）三个组分--单独皆无致病性，与PA结合才显示出致病性--具有抗吞噬和免疫原性•培养特性：•需氧或兼性厌氧，生长条件不严格，最适温度30～35℃•普通琼脂平板—扁平、粗糙、不透明、灰白色、无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边缘呈卷发状•BAP：12～15h不溶血，24h后轻微溶血•其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落•肉汤—絮状沉淀生长•明胶—35℃18～24h表面液化成漏斗状•NaHCO3血清琼脂平板：--有毒株--M型菌落，挑取时呈黏丝状（鉴别要点）--无毒株--R型菌落•生化反应•分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等•还原硝酸盐•不产生吲哚和硫化氢、不利用枸橼酸盐、不分解尿素•在牛乳中生长2～4天牛乳凝固→缓慢胨化•触酶（+）、卵磷脂酶弱（+）•抵抗力--芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热140℃3h才能杀灭--在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数十年--芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化剂较敏感，常用以下方法杀菌：1：2500碘10min、3%H2O21h、4%高锰酸钾15min、0.5%过氧乙酸10min--对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、氯霉素和环丙沙星均敏感•要求快速检出、分离鉴定病原菌，以利早期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防对策（二）临床检验程序标本的采集与处理•皮肤炭疽：病灶深部标本•肺炭疽：痰和血液•肠炭疽：粪、呕吐物•脑膜炭疽：CSF、血液•死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局限性病灶可取病变组织或附近淋巴结•无杂菌污染标本：直接接种肉汤增菌或固体培养基•污染杂菌固体标本：加10倍量生理盐水充分浸泡，振荡10～15min、静置10min→取悬液65℃水浴30min或85℃5min杀死杂菌，保留芽胞活性→增菌和分离培养•污染杂菌液体标本：离心→弃上清液后→加0.5%洗涤剂振荡10～15min→离心取沉淀物增菌和分离培养生化反应噬菌体裂解青霉素抑制毒力试验检验流程皮毛、腐败脏器等血液Ascoli试验以NG制成悬液经加温或饱和尿素处理肉汤增菌培养BAP或戊烷脒平板2%兔血清肉汤4～8hG染色镜检菌落特征动力观察串珠试验确定报告荚膜肿胀试验痰、呕吐物、CSF及炎症分泌物2%兔血清肉汤快速增菌35℃4h荚膜肿胀试验直接涂片荚膜染色G染色初步报告0.2ml注射小白鼠腹腔，8h后解剖涂片G染色、荚膜染色初步报告分离培养、鉴定确定报告标本直接检查•直接显微镜检查：G染色、荚膜染色、芽胞染色—初步报告•荚膜荧光抗体染色•核酸检测：核酸杂交分离培养--BAP、戊烷脒多黏菌素B平板--2%兔血清肉汤增菌→分离培养鉴定试验•形态和菌落特征•生化试验：见教材表13-1•噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体•串珠试验:--接种于含青霉素(0.05～0.5U/ml)的肉汤中，35℃6h，大而均匀成串的圆球状菌体--与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关--类炭疽杆菌无此现象•青霉素抑制试验：接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，35℃24h生长受抑制不生长•串珠和青霉素抑制联合试验：兔血清琼脂平板抑菌环青霉素纸片•NaHCO3生长毒力试验：接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板，10%CO2、35℃、24～48h有毒株—M型菌落无毒株—R型菌落•动物试验：小鼠、家兔或豚鼠皮下接种•荚膜肿胀试验•植物凝集试验•Ascoli热沉淀反应：可作追溯性诊断第二节蜡样芽胞杆菌(Bacilluscereus)一、临床意义•食物中毒含菌量达105/g以上呕吐型——耐热肠毒素腹泻型——不耐热肠毒素•全眼球炎（外伤后）•心内膜炎、败血症和脑膜炎等•夏、秋季多见•食物有米饭、乳品、禽畜肉类、果汁饮料等，大多为加热烹调过的熟食•在米饭中极易繁殖，由米饭受污染引起的食物中毒在国内、外均为常见•中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意（一）蜡样芽胞杆菌基本特性形态结构：-G+大杆菌、两端钝圆-多数呈链状排列-芽胞椭圆形、位于菌体中心或次末端、不大于菌体-引起食物中毒的菌株多有周鞭毛、无荚膜二、微生物学检验培养特性：•需氧或兼性厌氧•营养要求不高，最适温度35℃•普通琼脂平板：菌落较大，灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或白蜡状•血琼脂平板—有β溶血环•卵黄平板：生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应生化反应：•能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨苷等•能胨化牛乳，液化明胶，VP（+）•触酶（+）、卵磷脂酶（+）•多次传代后生化特性常可改变抵抗力：•食物中毒菌株的游离芽胞耐受100℃30min、干热120℃60min才能杀死•对氯霉素、红霉素、庆大霉素S，对青霉素、磺胺、呋喃类R(二）临床检验程序•标本采集：可疑食物、粪便、呕吐物，因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌确诊由该菌引起的食物中毒必须：•从食物中分离出菌数＞105/g，提示本菌活跃生长，构成潜在危险•从可疑食物分离到的菌株与从患者粪便和(或)呕吐物中分离到的菌株属同一血清型检验流程呕吐物、残留食物等活菌计数接种普通琼脂平板、BAP、卵黄平板35℃18～24h纯培养动物试验（肠毒素测定）生化反应血清凝集（分型）报告结果直接涂片染色镜检检验方法：•标本直接检查•分离培养与活菌计数：普通琼脂平板、BAP、卵黄平板•鉴定与分型：根据菌落特点、形态染色、生化反应等初步鉴定生化分型、血清学分型、噬菌体分型，肠毒素检测第三节产单核细胞李斯特菌和红斑丹毒丝菌一、产单核细胞李斯特菌（Listeriamonocytogenes)隶属于李斯特菌属（一）临床意义•广泛分布于自然界，水、土壤、人和动物粪便中均可存在•常伴随EB病毒引起传染性单核细胞增多症，也可引起脑膜炎，菌血症等•污染奶制品等引起食物中毒（二）微生物学检验1.产单核细胞李斯特菌基本特性•形态结构G+短小杆菌，直或微弯，常呈V形成双排列。在20～25℃形成周鞭毛，37℃时鞭毛很少或无；无芽胞；在含血清的葡萄糖蛋白胨水中能形成黏多糖荚膜•抗原成分•根据O抗原和H抗原，分4个血清型，1、3、4型可分若干亚型•抗原结构与毒力无关•与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌等有共同抗原•培养特性•兼性厌氧菌、3～45℃均能生长（4℃冷增菌），最适30～37℃•营养要求不高，在含血液、血清、腹水的培养基生长更好•BAP—形成较小、圆形、光滑而有狭窄β溶血环的菌落•接种半固体培养基，置室温孵育可出现倒伞形生长•生化反应：•触酶阳性•分解葡萄糖、麦芽糖、鼠李糖、水杨苷•不分解甘露醇、木糖、蔗糖•能水解七叶苷，甲基红和V-P试验阳性•不形成吲哚，不分解尿素，不还原硝酸盐•抵抗力：•耐盐、耐碱、不耐酸•对热、常用消毒剂敏感•首选氨苄青霉素，青霉素、链霉素、红霉素等也敏感•对杆菌肽、多黏菌素耐药2.临床检验程序•标本采集：血液、脑脊液、呕吐物、粪便、分泌物等•标本直接检查：--在CSF标本中成对排列，形如球菌，易误认为肺炎链球菌--有时与类白喉杆菌也极易混淆•分离培养：杂菌污染标本接种20%NaCl心脑浸液肉汤2支1支—10%CO2，37℃24～48h→分离培养（BAP、萘啶酸选择性平板）1支—4℃“冷增菌”→分离培养（每24h1次，共4次，以后每周一次，至少4周）•鉴定：•形态特征、菌落特点、动力及生化反应作出鉴定•可疑菌落用已知李斯特菌1型、4型或多价抗血清做玻片凝集试验进行鉴定•与其他G+菌鉴别二、红斑丹毒丝菌（Erysipelothrixrhusiopathiae）本菌隶属于丹毒丝菌属（一）临床意义•本菌引起红斑丹毒丝菌病，为一种急性传染病，主要发生在鱼类、家畜、家禽和兔类•人类主要因接触带菌动物或其产品经皮肤损伤感染而引起类丹毒。也可引起败血症或心内膜炎（二）微生物学检验1.红斑丹毒丝菌基本特性•形态结构：G+细长杆菌，单个存在或形成短链，粗糙型菌落涂片可呈长丝状，且有分支及断裂，与放线菌的形态相近无芽胞、无鞭毛、无荚膜•培养特性：厌氧或微需氧、初次分离需在厌氧环境，传代后有氧环境也能生长，最适温度30~35℃•BAP：35℃24h可形成两种菌落光滑型菌落：细小、圆形、凸起有光泽，毒力较强粗糙型菌落：较大，颗粒状、扁平、边缘不齐•在半固体表面下数mm处发育最好，常呈带状•亚碲酸钾BAP——黑色菌落•生化反应：–触酶阴性–分解葡萄糖、乳糖、阿拉伯糖–TSI中产生H2S（该菌突出的特点）2.临床检验程序•标本采集：病灶局部脓液或渗出液、血液•标本直接检查•分离培养：1%葡萄糖肉汤血琼脂平板•鉴定要点：G+细长杆菌BAP上呈细小光滑型菌落或较大粗颗粒型菌落无动力，触酶（-），分解葡萄糖和阿拉伯糖，胆汁七叶苷（-），在TSI中产H2S与产单核细胞李斯特菌鉴别（教材表13-2）第四节阴道加特纳菌（Gardnerellavaginalis，GV）属于加特纳菌属此菌属只有本菌一个种一、临床意义•与细菌性阴道病（BV）有关•BV可导致妇产科多种炎症•引起新生儿败血症和软组织感染二、微生物学检验（一）阴道加特纳菌基本特性•形态结构--G染色视菌株和菌龄不同而异，实验室保存菌株趋向G-，新鲜临床标本中分离的菌株趋向G+，生长在高浓度血清中呈G+--具有多形性，无芽胞、无荚膜、无鞭毛•培养特性兼性厌氧，营养要求较高，在含5%人血琼脂平板上3%～5%CO2环境35℃培养48h，可形成针尖大小、圆形、光滑不透明的菌落，在人血和兔血平板上可出现β溶血，在羊血平板上不溶血。•生化反应氧化酶（-）、触酶（-）发酵葡萄糖、麦芽糖水解马尿酸和淀粉不分解甘露醇，不液化明胶，吲哚（-）（二）临床检验程序•标本采集：阴道和宫颈分泌物等•直接湿片镜检：大量阴道上皮细胞，少量脓细胞及无数成簇的细小杆菌群集或吸附于上皮细胞表面，使细胞边缘晦暗，呈锯齿形，即为线索细胞•涂片染色镜检：观察线索细胞，了解阴道菌群状况，常见大量小的G-和染色不定的杆菌和球杆菌，而无大的G+杆菌（乳酸杆菌）•pH测定：pH＞4.5，提示细菌性