直接Coombs试验

直接Coombs试验Coombs试验概述直接Coombs试验原理及方法直接Coombs试验临床意义一.Coombs试验概述•1945年，英国免疫学家Coombs等人发明的一种能检测红细胞表面抗体的新试验，故称之Coombs试验，亦称抗人球蛋白试验。•抗人球蛋白试验是抗人球蛋白参与的一种间接血凝试验，利用抗人球蛋白抗体作为第二抗体起到桥梁的作用，连接与红细胞表面抗原结合的不完全抗体，使红细胞凝集。•不完全抗体能够与相应的抗原牢固结合,但因其分子量较小,体积小,不能起到桥联作用,在一般条件下不出现可见反应。•Coombs试验用于检测不完全抗体直接Coombs试验：检查红细胞上有无不完全抗体。间接Coombs试验：检查血清中有无游离的不完全抗体。二.直接Coombs试验（一）直接Coombs试验基本原理若红细胞在体内被不完全抗体吸附，由于不完全抗体分子量小，体积小，不能起到桥联作用，仅使红细胞处于致敏状态，在一般条件下不出现可见反应。加入抗球蛋白试剂，与红细胞上吸咐的不完全抗体结合，在致敏红细胞之间搭桥，出现肉眼可见的凝集。待检红细胞不完全抗体抗人球蛋白直接coombs试验原理示意图（二）直接Coombs试验方法1.洗涤红细胞：取50μL受检者全血，以0.9%生理盐水洗涤3次（1500r/min离心1min）；2.配制3%-5%红细胞盐水悬液；3.编号：分别取三个试管，标记为IgG、C3d、IgG/C3d；4.三管中分别加入50μL3%-5%红细胞盐水悬液，加入两滴相应的抗人球蛋白试剂（抗IgG、C3d、IgG/C3d）；5.轻轻混匀后3000r/min离心15s，轻轻摇动试管，观察结果。（三）直接Coombs试验结果判读阳性结果-出现红细胞凝集，表示红细胞上有相应抗体存在；阴性反应-红细胞不凝集，表示红细胞上没有相应抗体存在。（四）注意事项1.标本采集后应立即进行试验，延迟试验可使抗体从细胞上丢失；2.受检红细胞一定要洗涤充分，否则红细胞悬液中混杂的血清蛋白会中和抗人球蛋白；3.直接抗人球蛋白试验在初读结果后，放在室温中5-10分钟，再次离心观察。这样孵育之后，若红细胞被C3d致敏时，重新离心观察结果可使阴性结果转变为阳性结果，而IgG致敏的红细胞在孵育后反应更弱。三.直接Coombs试验临床意义•自身免疫性溶血性贫血•新生儿溶血症•溶血性输血反应•药物诱发的免疫性溶血性贫血