细胞工程复习题

（2012新课标卷）40、[生物—选修3现代生物科技专题]（15分）根据基因工程的有关知识，回答下列问题：（1）限制性内切酶切割ＤＮＡ分子后产生的片段，其末端类型有和。黏性末端平末端（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是。切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即DNA连接酶和DNA连接酶。E.ColiT4（5）基因工程中除质粒外，和也可作为运载体。（4）反转录作用的模板是，产物是。若要在体外获得大量反转录产物，常采用技术。（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是mRNA（或RNA）cDNA（或DNA）噬菌体未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱PCR动植物病毒等4、【生物－现代生物技术专题】为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。（1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的处，DNA连接酶作用于处。（填“a”或“b”）（2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和法。（3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用____技术。该技术的核心是。（4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的作探针进行分子杂交检测，又要用方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。基因枪法（花粉管通道法）植物组织培养去分化和再分化耐盐基因一定浓度盐水浇灌（移栽到盐碱地中）复习课细胞工程复习课所采用技术的理论基础植物细胞工程通常采用的技术手段植物组织培养植物体细胞杂交植物细胞的全能性一、植物细胞工程(离体的植物器官、组织或细胞)脱分化避光再分化光照愈伤组织根、芽（胚状体）植物体培养条件：离体、含有全部营养成分的培养基、激素、一定的温度、空气、无菌环境、适合的PH、适合的光照等外植体举例：花药离体培养；基因工程培育的抗虫棉植株；细胞工程培育的“番茄-马铃薯”杂种植株等。1、植物组织培养2、植物体细胞杂交技术(1).概念:将不同种的植物_______,在一定条件下融合成_________,并把杂种细胞培育成___________的技术。体细胞杂种细胞新的植物体（2）意义：。细胞壁原生质体融合细胞壁脱分化愈伤组织再分化体细胞融合组织培养使用什么去除？纤维素酶和果胶酶物理法:离心、振动、电激;化学法:聚乙二醇(PEG)思考：原生质体融合的原理是什么？提示：膜的流动性。克服了不同种植物远缘杂交的障碍。原理是？细胞膜的流动性原理是植物细胞的全能性1.植物体细胞杂交后的遗传物质分析(1)遗传特性：杂种植株中含有两种植物的遗传物质，故杂种植株具备两种植物的遗传特性。(2)染色体组数①染色体组数＝两种植物体细胞内染色体组数之和。②植物体细胞杂交形成的杂种植株，有几个染色体组就称为几倍体。诱导染色体加倍无性繁殖1乙多明显缩短育种年限aBAb愈伤组织2aB和Ab1.下图为植物体细胞杂交过程示意图，据图回答：⑴步骤①是去掉，最常用的方法是用酶去除，使植物细胞成为。⑵步骤②一般常用的化学试剂是，目的是。⑶在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中，运用的技术手段是，其中步骤④相当于，步骤⑤相当于。细胞壁纤维素酶和果胶酶原生质体聚乙二醇诱导原生质体融合植物组织培养脱分化再分化⑷植物体细胞杂交的目的是获得新的杂种植株，使两株植物的性状能够在新的植物体上有所表现，其根本原因是。⑸从理论上讲，杂种植株的育性为。若运用传统有性杂交方法能否实现？因此，这项研究对于培养作物新品种方面的重大意义在于。⑹利用植物体细胞杂交的方法培育作物新品种的过程中，遗传物质的传递是否遵循孟德尔的遗传规律？为什么？杂种细胞具有两个亲本的遗传物质可育不能克服远缘杂交不亲和的障碍不遵循，植物体细胞杂交属于无性生殖。(1)③过程是，实际融合的过程中原生质体可能会形成种细胞团(只考虑两个细胞融合的情况)。与④过程密切相关的细胞器是。3高尔基体和线粒体课堂练习原生质体融合2、据图回答问题(2)若番茄细胞内含A条染色体，马铃薯细胞内含B条染色体，若将番茄和马铃薯采用有性杂交的育种方法培育(假设能成功)，得到的后代应含条染色体，若采用体细胞杂交技术所得植株含条染色体，(3)若番茄是二倍体，马铃薯是四倍体，则杂种植株为倍体。习题(A+B)/2A+B六二、动物细胞工程植物细胞工程常用的技术手段：植物组织培养、植物体细胞杂交等强调：是其他动物细胞工程技术的基础。动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合单克隆抗体制备等动物细胞培养技术回顾：常用的技术手段：2、过程：取什么样的组织？如何将组织分散成单个细胞？什么叫原代培养？什么叫传代细胞培养？如何进行传代培养？什么是细胞贴壁现象？什么是细胞接触抑制取幼龄组织或器官如：肾脏肌肉用胰蛋白酶处理加入细胞培养液细胞贴壁：培养过程中，细胞贴附在瓶壁上的现象。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒细胞接触抑制细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。原代培养：动物组织消化后的初次培养用胰蛋白酶分散成单个细胞传代培养：重新用胰蛋白酶处理，再分瓶后继续培养，让细胞继续增值如何制成细胞悬液细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养细胞株细胞系如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？多数组织细胞必须在固定的表面上生长和分裂即贴壁生长随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖即接触抑制遗传物质改变遗传物质没有改变动物细胞工程快速复习题1.动物细胞工程的基础是什么？2.动物细胞培养的基本原理是什么？3.动物细胞培养液的主要成分是什么？4.进行动物细胞培养的材料一般有何特点？动物细胞培养技术离体的细胞在适宜的条件下可以增殖（细胞增殖）通常含有葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清等。一般取胚胎组织或幼龄动物的组织做动物细胞培养。因为胚胎组织或幼龄动物的组织的细胞生命力旺盛，分裂能力强。12.哪些细胞会失去接触抑制？13.在体外培养动物细胞需要什么物质和环境条件？肿瘤细胞无菌无毒环境、充足营养（血清或血浆）、适宜温度、PH、气体环境（O2和CO2，C02的主要作用是维持培养液的PH）。1、概念：动物细胞核移植和克隆动物将一个动物的细胞核，移入另一个去核的卵母细胞中，使其重组发育成一个胚胎，最终发育成动物个体。结果：原理：分类：克隆动物(用核移植方法得到的动物)动物细胞核的全能性胚胎细胞核移植、体细胞核移植2、动物体细胞核移植的过程供体细胞（供核）细胞培养体细胞卵母细胞（减Ⅱ中期：供质）去核无核卵母细胞核移植重组细胞早期胚胎胚胎移植代孕母体新个体分娩激活重组细胞培养至10代以内显微操作去核法3、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自______________________。（2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是，然后用酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是。动物胚胎或幼龄动物剪碎胰蛋白使细胞与培养液充分接触，便于培养（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基特有成分为________________。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第___代，到这时的培养称为__。（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用处理，然后配置成，再分装。此时的培养为___动物血清10原代培养胰蛋白酶细胞悬液传代培养动物细胞核移植技术和克隆动物•动物细胞核移植：是将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）分类：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易细胞分化程度高，恢复全能性困难1.2动物细胞融合过程为什么灭活的病毒能作诱导剂？灭活丧失感染性保留融合活性比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用途植物体细胞杂交细胞膜的流动性纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动、聚乙二醇克服远源杂交不亲和，获得杂种植株动物细胞融合细胞膜的流动性用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外，还有灭活病毒获得杂种细胞、制备单克隆抗体1.4比较动、植物细胞杂交技术抗体的传统生产方法抗原反复注射动物从动物的血清中分离抗体该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。单克隆抗体！读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。2.1单克隆抗体的概念•单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验①为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？②会有几种融合方式？③杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？④是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？⑤如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？BB、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活获得产生相应抗体的B细胞（二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞√体外培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。单克隆抗体筛选杂交细胞杂交瘤细胞体外或体内细胞培养筛选骨髓瘤细胞诱导细胞融合特异性杂交瘤细胞杂交瘤细胞系提取经过免疫的B淋巴细胞动物细胞融合技术动物细胞培养技术单克隆抗体的制备过程：特点：既能产生专一抗体又能大量繁殖特点：特异性强灵敏度高可大量制备注射抗原免疫单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？2.3单克隆抗体的应用诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物单抗导向，药物为弹头治疗疾病和运载药物主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。例．(06江苏)下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。（1）_______________技术是单克隆抗体技术的基础。（2）根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于________培养基。（3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是________________。（4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用________________。（5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_______________特点，又具备淋巴细胞的_______________特点。（6）淋巴细胞是由动物体_________中的______________细胞分化、发育而来。（7）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是____________。动物细胞培养选择特异性强,灵敏度高灭活的病毒在体外大量增殖分泌特异性抗体骨髓造血干细胞主动运输1975年Kohler和Milstein的单克隆抗体技术在生产和使用抗体方面开创了新纪元，图10示单克隆抗体制备流程阶段示意图。请据图回答下列问题：（1）该技术是在动物细胞培养技术和技术的基础上发展起来的。（2）图10中细胞A体外培养不具有分裂能力，但能分泌，细胞B体外培养能够。（3）动物细胞融合常用的方法是。图10动物细胞融合分泌特异性抗体无限增殖PEG（灭活的病毒、电激）图10（4）细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，要筛选出细胞