许明哲---分析方法验证、转移和确认

中国食品药品检定研究院NationalInstitutesforFoodandDrugControl分析方法验证、转移和确认许明哲中国食品药品检定研究院2013年7月19日烟台NationalInstitutesforFoodandDrugControl检验结果的主要质量要素分析仪器分析方法系统适用性试验质控样品AnalyticalinstrumentqualificationSystemsuitabilitytestsAnalyticalmethodvalidationQualitycontrolchecksamplesNationalInstitutesforFoodandDrugControl基本概念•方法验证（methodvalidation）•方法转移（methodtransfer）•方法确认（methodverification）NationalInstitutesforFoodandDrugControl现状目前存在的问题：•概念不清•无章可依1）ICHQ2A和Q2B的方法主要是对生产企业在产品分析方法研发的时候进行的全面验证2）各国药典收载的分析方法验证内容和目的基本与ICH指导原则一致NationalInstitutesforFoodandDrugControl一个进口复核检验的实例•他克莫司（Tacrolimus），也称普乐可复，代号FK506，是一种高效低毒的新型免疫抑制剂。1984年日本藤泽药品有限公司（FujisawaHealthcare,Inc.）首次从土壤“筑波链霉菌”的肉汤发酵物中提取出FK506，其化学结构属23元环大环内酯类抗生素，类似于红霉素。该药1989年开始用于临床，1995年经美国FDA批准后开始使用。NationalInstitutesforFoodandDrugControl一个进口复核检验的实例NationalInstitutesforFoodandDrugControl实例分析他克莫司软膏剂含量测定（进口药品质量标准复核工作）品种名称他克莫司软膏剂规格0.1%和0.03%1g的软膏相当于1mg和0.3mg主成分检验目的进口质量标准复核样品基质石蜡、凡士林、羊毛脂、矿物油样品总量30g/管NationalInstitutesforFoodandDrugControl实例分析他克莫司软膏剂含量测定供试品溶液制备：样品内容物,移至广口玻璃瓶(预先冲洗)混匀准确称取1g软膏,置50ml量瓶+12ml四氢呋喃水浴△至60℃慢搅至软膏溶解精密+4.0ml水混旋液小心振摇冰浴10min剧烈振摇30s室温静置4h滤膜孔径≤0.5m弃去初滤液收集滤液供试品溶液(48h内稳定)取出,平衡至室温精密+4.0ml无水乙醇过滤相当于1mg他克莫司(0.1%软膏)和0.3mg他克莫司(0.03%软膏)NationalInstitutesforFoodandDrugControlNationalInstitutesforFoodandDrugControl专属性•异构体2与与他克莫司主峰分离度分离度大于2，人工降解溶液•他克莫司主峰峰纯度检查根据他克莫司样品溶液的HPLC光谱图，他克莫司主峰的纯度角为0.412，比纯度阈值（2.048）小，可见他克莫司主峰是纯的NationalInstitutesforFoodandDrugControl准确度采用测定绝对回收率的方法判断其准确度。向空白软膏基质中加入已知量的他克莫司对照品，按照含量测定方法进行回收率测定。每个规格分别测定相当于标示浓度的80％，100％和120％共三个浓度的回收率，每个浓度平行3份。NationalInstitutesforFoodandDrugControl他克莫司软膏剂含量测定供试品溶液制备：样品内容物,移至广口玻璃瓶(预先冲洗)混匀准确称取1g软膏,置50ml量瓶+12ml四氢呋喃水浴△至60℃慢搅至软膏溶解精密+4.0ml水混旋液小心振摇冰浴10min剧烈振摇30s室温静置4h滤膜孔径≤0.5m弃去初滤液收集滤液供试品溶液(48h内稳定)取出,平衡至室温精密+4.0ml无水乙醇过滤相当于1mg他克莫司(0.1%软膏)和0.3mg他克莫司(0.03%软膏)NationalInstitutesforFoodandDrugControl规格加入对照品的量n回收率%平均回收率％RSD％0.03％801100.4100.60.42101.13100.3100198.9100.21.6299.73101.9120197.098.72.3297.83101.3NationalInstitutesforFoodandDrugControl精密度•重复性和中间精密度（日间）的考察。在一天之内，分别连续进行6次含量测定，6次结果之间的RSD分别为0.94％(n=6)。中间精密度的考察是连续3天测定含量，每天平行测定3份。3天之间测定结果的RSD为1.3%(n=9)NationalInstitutesforFoodandDrugControl线性•对两种规格的软膏分别考察了浓度范围为其含量测定浓度的50％－150％之间的线性关系，其中，规格为30g，0.03％/支的线性方程为：y=6995488x-64.2,r=0.9999，浓度范围为：0.0075－0.225mg/ml；规格为30g，0.1％/支的线性方程为：y=6989786x+105.4,r=0.9999，浓度范围为：0.025－0.075mg/ml。NationalInstitutesforFoodandDrugControl溶液的稳定性0.00E+001.00E+052.00E+053.00E+054.00E+055.00E+056.00E+050123461224486072时间（hr）峰面积（AU）NationalInstitutesforFoodandDrugControl进口复核（方法转移）他克莫司软膏剂含量测定供试品溶液制备：样品内容物,移至广口玻璃瓶(预先冲洗)混匀准确称取1g软膏,置50ml量瓶+12ml四氢呋喃水浴△至60℃慢搅至软膏溶解精密+4.0ml水混旋液小心振摇冰浴10min剧烈振摇30s室温静置4h滤膜孔径≤0.5m弃去初滤液收集滤液供试品溶液(48h内稳定)取出,平衡至室温精密+4.0ml无水乙醇过滤相当于1mg他克莫司(0.1%软膏)和0.3mg他克莫司(0.03%软膏)NationalInstitutesforFoodandDrugControl进口复核（方法转移）•软膏样品的称量•四氢呋喃水浴溶解•申报材料的文字翻译（色谱柱）•正丁基氯的挥发性•流动性低温不稳定，分层•重现性NationalInstitutesforFoodandDrugControl方法转移规格批号NIFDC含量％企业含量％0.03％12711103.1103.113041102.4101.313131102.1102.90.1％12741100.1101.112761100.899.31277199.299.7NationalInstitutesforFoodandDrugControl方法验证适用范围•新分析方法的建立全面的验证：专属性、准确度、精密度、线性、检测线、耐用性……•认为有问题需要重新进行验证的方法。•主要是药品生产企业的研发部门建立新分析方法时使用。NationalInstitutesforFoodandDrugControl方法转移适用范围•进口药品质量标准复核•企业内部分析方法由研发部门转移到质控部门•企业位于不同地点的生产工厂之间的方法转移•企业委托检验（A企业委托B公司检验）•方法转移最常用的方法是比对•目前没有一个正式的关于方法转移的文件，USP1226“药典分析方法确认”NationalInstitutesforFoodandDrugControl方法确认适用范围•药典各论中收载的分析方法一般不需要再进行验证。•需要进行方法确认。•方法确认的内容和具体方法有关，根据试验人员对方法的理解和经验由试验人员自己确定。NationalInstitutesforFoodandDrugControl小结方法建立者(企业研发部门)方法验证药典分析方法（药检所）方法转移建立者和使用者之间进口药品质量标准复核工作方法确认NationalInstitutesforFoodandDrugControl方法验证•证明分析方法适用于期望用途的过程，该过程必须有文件记录。Thedocumentedprocessbywhichananalyticalprocedure(ormethod)isdemonstratedtobesuitableforitsintendeduse.NationalInstitutesforFoodandDrugControl方法转移•当经过验证的分析方法在实验室之间转移时，方法接收实验室应该证明其能够成功的操作此方法。Whenvalidatedmethodaretransferredbetweenlaboratoriesthereceivinglaboratoryshoulddemonstratethatitcansuccessfullyperformedthemethod.(USP1226)NationalInstitutesforFoodandDrugControl方法确认（WHO定义）•证明一个药典方法或者经过验证的方法适用于本次检验的过程。Processbywhichapharmacopeialmethodorvalidatedanalyticalprocedureisdemonstratedtobesuitablefortheanalysistobeperformed.(WHO定义)NationalInstitutesforFoodandDrugControl方法确认（USP定义）•方法使用者应该具有足够的经验知识以及相关培训，对药典方法有充分的了解并且能够按照方法进行操作。Usersshouldhavetheappropriateexperience,knowledge,andtrainingtounderstandandbeabletoperformthecompendialproceduresaswritten.NationalInstitutesforFoodandDrugControl方法确认（USP定义）•使用者应该对药典方法进行确认，以保证方法操作正确无误。Verificationshouldbeconductedbytheusersuchthattheresultswillprovideconfidencethatthecompendialprocedurewillperformsuitableasintended.NationalInstitutesforFoodandDrugControl分析仪器相关软件/计算机的管理•与分析仪器相连计算机应设置使用者本人密码•软件使用应建立用户名制度•HPLC的序列进样程序应保存并打印•电子表格等计算软件需要进行验证NationalInstitutesforFoodandDrugControlNationalInstitutesforFoodandDrugControl94.0)]12.1([3/)]08.1([6)71.0()41.1(22InInInInCpmNationalInstitutesforFoodandDrugControl问题？