LC-15C高效液相色谱仪操作及维护保养规程

Lc-15C高效液相色谱仪操作及维护保养规程目的:建立LC-15C型高效液相色谱仪操作及维护保养规程,严格按规程操作,及时对高效液相色谱仪进行维护保养。范围:适用于LC-15C型高效液相色谱仪的操作及维护保养。职责:QC检验员负责实施本规程,QC负责人监督执行。内容:1.工作原理高效液相色谱是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,经进样阀注入供试品,由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由积分仪记录，得到的信号-时间曲线。2.系统适用性按各品种项下要求对仪器进行适用性试验,包括以下要求：色谱柱的理论板数（N）：理论板数应高于各品种项下规定的最小理论板数，若理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数,应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等）使理论板数达到要求。分离度和拖尾因子：除另有规定外,分离度应大于1.5T应在0.95～1.05之间。3.仪器组成本系统由LC-15ATvp溶剂输送泵、手动进样阀7725i、SPD-15Avp紫外检测器、Lcsolution工作站、电脑和柱温箱等组成。.4.准备4.1根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（箭头依次朝上）。4.2检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。4.3准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，用吸气减压装置脱气。4.4按标准操作规程配制样品和对照溶液，用合适的0.45m滤膜过滤。5.开机接通电源，依次开启泵，检测器（在进样前30min打开）、Lcsolution工作站。5.1LC-15C泵操作5.1.1逆时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀；5.1.2按泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min(可设定)的流速冲洗，5min（可设定）后自动停止；5.1.3将排液阀顺时针旋转到底,关闭排液阀。如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。5.2SPD-15A检测器参数设定5.2.1检测器显示屏显示λ（NM）abs(AV)range(AUFS)1amp2540.0000.001D“λ（NM）”项为波长，“abs(AV)”项为吸光度，“range(AUFS)”项表示量程，“1amp”项表示氘灯。5.2.2泵显示屏显示如下：FLOW/PRESSPRESSUREP.MAXP.MIN0.000000“FLOW/PRESS”项为流速，“PRESSURE”项表示压力，“P.MAX”项为最大压力，“P.MIN”项表示最小保护压力，。5.2.3按[pump]启动泵，待压力稳定后，可开始分析测定工作。5.2.4观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按5.1.1操作。5.2.5观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。5.3启动【LC实时分析】5.3.1打开电脑主机电源，确保分析仪器的所有单元（泵、柱温箱和检测器）都已连至系统控制器。5.3.2打开每一个单元的电源，并确保所有单元都没有显示任何错误信息。双击Lcsolution15C色谱在线色谱工作站，启动Lcsolution色谱在线色谱工作站单击仪器的分析，显示【LC实时分析】窗口。5.3.3检查分析仪器，单击助手栏中的（系统检查）图标，设置要检查的项、设置输出格式，设置每一项并单击运行，请确保没有任何仪器故障，并在【LC实时分析】窗口的状态栏显示区域中显示为就绪。5.4建立新方法文件5.4.1点击LC实时分析左上角助手栏文件项，选择文件项里的新建方法文件，在【仪器参数视图】中设置在分析中要使用的仪器参数，【仪器参数视图】分为[正常]和[高级].单击[正常]显示一个标签,可以在其中输入分析条件,比如测量时间,泵流速,检测器波长,洗脱模式等,确保为每一个检测器设置[LC停止时间]和[结束时间]并应用到所有采集时间.5.4.2泵的洗脱分为等浓度和二元高压梯度洗脱,如方法使用到二元高压梯度洗脱,则点击[LC时间程序]在LC时间程序里设定对应的梯度和时间.5.4.3在【仪器参数视图】中设置好所有仪器参数后,单击[下载]将设置传输到仪器,并且仪器将按照新的参数开始运行;点击LC实时分析左上角助手栏文件项,选择文件项的另存方法,将方法保存在易于找到的文件夹中。5.5执行单次分析5.5.1进入【LC实时分析】窗口后，确保显示[就绪]，且[色谱图视图]中的基线稳定后，单击[LC实时分析]窗口助手栏上的单次运行图标，出现【单次运行】屏幕，设置指定用于分析的方法文件，输入创建数据文件的名称，输入完毕后点击确定。然后将进样阀手柄置“LOAD”处，进样，将进样阀手柄转到“INJECT”位置，工作站自动采集数据，状态栏显示{正在运行}。5.6数据分析5.6.1双击Lcsolution在线色谱工作站，启动再解析，在助手栏中选择[LC数据分析],在助手栏中选择相对应的文件序号进行数据处理分析。6.关机选关闭泵然后选主窗口右上角关闭框退出色谱工作站。用鼠标单击开始选关闭系统，选择关闭计算机，单击是。关闭检测器电源，用纯甲醇充分清洗泵和色谱柱，待压力降到正常水平关闭泵电源。7.维护保养7.1紫外检测器应在进样前30min打开，样品分析完毕立即关闭。7.2检测时方法用到高度梯度洗脱时，要先单次运行一次。待基线平稳后方可进样，流动相用到缓冲盐时，要先用10%的甲醇水冲洗1h，才可换上缓冲盐。7.3样品分析完毕，系统需用0.45µm滤膜过滤的纯甲醇冲洗1-1.5h，并用注射器吸取纯甲醇冲洗进样器，流动相中含有盐，要用10%甲醇水过渡冲洗1h，再用纯甲醇冲洗系统。7.4若发现空载系统压力升高，可先下列步骤进行排除：7.4.1将保护柱拆下，观察柱压是否正常，如果保护柱过滤芯片堵塞则予以更换。7.4.2如更换保护柱过滤芯后仍不正常，再将色谱柱拆下，观察不连接色谱柱时压力。如仍然压力很高，说明柱子没有问题。7.4.3然后依次从色谱柱往进流动相的方向查找问题，拆掉单向阀上面的螺丝，观察压力变化，如果仍然有压力，则说明单向阀可能有问题。将单向阀拆下，观察压力变化，如压力正常，则将单向阀用甲醇超声清洗30min，然后安装再观察压力变化。7.4.4如问题仍然存在，可以考虑用5%稀硝酸水和纯异丙醇清洗系统或者更换单向阀，中间一定要用超纯水过渡，再用纯甲醇清洗，接上色谱柱用甲醇再次清洗系统。注：（5%稀硝酸水溶液超声时不要超过5min，因硝酸有腐蚀金属作用）7.5检测完样品间隔3小时之内可不用关闭检测器，若超过3小时可先关闭检测器，以减少氘灯能量的损耗。7.6液相色谱仪四周应干燥清洁，切忌流动相或化学试剂溅到仪器上，产生腐蚀。7.7每年校正一次，若产生异常情况或换氘灯，则必须再校正。8.每次使用必须按要求填好仪器使用记录及维护保养记录。