KPO原料药(USP版)检验规程

1.目的制订USP版KPO质量标准、检验操作规程，使检验按规范进行操作，确保检验数据的准确可靠。2.范围适用于USP30版KPO原料药的检测和稳定性试验。3.责任质检人员负责本SOP的编写及修订。质检中心负责人负责本SOP的培训。质检人员负责本SOP的执行。4.理化性质4.1化学名称：4.2英文名称：4.3分子式：C16H14O3分子量：254.284.4CAS:4.5化学结构式：5.质量标准标准依据：USP30项目指标方法性状白色或几乎白色结晶或结晶性粉末内控鉴别∶A.红外吸收B.紫外吸收供试品的红外图谱与KPOUSP标准品的图谱一致供试溶液的紫外图谱与KPOUSP标准溶液的图谱一致；两者在258nm处吸收系数的差异不超过3.0%。USP197KUSP197U熔距92.0℃～97.0℃USP741ClassI比旋度(以干品计)+1°～-1°USP781S干燥失重NMT0.5%USP731炽灼残渣NMT0.2%USP281重金属NMT0.002%USP231MethodII色谱纯度单个杂质总杂质NMT0.2%NMT1.0%USP含量（以干品计）98.5%～101.0%USP残留溶剂乙醇氯仿甲苯NMT2000ppmNMT60ppmNMT200ppm内控有限公司题目：KPO（USP30）版检验规程文件编号:TP-C-101-BPage3of11批准人签名/日期：生效日期：6.检验规程6.1性状取样品适量，在自然光下观察，外观应为白色或几乎白色结晶性粉末。6.2鉴别A.红外吸收197Ka）仪器：傅立叶红外光谱仪b）试剂：溴化钾（光谱纯）c）标准品：KPOUSP标准品d）制样方法：取供试品约2～3mg，置于玛瑙研钵中研细，加约150mg溴化钾，研细，将样品分散均匀，压片，作为供试片；同法制备标准片。不加样品，同法制备溴化钾空白片。e）测定：按照红外分光光度计的操作规程操作，设定扫描范围为650～3800cm-1，先扫描溴化钾空白片，作为空白；再依次扫描标准片和供试片。如测定条件没有变化，标准图谱每半年制备一次。f）结果判定：供试品的红外图谱应与KPOUSP标准品的图谱一致。B.紫外吸收197Ua）仪器：紫外分光光度计b）试剂：无水甲醇（分析纯）c）标准品：KPO标准品d）溶剂：无水甲醇-水=3:1e）溶液制备：分别取KPO样品和标准品适量，精密称定，置于容量瓶（V,ml）中，用溶剂溶解并稀释至刻度，混匀，溶液的浓度均约为1mg/ml。量取1.0ml，用溶剂稀释至100ml，混匀。供试溶液和标准溶液的浓度均约为10µg/ml。f）测定按照紫外分光光度计操作规程，使用1cm厚度的比色池，以溶剂为空白，在200～400nm范围之内分别扫描供试溶液和标准溶液的紫外图谱。在KPO最大吸收波长258nm处，分别测定供试溶液和标准溶液的吸收度，计算吸收系数及吸收系数的相对偏差。g）计算公式有限公司题目：KPO（USP30）版检验规程文件编号:TP-C-101-BPage4of11批准人签名/日期：生效日期：吸收系数Ei＝干燥失重）（%100WVAii吸收系数相对偏差＝%100||112EEE其中：Ai为供试溶液和标准溶液的吸收度；Wi为供试品和标准品的称样量，g；E1、E2分别为KPO标准品、供试品的吸收系数。V为第一步稀释的体积。h）结果判定：供试溶液的紫外图谱应与标准溶液的紫外图谱一致；两者在258nm处吸收系数的差异不超过3.0%。6.3熔距6.3.1仪器：数字熔点仪6.3.2用具：毛细管：长10cm，内径0.8～1.2mm，壁厚0.2～0.3mm，一端熔封。6.3.3测定：取干燥失重项下的样品研磨成粉末，取一端封闭的玻璃毛细管，装入适量的干燥粉末，在硬物表面轻扣使形成2.5～3.5mm的柱。加热使升温至62℃时，继续加热并控制加热速度为3.0℃/min，当温度升至88℃时，控制加热速度为1～2℃/min，直至样品全部溶化。读取供试品初熔点和终熔点温度。每批样品测定3次。6.4比旋度6.4.1仪器：旋光仪6.4.2试剂：无水乙醇（分析纯）6.4.3溶液制备：取本品约0.5g，精密称定于50ml棕色容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试溶液（溶液从制备到测定完毕应在30分钟内完成）。6.4.4测定按照旋光仪的操作规程，在589nm波长，使用同一个1dm长的测定管，先用无水乙醇充分洗涤后，再用该溶剂充满测定管，在25℃±0.5℃的水浴下平衡后，测定旋光度，作为空白调零；再取供试溶液，洗涤测定管3次，并用该溶液充满测定管，在相同条件下，测定旋光度α，连续测定3次，以3次测定的平均值作为供试溶液的旋光度α值。6.4.5计算公式有限公司题目：KPO（USP30）版检验规程文件编号:TP-C-101-BPage5of11批准人签名/日期：生效日期：按干品计算比旋度，应符合规定。比旋度＝干燥失重）（α%10050W式中：W：样品称样量，g；α：供试溶液的旋光度。6.5干燥失重6.5.1仪器：真空干燥箱。6.5.2测定：取在干燥箱内恒重的扁形称量瓶，称重；加入本品约1g，精密称定，振动使分布均匀。按减压干燥法，在真空干燥箱中干燥4小时，精密称定。平均减失重量不得大于0.5%。记录真空度、干燥的起始和结束时间。6.5.3计算公式：干燥失重(%)=0121W-－×100%式中：W0：空称量瓶的重量，g；W1：干燥前样品加称量瓶的重量，g；W2：干燥后样品加称量瓶的重量，g。6.6炽灼残渣取于600±50℃炽灼30分钟并放冷至室温的坩埚，精密称定；加入本品约1.0g，精密称定，加硫酸约1ml使样品润湿，先于电炉上缓缓加热至完全炭化，取下，放冷至室温，加硫酸1ml使残渣润湿，再于电炉上加热至蒸汽除尽后，放在600±50℃的高温炉中炽灼至恒重，移置干燥器中，放冷至室温，精密称定。如果残渣的量超出限度，再加1ml硫酸湿润残渣，同上同法操作，直至恒重。炽灼残渣(%)=0102W-－×100%式中：W0：空坩埚的重量，gW1：炽灼前样品加坩埚的重量，gW2：炽灼后样品加坩埚的重量，g6.7重金属6.7.1标准溶液有限公司题目：KPO（USP30）版检验规程文件编号:TP-C-101-BPage6of11批准人签名/日期：生效日期：量取4.0ml标准铅溶液(10µg/ml)放入50ml比色管，加入10ml的盐酸（6mol/L）。6.7.2供试溶液称取本品约2.0g，放入坩埚，加入适量的硫酸使之润湿。低温灼烧至焦。（灼烧时可用盖子覆盖坩埚）,向该炭化物中加入2ml硝酸和5滴硫酸，小心加热至无白烟生成。放入550～650℃马弗炉灼烧，直至炭完全烧掉（不超过两个小时）。若有少量碳残留，可先冷却残留物，然后加入少量硝酸，蒸发后再次灼烧。冷却，加入5ml盐酸（6mol/L），盖好盖子，在蒸汽浴上加热10分钟。冷却，转入比色管，用5ml盐酸（6mol/L）冲洗坩埚两次，淋洗液倒入50ml比色管。6.7.3监测溶液量取4.0ml标准铅溶液(10µg/ml)放入一个坩埚，加入约为0.2g供试品。在蒸汽浴上蒸发至干，与供试液灼烧同样的时间。冷却，加入5ml盐酸（6N），盖好，在蒸汽浴上加热10分钟。冷却，转入试管，用5ml盐酸（6N）冲洗坩埚两次，淋洗液倒入50ml比色管。6.7.4硫代乙酰胺-甘油碱性试液TS：取硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100ml，摇匀，置冰箱中保存。临用前取混合液(由1mol/l氢氧化钠溶液15ml、水5.0ml及甘油20ml组成)5.0ml，加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml，置水浴加热20秒钟，冷却，立即使用。根据用量按照比例稀释。6.7.5测定以上每个溶液中，逐滴加入氨水，调节标准溶液、供试液和监测溶液的pH值至9。冷却，再逐滴加入冰醋酸，调节pH值至8，然后再多加入0.5ml冰醋酸。使用小范围pH试纸作为外用指示剂检查它们的pH值，用醋酸（1mol/L）或氨水（6mol/L）调节pH到3.0～4.0。用水稀释到40ml，加入2mlpH为3.5的醋酸盐缓冲溶液，再加入1.2ml硫代乙酰胺-甘油碱性试液TS，加水稀释到50ml，混合均匀，静置2分钟。6.7.6结果判定：在白色背景上向下看，供试液的颜色不得深于标准溶液；监测溶液的颜色与标准溶液的一致和略深。6.8色谱纯度6.8.1仪器：高效液相色谱仪6.8.2试剂：a.乙腈(色谱纯)b.磷酸二氢钾（KH2PO4，分子量136.09）(分析纯)c.纯化水6.8.3标准品：a.KPO标准品有限公司题目：KPO（USP30）版检验规程文件编号:TP-C-101-BPage7of11批准人签名/日期：生效日期：b.苯甲酸6.8.4色谱条件：a)色谱柱：YMC公司，YMC-C18，4.6mm×150mm，3µm；b)pH3.5缓冲液：称取68.0g磷酸二氢钾，用水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调pH值为3.50±0.05，过滤。c)流动相：水-乙腈-pH3.5缓冲液=550:430:20配制方法：用适宜的量筒分别量取过滤的水550ml，乙腈430ml和pH3.5缓冲液20ml，于一试剂瓶中，充分混匀。在超声波上脱气10分钟。也可按照待测样品的数量，按照比例配制适量的流动相。d)检测波长：233nm；e)流速：1.0ml/min；f)进样量：20µl。6.8.5溶液制备a)系统适用性溶液：分别量取0.5ml标准贮备溶液和苯甲酸贮备溶液1.0ml至10ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混合均匀。KPO和苯甲酸的浓度依次约为0.01mg/ml和0.005mg/ml。b)苯甲酸贮备溶液：称取苯甲酸标准品5.0mg，置100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，混合均匀。c)标准溶液：标准贮备溶液：称取KPO标准品约10.0mg，置50ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，混合均匀。精密量取1.0ml至100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混合均匀。浓度约为0.002mg/ml。d)供试溶液：称取KPO样品约100mg，精密称定，置100ml棕色容量瓶中，加适量流动相，用超声波使溶解，放冷至室温，用流动相稀释至刻度，混合均匀。以上溶液采用棕色容量瓶，并避光操作。6.8.6测定a)仪器准备按照高效液相色谱仪操作规程准备仪器，设定流速为1.0ml/min，设定检测波长为233nm。待仪器平衡后，开始进样操作。b)系统适用性试验：取系统适用性溶液进样，记录色谱图，苯甲酸和KPO的相对保留时间依次月为0.8和1.0；苯甲酸和有限公司题目：KPO（USP30）版检验规程文件编号:TP-C-101-BPage8of11批准人签名/日期：生效日期：KPO的分离度R至少为4。色谱柱的理论塔板数N以KPO峰计算，应不少于2250；KPO峰的拖尾因子T，不大于2.0。标准溶液连续进样6次，记录色谱图，其主峰面积的RSD≤5%。c)溶剂空白：取流动相进样，记录色谱图。在供试溶液的图谱中忽略溶剂峰。d)样品测定取供试溶液进样，记录色谱图至主峰保留时间的7倍，以峰面积计算杂质的含量。6.8.7计算公式按公式(1)计算KPO中单个杂质含量；按公式(2)计算KPO中总杂质的含量。单个杂质(%)＝50%100AsWiPAiWs公式(1)总杂质(%)＝50%100iAsWiPAWs公式(2)式中：WS→KPO标准品的重量，g；Wi→KPO的样品的重量，g；Ai→供试溶液色谱图中单个杂质的峰面积；As→标准溶液色谱图中主峰的峰面积；P→KPO标准品的含量。Ai→公式溶液色谱图中总杂质的峰面积，也等于Ai＝A总面积－AKPO。6.8.8结果判定：供试品中单个杂质不大于0.2%，总杂质不大于1.0%。6.9含量6.9.1仪器：滴定管6.9.2试剂a.95%乙醇(分析纯)b.酚红试液：取100mg苯酚红，用乙醇（95%）溶解并稀释至100ml，必要时过滤。c.氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)6.9.3测定精密称取样品约450mg于250ml锥形瓶中，加