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APIZYM用于研究酶的活性APIZYM是一个半定量的微量方法系统，专为研究酶活所设计的。该技术对各种标本(组织、细胞、生物体液、洗涤水、土、油，等)都适用。它可系统和快速地研究19种酶的活性。用样量极少。APIZYM不是在光谱法或电泳法所得的精确度范围，而主要可从没有纯化的混合样品中测定酶活性。它可用于筛选样品，由此提供酶谱测定，然后进一步用光谱或电泳法测定。原理APIXYM试验条是由20个小管所组成，它的底部是一个专门设计含有酶底物和缓冲液的支持物。这个支持物可以接触被测的酶和不溶的底物。一套APIZYM可进行25次测定，包括：-25个APIZYM试验条；-25个培养盘；-25份报告单；-1份说明书为了使用APIZYM，以下条件是必需的：-吸管或PSI管(#97560)或(#70250)-安瓿架(#70200)-悬浮液培养基(#20110)或无菌蒸馏水-ZYMA和ZYMB试剂(#70470和70480)-McFarland标准(#70900)标准试验室设备；培养箱、冰箱、本生煤气灯、记号笔贮存：APIZYM试验条在有效期内应贮于2-80C(有效期标在每个包装上)。除了ZYMA之外，其它试剂应贮存于2-80C。因ZYMA在这个温度下会形成沉淀，虽沉淀并不影响试剂的任何性质，在600C时会再溶解，但最好还是在室温下贮存。ZYMB对光敏感，产生粉色说明巳分解了。它应保存在黑暗中、最好将其安瓿外包铝箔纸，并臵冰箱中。试剂的组成：ZYMA：三羟甲基-氨基-甲烷25g盐酸(37%)11g月桂硫酸盐10g蒸馏水100mlZYMB：坚牢兰BB0.35g2-甲氧基乙醇100ml使用说明1.标本准备在最小体积稀释标本：可用2ml无菌蒸馏水或其它如普通的生理盐水不需要缓冲液。微生物：制备一个菌悬液，其混浊度在McFarlandNo5和No6之间。从斜面或离心肉汤培养物的纯菌种都能用来制备菌悬液。为了得到重复性高的结果，以下几点是重要的：比较在同样分离培养基上的最初生长速度；稀释度要相同；菌悬液具有相同的光密度。该技术用于结构酶的测定。诱导酶以加入相应的诱导剂到培养基中测得。如果测定时无生长物出现，可能灭菌没有特别小心或培养需要厌氧条件。细胞悬液(细胞培养物，游动精子)：标本离心，沉淀物以无菌蒸馏水调至含细胞105-107/毫升，浓度根据该标本的酶活性高低而定。组织：标本取吸管底部几毫克组织，悬浮于2毫升蒸馏水中。生物体液：可直接用不稀释的体液。如果原液的酶活性太强的话，可以稀释。如果标本的体积不够(少于2毫升)，可用蒸馏水加至2毫升。2.试验条的准备准备一个培养盘和盖子。记标本号于盘的侧面。可使用一个塑料挤瓶，分装约5ml自来水于培养盘内，为了培养时能保持一定的湿度。从密封的包装中取出APIZYM试验条，臵培养盘内。3.试验条的接种用吸管接种，于试验条的每个杯中接入2滴标本(65微升)。4.试验条培养接种后，托盘上放塑料盖子，一般培养于370C，4小时。培养的时间与温度，应取决于所测样品。不论如何，样品的比较，必需所有的测定条件(时间、温度、培养基、悬液浓度)都要一致。接种的试验条不能臵有光处。5.试验条的结果观察培养后，加1滴ZYMA试剂和1滴ZYMB试剂。待5分钟后生色，如果是阳性，臵试验条于一个强的光源(1000瓦灯泡)下10秒，放灯泡于杯的上面4秒。这过程是为消除杯中多余坚牢兰的黄颜色不是反应。暴光以后阴性反应变为无色。再臵试验条于日光下几分钟后，就可产生比较的结果。6.记录反应0-5标记相应的颜色深度。0相当于阴性反应；5为最强的反应。2-4是二者之间的强度。从颜色深度可知近似的毫微克分子浓度(nM)：1相当释放5微毫克分子浓度(5nMo1.)，2相当于10nM；3为20nM；4为30nM组5为40nM或更高。7.处臵已接种的试验条在加入试剂后，所产生的颜色可稳定地保持几小时。结果读后，试验条在室温下干燥，并贮于干燥的空气中。所有有害物或致病材料(试验条和培养盒)在处臵之前，都应用高压灭菌，烧毁或浸于杀菌剂中。质量控制培养基、试验条和试剂在有效期的不同时间内都应受到系统的质控，在试验室可用以下细菌或酶制剂作进一步的细菌学和生化检查。得到以下结果：12345678910111213141516171819201.//V2.VVVVV3.VVV1.多形拟杆菌BacteroidesthetaiotaomicronATCC84922.β-葡萄糖甙酶β-GlucosidaseSigma86253.α-凝乳胰蛋白酶.α-ChymotrypsinSigmaC4129APIZYM生化反应表号测定的酶底物PH结果阳性阴性1对照无色；或如样品有深色，则为样品的颜色2碱性磷酸盐酶2-萘基磷酸盐8.5紫色一无色或如果试验条加入试剂后暴露在强光下，则为对照的颜色。一如果试验条不放在强光下，则为极浅黄色。3酯酶(C4)2-萘基丁酸盐6.5紫色4类脂酯酶(C8)2-萘基辛酸盐7.5紫色5类脂酶(C14)2-萘基十四酸盐7.5紫色6白氨酸芳胺酶L-白氨酰-2-萘胺7.5橙色7缬氨酸芳胺酶L-缬氨酰-2-萘胺7.5橙色8胱氨酸芳胺酶L-胱氨酰-2-萘胺7.5橙色9胰蛋白酶N-苯甲酰-DL-精氨酰-2-萘胺8.5橙色10胰凝乳蛋白酶N-戍二酰-苯基丙氨酸2-萘胺7.5橙色11酸性磷酸酶N-萘基-磷酸盐5.4紫色12萘酚-AS-BI-磷酸水解酶萘酚-AS-BI-磷酸盐5.4兰色13α-半乳糖甙酶6-溴-2-萘基-αD-半乳糖呲喃糖甙5.4紫色14β-半乳糖甙酶2-萘基-βD--半乳糖吡喃糖甙5.4紫色15β-糖醛酸甙酶萘酚-AS-β一D-糖醛酸甙5.4兰色16α-葡萄糖甙酶2-萘基-αD-吡喃葡萄糖甙5.4紫色17β-葡萄糖甙酶6-溴-2-萘基-βD-呲喃葡萄糖甙5.4紫色18N-乙酰-葡萄糖胺酶1-萘基-N-乙酰-βD-葡萄糖胺5.4棕色19α-甘露糖甙酶6-溴-2-萘基-αD-呲喃甘露糖甙5.4紫色20β-岩藻糖甙酶2-萘基-αL-吡喃果糖甙5.4紫色